【摘要】：血管生成對骨的發(fā)育、改建和愈合起著重要的作用。血管內皮細胞生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)是1989年Ferrara等在牛垂體濾泡星狀細胞體外培養(yǎng)液中首先分離純化出來的糖蛋白，它是內皮細胞的特異性有絲分裂原，也是一種有效的血管形成和血管通透性誘導因子。自被發(fā)現以來，VEGF的家族成員逐步增加，目前在哺乳動物中已發(fā)現有六種就是：VEGF、胎盤生長因子(PLGF)、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和VEGF-E。參與VEGF發(fā)揮生物功能的受體目前有四種：VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3和神經菌毛蛋白(neuropilin)。VEGF可能是調節(jié)其他骨生長因子重要的介質。目前，許多學者正在致力于應用重組的VEGF進行治療性的血管生成和轉基因技術在骨形成方面的應用研究。 血管內皮生長因子(VEGF)一直被認為是生理和病理的血管生成的重要調節(jié)因子，骨形成是和血管生成密切相關的，血管的侵入是骨化的先決條件。在骨的發(fā)育和骨的再生、再塑過程中，血管的生成和骨及軟骨重塑是一個必須的過程，而且它們是相互影響和緊密聯系的。組織學研究發(fā)現：成骨細胞和成骨樣細胞總是比鄰存在于新骨形成區(qū)域的血管上皮細胞附近，在骨的重塑過程中毛細血管上皮細胞提供了微脈管系統(tǒng)。目前己基本確認血管 第四軍醫(yī)大學博士學位論文 的侵入是骨形成的必要條件。這些結果均提示在骨的發(fā)育和骨的 再生再塑過程中有一個共同的調節(jié)因子。 目前已確認VEGF做為血管生成因子可由多種類型細胞產生， 包括成纖維細胞、平滑肌細胞、肥大軟骨細胞、成骨細胞等，自 Ferr盯a和Henzel首次分離出血管內皮細胞生長因子以來，眾多學 者對其家族成員和其受體進行了廣泛和深入的研究。已有大量有 力的證據證明VEGF家族成員在血管上皮細胞和成骨細胞的生成 和分化過程中起有至關重要的作用。再者VEGF調節(jié)的血管生成 是骨形成的必要條件，因為增加VEGF的表達可以刺激骨形成。 近年來，在了解血管生成和骨形成之間密切關系的細胞機制方面 取得了重大進展。因此，VEGF可能是以上生物過程中必須的調節(jié) 因子。 目前對VEGF和骨發(fā)生作用機制之間關系的研究多集中于骨缺 損及修復方面，關于VEGF與機械力介導的正畸成骨的相關性研究 尚未見報道。在最近的研究中有學者證明:在骨缺損的動物模型 中外源性的VEGF可以促進血管的形成和骨化。因此，VEGF有可 能在促進骨形成方面應用于臨床，在這方面的進一步的研究是有 廣闊前景的。正畸牙齒移動過程的實質是牙及牙周組織的改建過 程，其中尤以牙槽骨的改建最為重要，它是骨吸收和骨形成的動 態(tài)平衡過程，這一過程機制復雜，受多種因子的調節(jié)。VEGF可能 對成骨細胞等多種細胞的遷移和分化有作用，與骨改建可能有顯 著相關性。本研究擬從細胞水平以及分子水平探討正畸牙齒移動 過程中牙周組織的改建和修復機制，以及研究VEGF對加速組織 修復和牙齒移動的影響及作用機制，為正畸移動牙齒進一步提供 理論和實踐依據。本研究內容如下: 一正畸牙周組織改建過程中VEGF表達變化的研究 目的:觀察大鼠正畸牙齒移動的牙周組織改建過程中VEGF表達 的變化，探討vEGF與正畸牙齒移動的關系。方法:(l):建立大 第四軍醫(yī)大學博士學位論文 鼠磨牙移動實驗模型，在1、3、7、14、Zld后，處死大鼠，固定， 制作第一磨牙牙周組織切片，HE染色觀察牙周組織形態(tài)學變化， 免疫組化進行半定量分析VEGF:6;的表達。結果:VEGF在正常大 鼠牙周組織中表達很弱甚至不表達，牙齒移動1d后，牙周組織細 胞VEGF表達增強，7d、14d后表達達到高峰，此時亦可看到成骨 細胞胞漿呈強表達，以后VEGF表達有所下降，但仍高于對照組。 (2):在大鼠上領第一磨牙根分叉處注射rRVEGF并加力，于加力后 l、3、7、14、Zld測量牙齒移動距離。免疫組化進行半定量分 析VEGF16;的表達。結果:VEGF注射組牙齒移動速度高于對照組。 結論:vEGF參與了正畸牙周組織改建過程，在組織修復過程中可 能起到很重要的作用。 二.機械力加載下人牙周膜細胞和大鼠成骨細胞中VEGF的表 達變化研究 目的:觀察機械力加載下人牙周膜細胞和大鼠成骨細胞中 VEGF 的表達變化情況的研究，在細胞水平探討VEGF與正畸牙齒移動 的關系。方法:(1):培養(yǎng)人牙周膜細胞并做鑒定，利用細胞加力 裝置，持續(xù)施加牽張力，分別于1、3、5、7d取材，用免疫組化 和原位雜交技術，檢測細胞中VEGF的表達。結果:隨著加載時間 的延長，VEGF表達強度明顯增強，陽性細胞數顯著增加，對機 械力反應明顯，在5d達到高峰后又有下降趨勢。(2):培養(yǎng)大鼠 的成骨細胞并做鑒定，利用細胞加力裝置，持續(xù)施加牽張力，分 別于1、3、5、7d取材，用免疫組化和原位雜交技術，檢測細胞 中VEGF的表達。結果:隨著加載時間的延長，VEGF表達強度明 顯增強，陽性細胞數顯著增加，對機械力反應明顯。結論:本實 驗從蛋白和基因水平證實人牙周膜細胞及大鼠成骨細胞在機械力 作用下分泌的VEGF參與了牙周組織的修復和改建。 三.細胞因子對機械力加載下人牙周膜細胞中VEGF表達的影響 目的:觀察BMP及TGF一p對人牙周膜細胞VEGF表達?
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R783.5
【圖文】：

第四軍醫(yī)大學博創(chuàng)卜學位論文表明本實驗成功建立了大鼠正畸牙移動及牙槽骨改建模型。2.2免疫組織化學染色結果(附圖3、4、5、6)正常大鼠的牙周組織中基本上未見有明顯的VEGF的陽性表達，在個別片子中可見到極淺的棕黃色著色。正畸加力組大鼠牙周組織中VEGF表達增強，表達貫穿正畸牙周組織改建的全過程，血管內皮細胞、成纖維細胞、成骨細胞和破骨細胞胞漿內可見其陽性表達。ld組壓力側檢測到有散在的VEGF的陽性信號，3d組壓力側VEGF表達增強，張力側也有VEGF的表達，7、14d為表達高峰期，Zld組VEGF表達又有所減弱(見表3、圖3)。表3正畸組與對照組大鼠牙周組織中VEGF表達的半定量分析(x士s)正常對照組加力ld組加力3d組加力7d組加力14d加力Zld組張力側(T)壓力側(P)101士108士3.7113士3.1142士3.6*149士2.9*110士2，8103士2.120士3.2*125士2.1*136士3.5*148士2.7*107士2.經SPSS10.O統(tǒng)計軟件分析進行獨立樣本非參數檢驗

圖4VEGF注射組和對照組在張力側和壓力側VEGF免疫組化的圖象分析結果3.討論我們已經知道一些化學調節(jié)介質，如前列腺素、1，25一(OH)2D3也可通過增加破骨細胞來加速牙齒的移動。與這些因子相比，VEGF可誘導血管生成，更適用于調節(jié)創(chuàng)傷的愈合。因此，在正畸牙齒移動中，牙槽骨的改建是骨吸收和新骨形成的動態(tài)平衡過程。這一過程機制復雜，受多種因子的調節(jié)。VEGF是血管生成的重要調節(jié)因子，它是內皮細胞特異性最強的絲裂原，具有特異性促進血管增殖的作用，曾被稱為血管調理素(VasculotroPin，VAs)‘”。又因為它能改變血管通透性，促使血漿蛋白的滲出，形成富含纖維素并有利于新血管形成的細胞外基質，故也稱為血管滲透因子(vaseularperme汕ilityracto:，vPF)121。VEGF在許多組織和培養(yǎng)的細胞內均有表達，包括骨組織及培養(yǎng)。，，

VEGFRT一P

【引證文獻】

相關碩士學位論文 前2條

1 孫慧芳;正畸加載時機和持續(xù)時間對自體移植牙牙周修復預后的研究[D];山東大學;2011年

2 陳沖;辛伐他汀對牙周炎大鼠牙移動保持階段BMP-2、VEGF表達影響的實驗研究[D];吉林大學;2010年

本文編號：2803413