發(fā)布時間：2020-08-15 06:51

【摘要】：目的:本課題擬篩選具有抗真菌活性的茶浸提液,測量茶浸提液中兒茶素類的含量,驗證其抗真菌活性與兒茶素類含量的關(guān)聯(lián)性,并進行茶浸提液對附著在聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)表面的白色念珠菌膜抑制效果研究,從而探究茶浸提液成為抗真菌藥物以及應(yīng)用于義齒清潔的可能性以提供臨床指導(dǎo)。方法:(1)選用市售安吉白茶(AG)、鐵觀音(TM)、大紅袍(HM)作為實驗對象,使用瓊脂稀釋法,制作不同濃度的茶浸提液平板(n=10):濃度分別為1.25,2.50,5.00,10.00,20.00 mg/mL。以不含茶浸提液平板作為空白對照組。將5μl含10~4 cfu/mL白色念珠菌點種于各平板上,通過菌落計數(shù)觀察實驗抑真菌結(jié)果。采用單因素方差分析,檢驗水準為α=0.05。兩兩比較采用最小顯著差數(shù)法(LSD法);(2)采用高效液相色譜法測安吉白茶(AG)、鐵觀音(TM)、大紅袍(HM)茶浸提液中兒茶素含量,進而用Pearson相關(guān)分析進行兒茶素含量與茶浸提液抗真菌活性關(guān)聯(lián)性分析。色譜柱為ZORBAX SB-C18柱(5.0μm,4.6mm×150.0 mm),流動相為1%乙酸-甲醇;流量:1.0 mL/min;檢測波長:280 nm;柱溫為30℃。(3)將同樣規(guī)格含白色念珠菌膜的PMMA試件(10.0 mm×20.0mm×2.5 mm)隨機分成四組,分別浸泡在10.0 mg/mL安吉白茶浸提液,2.5 mg/mL大紅袍浸提液、0.5%次氯酸鈉溶液(陽性對照組)和蒸餾水(陰性對照組)中10 min,將處理后的附著在試件上白色念珠菌培養(yǎng)后,用菌落計數(shù)法比較不同處理方法對白色念珠菌膜的清除率。采用單因素方差分析,檢驗水準為α=0.05。兩兩比較采用最小顯著差數(shù)法(LSD法)。結(jié)果:(1)與空白組相比,10.0 mg/mL安吉白茶浸提液(P=0.025),2.5 mg/mL大紅袍浸提液(P=0.046)菌落計數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義,其余茶浸提液差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)在上述色譜條件下,4個待測成分在測定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r"g0.9991),平均加樣回收率為97.75%到100.39%之間,RSD均小于5.00%(n=3)。安吉白茶是三種茶葉中四種兒茶素類成分含量最高;大紅袍中表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、表兒茶素(EC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)含量高于鐵觀音。鐵觀音中表沒食子兒茶素(EGC)含量高于大紅袍。根據(jù)Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,四種兒茶素的含量與茶浸提液抗真菌作用無明顯相關(guān):EGC(r=-0.126,P=0.656);EGCG(r=0.139,P=0.621);EC(r=0.197,P=0.482);ECG(r=0.268,P=0.334)。(3)與陰性對照組無菌水相比,10.0 mg/mL安吉白茶浸提液(P=0.979),2.5 mg/mL大紅袍浸提液(P=0.652)的菌落計數(shù)結(jié)果差異沒有統(tǒng)計學意義。陽性對照組0.5%次氯酸鈉溶液組平板無菌落生長。結(jié)論:10.0 mg/mL安吉白茶浸提液與2.5 mg/mL大紅袍浸提液抑制白色念珠菌有效,然而,未發(fā)現(xiàn)安吉白茶浸提液與大紅袍浸提液對PMMA表面白色念珠菌膜有清除效果。未發(fā)現(xiàn)茶浸提液的抗真菌活性與兒茶素類成分含量大小相關(guān)。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R783
【圖文】：

常溫靜置凝固后制成沙氏瓊脂培養(yǎng)基平板，置于 4 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫ㄈ鐖D 1-b）；（4）磷酸鹽緩沖劑 PBS（Phosphate buffered saline）：將磷酸鹽緩沖劑 PBS 粉劑與 1000 mL 一級水進行混合，用磁力攪拌器在燒杯中進行混勻，于 121.3 ℃高壓蒸汽滅菌 15 min，冷卻后置于 4 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫ㄈ鐖D 1-c）；

a. 沙氏液體培養(yǎng)基 SDB；b. 沙氏瓊脂培養(yǎng)基 SDA；c. PBS dextrose broth; b. Sabouraud’s dextrose agar; c. Phosphate buf浸提液平板：采用對倍稀釋法配制三種茶浸提液的體培養(yǎng)基和等量的茶浸提液混合配制成系列濃度對提液系列濃度：200、100、50、25、12.5 mg/mL。液 1 mL 與 9 mL 沙氏瓊脂培養(yǎng)基混合后傾注平板10、5、2.5、1.25 mg/mL。根據(jù)茶葉種類的不同將安吉白茶，TM 代表鐵觀音，HM 代表大紅袍，平

albicans平板復(fù)蘇Fig.3C.albicansrivive

【參考文獻】

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本文編號：2793768