發(fā)布時(shí)間：2020-08-24 10:36

【摘要】：目的：①建立離體乳牙生理性吸收脫鈣模型,為研究兒童乳牙根生理性吸收不同時(shí)期相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。②觀察核因子κB受體活化劑配體(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)和腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(tumor necrosis factor receptor associated factors6, TRAF6)在兒童乳牙根生理性吸收過程中的表達(dá),為進(jìn)一步探索RANKL和TRAF6在兒童乳恒牙替換過程中的作用機(jī)理增添新的實(shí)驗(yàn)資料。方法：①收集兒童乳牙根生理性吸收期的乳前牙和因正畸拔除的前磨牙,按照牙根吸收分期標(biāo)準(zhǔn)分為吸收早期、吸收中期和吸收晚期三個(gè)實(shí)驗(yàn)組,因正畸拔除的前磨牙作為對照組,置于中性福爾馬林溶液固定,然后將固定好的標(biāo)本置于15%EDTA溶液,超聲輔助脫鈣,建立穩(wěn)定的離體乳牙生理性吸收脫鈣模型。②將脫鈣成功后的標(biāo)本,自牙根向牙冠沿牙體中線通過髓腔切5μm連續(xù)切片,運(yùn)用免疫組織化學(xué)的方法檢測兒童乳牙根生理性吸收過程中牙髓成纖維細(xì)胞,成牙本質(zhì)細(xì)胞以及破牙細(xì)胞胞漿表達(dá)RANKL和TRAF6,然后使用醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行圖像分析,運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件分別對實(shí)驗(yàn)組的成牙本質(zhì)細(xì)胞,牙髓成纖維細(xì)胞和破牙細(xì)胞以及對照組的成牙本質(zhì)細(xì)胞和牙髓成纖維細(xì)胞的光密度值進(jìn)行one-way ANOVA檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,比較各組間組內(nèi)差異。 結(jié)果：免疫組織化學(xué)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)一：實(shí)驗(yàn)組：RANKL蛋白在兒童乳恒牙替換過程中破牙細(xì)胞、牙髓成纖維細(xì)胞和牙髓成牙本質(zhì)細(xì)胞胞漿中染色陽性,吸收中期組累及光密度值高于吸收早期和吸收晚期組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同組實(shí)驗(yàn)中破牙細(xì)胞與成牙本質(zhì)細(xì)胞、牙髓成纖維細(xì)胞累及光密度值比較P0.01具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而成牙本質(zhì)細(xì)胞與牙髓成纖維細(xì)胞間累及光密度值比較P0.05,不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對照組：成牙本質(zhì)細(xì)胞、牙髓成纖維細(xì)胞染色均為陰性,未觀察到破牙細(xì)胞存在。 實(shí)驗(yàn)二：實(shí)驗(yàn)組：連接蛋白TRAF6在兒童乳恒牙替換過程中破牙細(xì)胞、牙髓成纖維細(xì)胞和牙髓成牙本質(zhì)細(xì)胞胞漿中染色陽性,吸收中期組TRAF6累及光密度值高于吸收早期和吸收晚期組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同組實(shí)驗(yàn)中破牙細(xì)胞與成牙本質(zhì)細(xì)胞,牙髓成纖維細(xì)胞累及光密度值比較P0.01具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而成牙本質(zhì)細(xì)胞與牙髓成纖維細(xì)胞間累及光密度值比較P0.05,不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對照組：成牙本質(zhì)細(xì)胞、牙髓成纖維細(xì)胞染色均為陰性,未觀察到破牙細(xì)胞存在。 結(jié)論：1.兒童乳牙根生理性吸收過程中破牙細(xì)胞表達(dá)RANKL免疫組織化學(xué)染色為陽性,推測RANKL可能通過自身調(diào)節(jié)參與自身的分化和功能活性,引起乳牙根的吸收。破牙細(xì)胞RANKL累及光密度值在乳牙根吸收中期組高于早期組和晚期組。提示RANKL在乳牙根吸收中期表達(dá)最強(qiáng),破牙細(xì)胞功能最為活躍。 2.兒童乳牙根吸收陷窩內(nèi)破牙細(xì)胞表達(dá)TRAF6免疫組織化學(xué)染色為陽性,提示TRAF6可能參與該細(xì)胞的分化和功能活性,引起乳牙根的吸收。破牙細(xì)胞TRAF6累及光密度值在吸收中期組高于早期組和晚期組,提示TRAF6在乳牙根吸收中期表達(dá)最強(qiáng),破牙細(xì)胞最為活躍。3.通過免疫組織化學(xué)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組破牙細(xì)胞TRAF6累及光密度值在牙根吸收早期、吸收中期和吸收晚期的強(qiáng)度變化與RANKL一致,吸收中期出現(xiàn)光密度值最高。推測在兒童乳牙根生理性吸收中期破牙細(xì)胞數(shù)量最多,功能最強(qiáng),RANKL-RANK-TRAF6軸介導(dǎo)破牙細(xì)胞的分化成熟。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R788
【圖文】：

成 牙本 質(zhì)細(xì) 胞和 牙 髓 成纖 維細(xì) 胞 比 較 P >0 . 0 1圖2 - 1 ： 實(shí) 驗(yàn) 組 各 組 破 牙 細(xì) 胞 ， 成 牙 本 質(zhì) 細(xì) 胞 和 牙 髓 成 纖 維 細(xì) 胞 表 達(dá) T RA F 6 光密 度 值 柱 形 統(tǒng) 計(jì) 0510 15 20 吸收 早 期 吸收 中 期 吸收 晚 期 光密度值破牙 細(xì) 成牙 本 牙髓 成 ## * ## 同 組實(shí) 驗(yàn)組 內(nèi)破 牙 細(xì) 胞與 成 牙 本質(zhì) 細(xì) 胞 和牙 髓成 纖維 細(xì)胞 比較 P＜ 0 .0 1 ；同 組實(shí) 驗(yàn) 組 內(nèi)成 牙本 質(zhì)細(xì) 胞和 牙 髓 成纖 維 細(xì) 胞比 較 P >0 . 0 1； *吸 收中 期與 吸收 早期 和晚 期 比 較 P ＜ 0 . 0 5； 其余 各組 比較 P> 0 . 0 5

緣 的兩 側(cè) 。 (3 ) 在 胞核 與皺 褶 緣 問充 滿 大量 的 內(nèi)吞 液 泡 (e n do c 胞 漿 的 其它 區(qū) 域 含 有豐 富 的 線 粒體 和 中 量的 粗 面內(nèi) 質(zhì)網(wǎng) ， 大 ]。電 鏡觀 察 ，絕 大 多 數(shù) 的成 熟 破 牙 細(xì)胞 都 具 有皺 褶 緣和 明帶 ) 。

四 信號 分 子R A N K L 轉(zhuǎn) 導(dǎo)通 路 R AN K L 的 信號 傳導(dǎo) 需要 TR AF 6 分 子介 導(dǎo)， 調(diào) 節(jié) TR AF 6 的 活 性可 以 影響 破牙 細(xì) 胞 的 分化 。 S hi n[ 20 ] 等發(fā) 現(xiàn)破 骨 細(xì)胞 存 在 抑 制 TR AF 6 活 性的 鋅 指蛋 白 質(zhì)（ TI Z ）, TI Z 能與 TR AF 6 的- N 端結(jié) 合， 阻 止 TR AF 6 與相 關(guān) 受 體 結(jié)合 ，抑 制 其活 性 。M i z uk am i d 等[ 21 ]發(fā)現(xiàn) 在 R AN K L 信 號 分 子 的 誘 導(dǎo) 下 ， TR AF 6 被 募 集 到 R AN K 胞 內(nèi) 區(qū) 形 成 R AN K - T R AF 6 - 轉(zhuǎn) 化 生 長 因 子 B激 活 激 酶 1( T A K 1 ) 結(jié) 合 蛋 白 2 (T A B 2) - T A K 1 復(fù) 合 物 其 中 TA B 2 是 TR AF 6 和 TA K 1 之 間 的連接 蛋 白, 而 TA K 1 屬于 絲裂 原 活化 蛋 白激 酶 (M AP K) 激酶 激酶 ( M AP KK K ) 家族 ,可 進(jìn) 一步 激 活 J NK 和 NF - KB ，也 可 直接 結(jié) 合 并激 活 c- s rc 。五TR A F 6 與破 牙 細(xì)胞 和 RA N K L 的關(guān) 系 1 T RA F s 信號 分子 的 發(fā) 現(xiàn)與 分 布 腫 瘤 壞 死 因 子 受 體 相 關(guān) 因 子 (t um or ne c r os i s fa c t o r re c e pt o r as s oc i at ed fa c t o r ， TR AF ) 在細(xì)胞 信號 傳 導(dǎo)通 路 中 發(fā) 揮重 要 作 用 ，是 一 類 遺傳 學(xué) 上保 守的 細(xì) 胞漿 內(nèi)信 號 轉(zhuǎn)導(dǎo) 分子 ， 一 類 可 與 細(xì)胞 表 面受 體 胞 內(nèi) 區(qū)域 直 接 結(jié) 合的 質(zhì) 膜 接頭 蛋 白 , 主 要是 作為 腫瘤 壞 死因 子受 體 超 家 圖 0 - 2： O PG /R A N K /R A N K L系 統(tǒng)作 用過 程

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7 本報(bào)記者 鄭穎t牎∥飧

本文編號：2802350