【摘要】：目的運(yùn)用Q-PCR技術(shù)檢測(cè)以ABCG2為標(biāo)記物流式細(xì)胞儀分選前后ACC-M細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)與腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells,CSCs)目關(guān)標(biāo)記物表達(dá)情況,初步篩選唾液腺腺樣囊性癌肺高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系腫瘤干細(xì)胞亞群,并結(jié)合EMT與CSCs學(xué)說(shuō)討論其意義。 方法(1)10ng/ml TGF-β1誘導(dǎo)培養(yǎng)ACC-M細(xì)胞72h,Q-PCR監(jiān)測(cè)ACC-M細(xì)胞EMT相關(guān)標(biāo)記物E-cadherin.N-cadherin.Vimentin. MMP-2及CSCs相關(guān)標(biāo)記物Bmi-1、Oct-4、CD44、CD24表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TGF-p1對(duì)ACC-M細(xì)胞中ABCG2+細(xì)胞比例的調(diào)節(jié)變化。(3)以ABCG2為標(biāo)記物,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)前后ACC-M細(xì)胞進(jìn)行分選,實(shí)驗(yàn)共分為6組,即A1:TGF-β1誘導(dǎo)-、B1:TGF-β1誘導(dǎo)+、A2:TGF-β1誘導(dǎo)一ABCG2+、B2:TGF-β1誘導(dǎo)+ABCG2+、A3:TGF-β1誘導(dǎo)-ABCG2-、B3:TGF-β1誘導(dǎo)+ABCG2-,Q-PCR檢測(cè)6組細(xì)胞EMT及CSCs相關(guān)標(biāo)記物的表達(dá)情況。 結(jié)果(1)EMT相關(guān)標(biāo)記物：上皮表型標(biāo)記物E-cadherin隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸減弱,間質(zhì)表型標(biāo)記物N-cadherin與Vimentin.EMT輔助因子MMP-2隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸增強(qiáng)；CSCs相關(guān)標(biāo)記物：轉(zhuǎn)錄因子Oct-4、粘附分子CD24隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸減弱,原癌基因Bmi-1粘附CD44隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸增強(qiáng)；EMT的發(fā)生與CSCs相關(guān)標(biāo)記物表達(dá)密切相關(guān)。(2)經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)后,ABCG2+細(xì)胞比例由3.06%增加至6.66%。(3)誘導(dǎo)前后未分選組、ABCG2+組及ABCG2-組各指標(biāo)表達(dá)情況：①誘導(dǎo)前后,上皮表型標(biāo)記物E-cadherin均在ABCG2-組表達(dá)最高,未分選組表達(dá)稍低,ABCG2+組表達(dá)最低；②誘導(dǎo)前后,間質(zhì)表型標(biāo)記物N-cadherin.EMT輔助因子MMP-2、原癌基因Bmi-1及轉(zhuǎn)錄因子Oct-4均在ABCG2-組表達(dá)最低,未分選組表達(dá)稍高,ABCG2+組表達(dá)最高；③粘附分子CD44誘導(dǎo)前在各組表達(dá)無(wú)明顯差異,而誘導(dǎo)后則表現(xiàn)為ABCG2+組最高,ABCG2-組與未分選組表達(dá)無(wú)明顯差異；④誘導(dǎo)前后,間質(zhì)表型標(biāo)記物Vimentin與粘附分子CD24在三組的表達(dá)均無(wú)明顯差異。未分選組.ABCG2+組及ABCG2-組誘導(dǎo)前后均表現(xiàn)為：①TGF-β1誘導(dǎo)組較未誘導(dǎo)組低表達(dá)E-cadherin.Oct-4.CD24;②TGF-β1誘導(dǎo)組較未誘導(dǎo)組高表達(dá)N-cadherin.Vimentin.MMP-2、Bmi-1及CD44。 結(jié)論(1)TGF-p1可誘導(dǎo)ACC-M細(xì)胞發(fā)生EMT;EMT發(fā)生同時(shí),伴隨有ACC-M細(xì)胞中SPCs亞群表型表達(dá)增強(qiáng),且SPCs較非SPCs更易發(fā)生EMT改變。(2)Bmi-1、Oct-4、CD44與CD24參與ACC-M細(xì)胞中CSCs亞群比例的調(diào)節(jié),且Bmi-1可能是ACC-M細(xì)胞中CSCs特殊標(biāo)記物之一。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.87

【參考文獻(xiàn)】

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1 溫玉明;劉坤;華成舸;潘劍;李龍江;陳紹維;王昌美;高慶紅;;腺樣囊性癌細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性初探[J];中國(guó)口腔頜面外科雜志;2006年04期

2 趙俊卿;李云峰;楊之斌;;腫瘤細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變機(jī)制的研究[J];腫瘤;2010年10期

本文編號(hào)：2806805