發(fā)布時間：2020-08-28 16:44

　　 研究背景:種植義齒已成為牙列缺損及牙列缺失患者的治療首選~([1]),種植義齒十年存留率已達97.1%,但其生物學(xué)并發(fā)癥并無明顯降低~([2])。種植體周圍黏膜炎及種植體周圍炎導(dǎo)致種植失敗的病例約占失敗總數(shù)的30%以上~([3-4])。因此,要預(yù)防種植體周圍黏膜炎及種植體周圍炎的發(fā)生并阻止其進一步發(fā)展,以提高種植義齒存留率。與天然牙相似,種植體周圍黏膜炎發(fā)生的始動因素也是頸部菌斑生物膜的形成。當(dāng)種植體周發(fā)生炎癥時,其主要菌群從G+菌轉(zhuǎn)變?yōu)镚-菌,其中牙齦卟啉單胞菌是被公認為與種植體周圍炎癥發(fā)生發(fā)展甚至種植體最終脫落關(guān)系最為密切的細菌~([5-6])。因此,如何有效地清除種植體表面的菌斑生物膜成為預(yù)防和治療種植體周圍炎的技術(shù)關(guān)鍵。近期研究發(fā)現(xiàn)微生物中含有多種D-氨基酸,但只在細菌生長進入平臺期后D-氨基酸的含量才開始增多~([7])�？莶輻U菌在生物膜分散期合成的D-酪氨酸、D-亮氨酸、D-甲硫氨酸和D-色氨酸可抑制其游離細菌形成生物膜,并能觸發(fā)成熟生物膜的分散~([8])。而這些D-氨基酸對生物膜的抑制作用可分別被對映異構(gòu)的L-氨基酸抑制~([9])。而且不同個體的金黃色葡萄球菌對D-氨基酸的敏感性明顯不同,D-氨基酸的聯(lián)合使用可達到最佳的破壞生物膜的作用~([10])。D-氨基酸與生物膜之間的關(guān)系受到各大學(xué)者的關(guān)注,但D-氨基酸對牙齦卟啉單胞菌生物膜的作用尚不明確。目的:本研究旨在探討D-纈氨酸對牙周及種植體周致病菌-牙齦卟啉單胞菌生物膜形成的影響。研究結(jié)果可能為臨床上預(yù)防和治療種植體周圍炎新藥的研制提供理論依據(jù)。方法:本實驗在腦心浸液培養(yǎng)基(BHI)中培養(yǎng)牙齦卟啉單胞菌(P.g ATCC33277),通過腦心浸液液體培養(yǎng)基進行增菌。并繪制牙齦卟啉單胞菌生長曲線,選擇指數(shù)生長期的菌液進行下一步實驗。通過對不同菌液濃度下形成的生物膜進行熒光顯微鏡觀察,確定生物膜形成最佳的菌液濃度。結(jié)晶紫染色法檢測D-纈氨酸對牙齦卟啉單胞菌生物膜生物量的影響,苯酚硫酸法檢測D-纈氨酸對牙齦卟啉單胞菌生物膜產(chǎn)生的胞外多糖含量的影響,并通過掃描電子顯微鏡觀察D-纈氨酸對牙齦卟啉單胞菌生物膜形態(tài)的影響。結(jié)果:1、牙齦卟啉單胞菌生長曲線在第48小時開始呈指數(shù)增長,在第60小時達到穩(wěn)定期。2、牙齦卟啉單胞菌菌液濃度10~8CFU/mL形成的生物膜呈網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu),均勻,連接緊密。而菌液濃度10~7CFU/mL形成的生物膜結(jié)構(gòu),有的為異質(zhì)網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu),不均勻,連接稀疏。然而,由10~9CFU/mL形成的生物膜是不規(guī)則的細菌聚集而沒有特定的結(jié)構(gòu),生物膜連接不連續(xù)。3、D-纈氨酸在濃度≥20mM時抑制牙齦卟啉單胞菌生物膜的聚集,與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異(P≤0.05)。D-纈氨酸的抑制作用呈濃度依賴性。濃度越高,抑制作用越明顯。D-纈氨酸在0.1mM至10mM的濃度范圍內(nèi),牙齦卟啉單胞菌生物膜生物量與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。4、D-纈氨酸在濃度≥50mM時降低了牙齦卟啉單胞菌胞外多糖的產(chǎn)量,與對照組相比,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P≤0.05)。而D-纈氨酸在0.1mM至40m M的濃度范圍內(nèi),與對照組相比,D-纈氨酸對牙齦卟啉單胞菌生物膜的作用無統(tǒng)計學(xué)差異。5、掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)牙齦卟啉單胞菌的生物膜在對照組(0mM D-纈氨酸組)和0.1mM D-纈氨酸組之間沒有明顯差異,兩組細菌生物膜均由多層細菌組成,細菌之間連接緊密。牙齦卟啉單胞菌的生物膜在1mM至40mM濃度的D纈氨酸作用下沒有顯著差異,由單層細菌組成,細菌數(shù)量明顯減少,細菌之間連接疏松。在50mM到150m M濃度的D纈氨酸作用下,細菌生物膜聚集量顯著降低,并且不能連接成膜。在100mM到150mM高濃度的D-纈氨酸作用下牙齦卟啉單胞菌形態(tài)改變。結(jié)論:1、D-纈氨酸濃度≥20mM時能降低P.g ATCC33277生物膜的生物量。2、D-纈氨酸濃度≥50mM時能減少P.g ATCC33277生物膜胞外多糖的產(chǎn)生。3、D-纈氨酸濃度≥1mM時,生物膜細菌數(shù)量明顯減少,生物膜不連續(xù)。在100m M-150m M范圍內(nèi),牙齦卟啉單胞菌形態(tài)改變。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R783.6
【部分圖文】：

第 3 章 結(jié)果第 3 章 結(jié)果3.1 牙齦卟啉單胞菌的生長曲線P.g ATCC 33277 的生長曲線如圖 3.1 所示。從第 24h-48h 牙齦卟啉單胞菌生長平緩，牙齦卟啉單胞菌從第 48 小時開始指數(shù)增長，在第 60 小時達到穩(wěn)定期，從第 60h-76h 牙齦卟啉單胞菌生長一直處于穩(wěn)定平臺期。

3.2 109CFU/mL(A),108CFU/mL(B) and 107CFU/mL(C) 菌液濃度g ATCC 33277 生物膜形態(tài)的熒光顯微觀察(×4,×10,×20,×3 結(jié)晶紫染色法測定不同濃度 D-纈氨酸對 P.g ATCC 33277 生物量的影響結(jié)晶紫染色法測定生物膜生物量結(jié)果如圖 3.3。D-纈氨酸濃mM 時，P.g ATCC 33277 生物膜生物量顯著降低，與對照組相統(tǒng)計學(xué)差異（P ≤0.05）。D-纈氨酸的抑制作用呈濃度依賴度越高，抑制作用越明顯。D-纈氨酸濃度在 0.1mM 至 10mM 范圍

結(jié)晶紫染色測定不同濃度D-纈氨酸對P.gATCC33277生物膜生物量的影響（*P<0.05）

【參考文獻】

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本文編號：2807856