【摘要】：目的:牙本質(zhì)過敏癥是常見的牙體硬組織疾病之一,發(fā)作時酸痛難忍,范圍可局限或廣泛。目前所報道的治療方法遠期療效不佳,易導致復發(fā)。因此,尋找一種簡便快捷、效果長期穩(wěn)定的治療方法已成為迫切之需。本研究將聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)接枝到溶菌酶(lysozyme)分子上,得到聚乙二醇化溶菌酶(PEGylated lysozyme,lyso-PEG),經(jīng)還原劑處理后得到類淀粉樣蛋白相轉(zhuǎn)化lyso-PEG,并在牙本質(zhì)小管表面及深部構(gòu)建相轉(zhuǎn)化lyso-PEG涂層,依靠其表面活性官能團,誘導產(chǎn)生羥基磷灰石封閉牙本質(zhì)小管。方法:1、首先在溶菌酶分子上接枝PEG,得到lyso-PEG,配制還原劑三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽(tris(2-carboxyethyl)phosphine,TCEP),等體積混合后得到相轉(zhuǎn)化lyso-PEG溶液。收集因正畸預(yù)防性拔除的表面完整無缺損、無齲壞、隱裂、磨損或其他缺損的阻生齒,制備牙本質(zhì)過敏模型牙片,分為3組:牙本質(zhì)過敏對照組,相轉(zhuǎn)化lyso-PEG處理組,極固寧(Green Or~(TM))陽性對照組。將牙本質(zhì)過敏對照組和相轉(zhuǎn)化lyso-PEG處理組牙片放入人工唾液中7天。2、通過飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF)檢測溶菌酶接枝PEG的結(jié)果,激光共聚焦顯微鏡(Confocal Laser Scanning Microscopy,CLSM)下觀察相轉(zhuǎn)化lyso-PEG是否能夠粘附于牙本質(zhì)表面及小管內(nèi)部。通過場發(fā)射掃描電鏡(Field Emission Scanning Electron Microscope,SEM)、X射線衍射(X-Ray Diffraction,XRD)、能量色散X射線光譜(Energy Dispersive X-ray detector,EDX)等對牙本質(zhì)小管封閉情況及封閉物的微觀結(jié)構(gòu)和表面形貌進行表征。3、體外培養(yǎng)小鼠成纖維細胞(L929),將其定植于經(jīng)相轉(zhuǎn)化lyso-PEG和相轉(zhuǎn)化溶菌酶改性的牙片表面,用CCK-8細胞活性法評價其生物相容性。通過大鼠動物實驗?zāi)M真實口腔環(huán)境再次評估相轉(zhuǎn)化lyso-PEG改性后的牙片牙本質(zhì)小管封閉情況。結(jié)果:1、MALDI-TOF圖譜表明成功在溶菌酶分子上接枝聚乙二醇,CLSM結(jié)果顯示相轉(zhuǎn)化lyso-PEG粘附于牙本質(zhì)表面及小管內(nèi)部,并深入小管內(nèi)部約20μm。2、SEM結(jié)果顯示相轉(zhuǎn)化lyso-PEG改性的牙本質(zhì)小管被嚴密封閉,封閉物可進入小管內(nèi)部超過20μm,而極固寧僅沉積在牙本質(zhì)表面封閉小管口,未見深入小管內(nèi)部。XRD及EDX結(jié)果提示相轉(zhuǎn)化lyso-PEG誘導形成的封閉物為接近天然牙本質(zhì)無機成分的羥基磷灰石。3、細胞活性實驗證實相轉(zhuǎn)化lyso-PEG具有良好的生物相容性,動物實驗?zāi)M真實口腔環(huán)境,相轉(zhuǎn)化lyso-PEG能夠呈現(xiàn)與體外實驗相同的結(jié)果,嚴密封閉牙本質(zhì)小管并出現(xiàn)良好的抑菌效果。結(jié)論:本實驗在溶菌酶分子上接枝聚乙二醇,并通過溶菌酶相轉(zhuǎn)化體系形成相轉(zhuǎn)化lyso-PEG,將其作為表面改性方法應(yīng)用于牙本質(zhì)表面及小管深部,形成一層穩(wěn)定的粘附層,并誘導羥基磷灰石形成,封閉牙本質(zhì)小管。這一過程反應(yīng)條件溫和、簡便快捷、成本低廉、封閉物穩(wěn)定,因此相轉(zhuǎn)化lyso-PEG可以成為誘導封閉牙本質(zhì)小管的活性物質(zhì),而這種類淀粉蛋白表面改性技術(shù)有望成為一種新的牙本質(zhì)過敏癥的治療辦法。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R781.2
【圖文】：

圖 1：天然溶菌酶和 lyso-PEG 的 MALDI-TOF 譜圖。.2 牙本質(zhì)表面相轉(zhuǎn)化 lyso-PEG 涂層的表征因相轉(zhuǎn)化 lyso-PEG 涂層內(nèi)部的淀粉樣結(jié)構(gòu)可以結(jié)合 ThT，CLSM 觀察涂層綠色，所以從圖 2 可以看出，牙本質(zhì)表面及牙本質(zhì)小管內(nèi)部均有相轉(zhuǎn)化yso-PEG 涂層形成，且根據(jù) 3D 照片(圖 2a)結(jié)果顯示涂層粘附于牙本質(zhì)小管的深可達 20um。圖 2b 表示無法被 ThT 染色的牙本質(zhì)過敏模型表面沒有相轉(zhuǎn)化yso-PEG 涂層形成。

11牙本質(zhì)過敏模型、牙本質(zhì)過敏對照組、相轉(zhuǎn)化 lyso-PEG 處理組和極固een OrTM）陽性對照組 FESEM 及 EDX 結(jié)果。a：牙本質(zhì)過敏模型橫截面；過敏模型縱斷面；c：牙本質(zhì)過敏對照組牙片橫截面；d：相轉(zhuǎn)化 lyso-PE牙片橫截面；e,f：牙本質(zhì)過敏對照組牙片縱斷面，f 為 e 的局部放大；g lyso-PEG 處理組牙片縱斷面，h 為 g 的局部放大；i：極固寧（Green OrT照組橫截面；j：極固寧（Green OrTM）陽性對照組牙片縱斷面；k：相化 lyso-PEG 處理組封閉物 EDX 結(jié)果。

天津醫(yī)科大學碩士學位論文可以在衍射圖上看到 HAP 晶體的表面特征峰，即在 2θ= 31.8°對應(yīng)晶面（211），2θ= 32.8°對應(yīng)晶面（300）小管的牙本質(zhì)過敏模型組（圖 4B），其（002）晶面衍照組中（圖 4C），（002）晶面衍射峰仍然較低且 30°-3說明沒有形成礦化物。在相轉(zhuǎn)化 lyso-PEG 處理組（圖（圖 4E）中呈現(xiàn)了相似的譜圖，在（002）晶面均出5°范圍內(nèi)的重疊峰分別對應(yīng)（211）和（300）晶面。

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本文編號：2796403