【摘要】：牙周病(periodontal disease)是一種累及牙骨質(zhì)、牙周膜和牙槽骨的慢性破壞性疾病，是造成成人牙齒脫落的主要病因。目前，組織工程是實(shí)現(xiàn)牙周再生最理想的方式。它包括三方面要素：種子細(xì)胞、支架材料和生長因子。合理選擇種子細(xì)胞是其成功的關(guān)鍵[1]。牙周膜干細(xì)胞(PDLSCs)是目前公認(rèn)的牙周組織再生最佳來源細(xì)胞[2],一定條件下可以構(gòu)建功能性牙周膜[3-4]。但是，健康的牙周膜細(xì)胞需拔牙后分離培養(yǎng)獲取，限制了其臨床應(yīng)用。因此，尋找其它種子細(xì)胞源也一直是國際相關(guān)熱點(diǎn)之一。大量的研究表明，來源于頜骨的骨髓基質(zhì)細(xì)胞具有旺盛的增殖能力和優(yōu)于髂骨來源的骨髓基質(zhì)細(xì)胞的成骨特性。我們通過頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞(OF-MSCs)與牙周膜干細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)外比較，初步研究頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)特性，探討其用于牙周組織再生的可行性。本實(shí)驗(yàn)中通過頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞和牙周膜干細(xì)胞的原代培養(yǎng)，觀察細(xì)胞外形及克隆形成情況；CCK-8測細(xì)胞生長曲線；免疫熒光染色檢測STR0-1、CD146表達(dá)；定向誘導(dǎo)后檢測脂滴形成及堿性磷酸酶活性變化情況，RT-PCR方法檢測7、14d成骨相關(guān)基因的表達(dá)情況；掃描電鏡觀察兩種細(xì)胞在HA/β-TCP材料表面的黏附、伸展情況，并植入裸鼠皮下(n=4)，8周后取材行組織學(xué)觀察來評價(jià)兩種細(xì)胞的成骨能力。 結(jié)果： 1、頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞和牙周膜干細(xì)胞體外原代培養(yǎng)均能貼壁生長，呈成纖維樣細(xì)胞外形；頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞具有較強(qiáng)克隆形成能力；生長曲線顯示兩種細(xì)胞生長趨勢相似，頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞在6d左右基本進(jìn)入平臺期，牙周膜干細(xì)胞仍呈緩慢增長趨勢；兩種細(xì)胞均表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞的表面標(biāo)志STR0-1和血管旁標(biāo)志CD146。 2、兩種細(xì)胞經(jīng)成脂誘導(dǎo)14d，油紅O染色可見脂滴形成；成骨誘導(dǎo)后RT-PCR均能檢測到兩種細(xì)胞均有成骨相關(guān)基因(OCN、OPN、ALP、runX2、BMP-2)的表達(dá)，其中OCN、OPN兩種基因在頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)較早、較強(qiáng)； 3、在非誘導(dǎo)條件下，頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞表現(xiàn)和牙周膜干細(xì)胞表現(xiàn)較低水平堿性磷酸酶活性，頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞稍強(qiáng)；在成骨誘導(dǎo)條件下，頜骨骨髓基質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞堿性磷酸酶活性明顯較牙周膜干細(xì)胞強(qiáng)； 4、掃描電鏡觀察，兩種細(xì)胞均可在HA/β-TCP材料表面黏附、伸展良好； 5、植入裸鼠皮下8周，兩種細(xì)胞可在HA/β-TCP表面形成類骨質(zhì)樣結(jié)構(gòu)。 結(jié)論：頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞與牙周膜干細(xì)胞表現(xiàn)相似，均具有間充質(zhì)干細(xì)胞的一般特性，具有一定的體內(nèi)成骨潛能，但體外具有比牙周膜干細(xì)胞更強(qiáng)的成骨向分化能力。其在牙周組織缺損修復(fù)中發(fā)揮什么樣的作用，能否作為牙周組織工程中的種子細(xì)胞尚需進(jìn)一步的研究。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R781.4
【圖文】：

可見細(xì)胞從組織塊周圍爬出，細(xì)胞可呈三角形或稍長的梭狀。隨著培養(yǎng)和傳代，細(xì)胞逐漸變?yōu)槌衫w維樣外形（圖1）。頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞 牙周膜干細(xì)胞圖 1 兩種細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

-29-圖 2 兩種細(xì)胞生長曲線.3 克隆形成率兩種細(xì)胞培養(yǎng)10d時(shí)，均有細(xì)胞克隆形成。鏡下觀細(xì)胞形態(tài)積較小且排列緊密。其中，骨髓基質(zhì)細(xì)胞獲得克隆株65株，克6.5%；牙周膜干細(xì)胞獲得克隆集落38株，克隆形成率為3.8%.4 STRO-1 和 CD-146 表達(dá)情況倒置熒光顯微鏡觀察顯示，頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞及牙周膜干細(xì)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志物STRO-1和血管旁標(biāo)志物CD-146表達(dá)（圖

-30-頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞 牙周膜干細(xì)胞圖3 兩種細(xì)胞STRO-1、CD-146表達(dá)情況（×20）4 討論組織工程需要高濃度的種子細(xì)胞，通過原代細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)及擴(kuò)增，獲得大量的原代細(xì)胞，為后續(xù)的試驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。對于頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)，我們主要在頜面外科手術(shù)或牙周手術(shù)中鉆取頜骨骨松質(zhì)，其來源廣泛，取材簡便，創(chuàng)傷小，且易于自體回植。而牙周膜干細(xì)胞用于自體回植，需要患者有需要拔除的牙齒，來源受到一定限制，且患者接受率較低。借鑒和改良 Akintoye 等[5]研究中原代培養(yǎng)方法并在實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行探索，確定用組織塊法進(jìn)行頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)。一般在 3-10d 內(nèi)便可看到細(xì)胞從組織塊周圍爬出。細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法簡便、省時(shí)，同時(shí)成活STRO-1 STRO-1CD146

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2790694