【摘要】：背景：口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma(OSCC))是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,全世界每年幾乎有超過(guò)350000人被診斷出患有OSCC。[1]其發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多步驟、階梯式的過(guò)程,且自始至終需要有致癌因素導(dǎo)致的遺傳學(xué)改變的不斷積累。建立與人類口腔癌相似的動(dòng)物模型,有利于探討口腔癌的病因、發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移�？谇话﹦�(dòng)物模型的建立方法有多種,化學(xué)試劑誘導(dǎo)發(fā)生口腔惡性腫瘤是最常見(jiàn)的一種。水溶性致癌劑4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitro-quinoline-1-oxide,4NQO)是一種化學(xué)前體致癌劑,近年來(lái)學(xué)者采用4NQO涂布或飲水法成功地誘導(dǎo)大鼠舌癌病變。檳榔堿(Arecoline)是檳榔中的提取物,目前發(fā)現(xiàn)用于多種動(dòng)物的多種誘癌模型,包括肺,肝,胃。不同種系的鼠對(duì)4NQO誘發(fā)舌癌的敏感性有所不同,目前國(guó)內(nèi)對(duì)小鼠舌癌模型的報(bào)道僅限于Balb/c品系的小鼠而未見(jiàn)C57BL/6品系小鼠的報(bào)道,誘癌劑均單純運(yùn)用4NQO。本研究嘗試單獨(dú)和聯(lián)合運(yùn)用4NQO和檳榔堿(Arecoline)模擬有咀嚼檳榔習(xí)慣的口腔癌患者的病因元素,有助于進(jìn)一步研究口腔癌的病因和發(fā)病機(jī)制。為活體熒光影像系統(tǒng)的建立重要的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。 目的：本研究利用化學(xué)致癌劑4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)和檳榔堿(Arecoline),構(gòu)建GFP轉(zhuǎn)基因Babl/c和C57BL/6小鼠舌癌模型并觀察其余臟器相關(guān)病變,對(duì)小鼠舌組織病理形態(tài)進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察,并對(duì)誘癌劑的不同劑量及不同方法,兩個(gè)鼠種的誘癌過(guò)程和誘癌率進(jìn)行比較,以期獲得與人類舌癌發(fā)生發(fā)展最相似及誘癌率高的病變模型的誘癌方法。同時(shí)實(shí)驗(yàn)以綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)觀察綠色熒光蛋白在GFP轉(zhuǎn)基因小鼠癌變過(guò)程中組織里的表達(dá)情況。為活體熒光影像系統(tǒng)的建立提供重要實(shí)驗(yàn)依據(jù),為相關(guān)的基礎(chǔ)研究提供動(dòng)物模型與細(xì)胞來(lái)源。 方法：以GFP轉(zhuǎn)基因Babl/c和C57BL/6兩個(gè)種系小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)分別單獨(dú)和聯(lián)合應(yīng)用4NQO和Arecoline,嘗試不同濃度飲水和涂布兩種方法建立小鼠舌癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型。觀察綠色熒光蛋白在GFP轉(zhuǎn)基因小鼠癌變過(guò)程中組織里的表達(dá)情況。主要構(gòu)建方法如下：隨機(jī)選取GFP轉(zhuǎn)基因小鼠按種系不同分為兩組。A組為GFP轉(zhuǎn)基因Balb/c近交系小鼠；B組為GFP轉(zhuǎn)基因C57BL/6近交系小鼠；各70只。A、B兩組又各隨機(jī)分為7個(gè)亞組,每個(gè)亞組10只,第1組為對(duì)照組飲用自來(lái)水；2-7組為實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組分別以涂布法5mg/ml4NQO;自然飲水法20μg/ml,50μg/ml,100μg/ml4NQO,500μg/mlArecoline,及聯(lián)合應(yīng)用100μg/ml4NQO和500μg/mlArecoline。各組誘癌劑飲用至16周時(shí),改為飲用滅菌自來(lái)水觀察至第40周,于誘癌的不同節(jié)點(diǎn)選取狀態(tài)不佳,體重下降超過(guò)20%的小鼠處死,取其舌頭、食管、胃、肝、脾臟組織標(biāo)本,通過(guò)肉眼和組織學(xué)觀察腫瘤發(fā)生發(fā)展情況。 綠色熒光蛋白在GFP轉(zhuǎn)基因小鼠癌變過(guò)程中組織里的表達(dá)觀察：①癌變過(guò)程中的不同節(jié)點(diǎn)處死小鼠后選取新鮮舌頭置于分子成像系統(tǒng)觀察對(duì)比GFP在腫物和周圍組織中的表達(dá)。②新鮮病變舌組織行冰凍切片,在熒光顯微鏡下觀察組織熒光表達(dá),記錄GFP在癌變不同進(jìn)程階段組織中的表達(dá)情況。③成功建模后取小鼠新鮮舌頭腫物原代培養(yǎng),觀察細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài),置于熒光顯微鏡下動(dòng)態(tài)記錄腫瘤細(xì)胞的熒光表達(dá)情況。 結(jié)果：對(duì)照小鼠舌背粘膜呈粉紅色富有彈性,舌體柔軟,舌乳頭分布均勻,無(wú)白色樣變和新生物形成。隨著誘癌劑作用時(shí)間和觀察時(shí)間的延長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)小鼠的舌粘膜相繼出現(xiàn)充血水腫、紅白斑、疣狀新生物、潰瘍等改變。病理學(xué)證實(shí)A組GFP轉(zhuǎn)基因Babl/c和B組C57BL/6實(shí)驗(yàn)小鼠舌粘膜皆出現(xiàn)由過(guò)度角化-輕度異常增生-中度異常增生-重度異常增生-原位癌-浸潤(rùn)性癌的改變。其中A組GFP轉(zhuǎn)基因Babl/c小鼠誘癌情況如下：A2組80.0%(8/10)為過(guò)度角化,20.0%(2/10)為輕度異常增生,10.0%(1/10)為中度異常增生；A3組40.0%(4/10)為過(guò)度角化,60.0%(6/10)為輕度異常增生,20.0%(2/10)為中度異常增生,10.0%(1/10)為重度異常增生；A4組60.0%(6/10)為過(guò)度角化,70.0%(7/10)為輕度異常增生,40.0%(4/10)為中度異常增生,20.0%(2/10)為重度異常增生,10.0%(1/10)為原位癌；A5組90.0%(9/10)為過(guò)度角化,70.0%(7/10)為輕度異常增生,40.0%(4/10)為中度異常增生,30.0%(3/10)為重度異常增生,20.0%(2/10)為原位癌,10.0%(1/10)為早期浸潤(rùn)癌；A6組20.0%(2/10)為過(guò)度角化；A7組90.0%(9/10)為過(guò)度角化,10.0%(1/10)為輕度異常增生,20.0%(2/10)為中度異常增生,40.0%(4/10)為重度異常增生,20.0%(2/10)為原位癌,20.0%(2/10)為浸潤(rùn)癌,10.0%(1/10)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,20.0%(2/10)食管異常增生。 B組GFP轉(zhuǎn)基因C57BL/6小鼠誘癌情況如下：B2組30.0%(3/10)為過(guò)度角化,20.0%(2/10)為輕度異常增生；B3組50.0%(5/10)為過(guò)度角化,60.0%(6/10)為輕度異常增生,10.0%(1/10)為中度異常增生；B4組50.0%(5/10)為過(guò)度角化,40.0%(4/10)為輕度異常增生,20.0%(2/10)為中度異常增生,30.0%(3/10)為重度異常增生,10.0%(1/10)為原位癌；B5組50.0%(5/10)為過(guò)度角化,40.0%(4/10)為輕度異常增生,30.0%(3/10)為中度異常增生,30.0%(3/10)為重度異常增生,10.0%(1/10)為原位癌,20.0%(2/10)為浸潤(rùn)癌。B6組20.0%(2/10)為過(guò)度角化；B7組80.0%(8/10)為過(guò)度角化,10.0%(1/10)為輕度異常增生,10.0%(1/10)為中度異常增生,40.0%(4/10)為重度異常增生,10.0%(1/10)為原位癌,70%(7/10)為浸潤(rùn)癌；10%(1/10)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,20%(2/10)食管異常增生。 結(jié)論：1.4NQO能成功建立小鼠產(chǎn)生舌癌模型,100μg/ml濃度4NOO誘發(fā)的病變模型生長(zhǎng)緩慢組織病理學(xué)特征與人相似。聯(lián)合運(yùn)用Arecoline和4NQO是誘癌率最高的建模方法。 2.C57BL/6小鼠相較Babl/c小鼠誘癌率高,死亡率低,更適宜作為誘癌效率高的模型對(duì)象。 3.GFP在舌組織癌變過(guò)程中丟失,此模型不宜作為構(gòu)建熒光腫瘤細(xì)胞來(lái)源模型。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.86

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李曉杰;馬國(guó)武;李武偉;;4NQO飲水法誘發(fā)小鼠舌癌動(dòng)物模型建立的研究[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2006年05期

2 夏來(lái)新,程漢華,郭一清,周榮家;黃鱔β-actin基因的克隆及其在魚(yú)類中的系統(tǒng)發(fā)生分析(英文)[J];遺傳學(xué)報(bào);2005年07期

3 劉興坤,何榮根,陳萬(wàn)濤,周曾同,孫春曉,李偉國(guó),周曉健;4NQO飲水誘發(fā)大鼠舌癌模型的建立[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;1999年06期

本文編號(hào)：2800405