【摘要】： 目的:觀察富血小板血漿(Platelet-Rich Plasma,PRP),作為一種生長因子,在可注射藻酸鹽(Alginate,A)骨組織工程(Bone Tissue Engineering)中對成骨細(xì)胞(Osteoblasts,OBs)增殖及礦化功能的影響,探討可注射藻酸鹽骨組織工程復(fù)合富血小板血漿的可行性。 方法:①體外大鼠成骨細(xì)胞OBs的分離、培養(yǎng)及鑒定:取新生Wistar大鼠顱骨,采用多次酶消化法分離OBs,進(jìn)行體外培養(yǎng),Gomori鈣鉆法堿性磷酸酶染色和茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色鑒定OBs。②MTT法檢測細(xì)胞的增殖及活力:取第三代Wistar大鼠成骨細(xì)胞與1.5%藻酸鹽、富血小板血漿復(fù)合。實驗分三組,1.實驗組(成骨細(xì)胞/藻酸鹽/20%PRP);2.對照組(成骨細(xì)胞/藻酸鹽);3.成骨細(xì)胞貼壁生長組。體外連續(xù)培養(yǎng)14d,分別于培養(yǎng)的第2、3、4、5、6、7、10、12、14d,行MTT法檢測實驗組、對照組與貼壁生長細(xì)胞增殖能力,酶標(biāo)儀測定光密度值(OD值),每個樣本設(shè)三個復(fù)孔,求其平均值并繪制細(xì)胞生長曲線。③熒光四環(huán)素標(biāo)記法行礦化結(jié)節(jié)測定:取第三代Wistar大鼠成骨細(xì)胞,與1.5%藻酸鹽支架材料和富血小板血漿復(fù)合。實驗分三組,1.實驗組(成骨細(xì)胞/藻酸鹽/20%PRP);2.對照組(成骨細(xì)胞/藻酸鹽);3.成骨細(xì)胞貼壁生長組。在培養(yǎng)的第14d、24d、31d,對實驗組、對照組與單層培養(yǎng)組,行熒光四環(huán)素法標(biāo)記礦化結(jié)節(jié),倒置熒光顯微鏡下觀察各組礦化情況,分別統(tǒng)計各組不同時間點(diǎn)的礦化結(jié)節(jié)數(shù)目、礦化面積百分?jǐn)?shù)。 結(jié)果:①成骨細(xì)胞鑒定:Gomori鈣鉆法堿性磷酸酶染色后細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng),胞漿內(nèi)呈現(xiàn)灰黑色顆粒或塊狀沉淀;茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色后礦化結(jié)節(jié)呈現(xiàn)深紅色,結(jié)節(jié)周圍細(xì)胞胞漿也呈紅染。②MTT法檢測細(xì)胞的增殖及活力:與單層培養(yǎng)相比,成骨細(xì)胞藻酸鹽三維培養(yǎng)未見明顯的細(xì)胞毒性,在培養(yǎng)周期內(nèi)細(xì)胞增殖一直呈上升趨勢。含20%PRP藻酸鹽三維培養(yǎng)組增殖能力明顯高于無PRP的三維培養(yǎng)組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),尤其是培養(yǎng)的第3-6d。③熒光四環(huán)素標(biāo)記法礦化結(jié)節(jié)測定:與單層培養(yǎng)相比,成骨細(xì)胞藻酸鹽三維培養(yǎng)的熒光強(qiáng)度、數(shù)目、面積,在培養(yǎng)周期內(nèi)隨培養(yǎng)時間延長而一直呈增多增大的趨勢。與對照組相比,含20%PRP實驗組的礦化結(jié)節(jié)數(shù)目增多、礦化面積增大,組間各時間點(diǎn)的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論:①成骨細(xì)胞的藻酸鹽三維培養(yǎng)體系,細(xì)胞代謝活性及功能接近、甚至優(yōu)于單層培養(yǎng)。 ②成骨細(xì)胞/藻酸鹽/PRP復(fù)合物,三者能很好的結(jié)合,均勻分布,三維培養(yǎng)下,能促進(jìn)成骨細(xì)胞大量增殖,其構(gòu)建可行。 ③PRP作為藻酸鹽組織工程骨的生長因子,能促進(jìn)成骨細(xì)胞礦化功能。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R78;R318.0

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2790049