【摘要】：目的： 舌鱗狀細(xì)胞癌(tongue squamous carcinoma cell TSCC)是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤之一，具有較高的復(fù)發(fā)率及淋巴轉(zhuǎn)移率，預(yù)后較差，嚴(yán)重威脅著人類身體健康。野黃芩苷是從黃芩莖葉中提取的一種黃酮類化合物，現(xiàn)代藥理研究證實(shí)黃酮類化合物在抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、抗微生物和抗腫瘤等多方面都有一定的作用。近年來，其抗腫瘤活性得到日受重視。為了解野黃芩苷對舌鱗癌的作用，本研究選用人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞株，以觀察分析野黃芩苷對人舌鱗癌細(xì)胞的生長抑制和凋亡誘導(dǎo)作用的可能機(jī)制。 方法： 1.人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞株購于南京凱基生物科技有限公司，進(jìn)行體外培養(yǎng)用于實(shí)驗(yàn)。 2.實(shí)驗(yàn)分組：分為對照組和不同濃度野黃芩苷組。對照組：用含10%FBS(胎牛血清)的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)舌鱗癌細(xì)胞；根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，野黃芩苷組：分別用含10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)液將野黃芩苷配制成的終濃度80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的野黃芩苷培養(yǎng)液，處理細(xì)胞。 3.采用四唑鹽比色(MTT)方法，觀察野黃芩苷作用于人舌鱗癌細(xì)胞12h、24h、48h后對增殖活性的影響。 4.采用免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察野黃芩苷作用的人舌鱗癌細(xì)胞Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。 5.采用蛋白印跡(Western-blot)技術(shù)檢測人舌鱗癌細(xì)胞Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。 6.用反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）技術(shù)檢測人舌鱗癌細(xì)胞Bcl-2mRNA、BaxmRNA的表達(dá)。 7.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析：應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，用LSD-t檢驗(yàn)行兩兩比較，P 0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.野黃芩苷對舌鱗癌細(xì)胞增殖活性的影響。 80μg/ml、120μg/ml和160μg/ml濃度的野黃芩苷分別處理12h、24h和48h后，舌鱗癌細(xì)胞的生長受到明顯的抑制，且在一定的時(shí)間和濃度范圍內(nèi)呈時(shí)間、濃度依賴性，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組之間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)。 2.應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測，在不同濃度野黃芩苷(80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml)作用下，各組人舌鱗癌細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)48h，經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測，人舌鱗癌細(xì)胞可見Bcl-2、Bax陽性表達(dá)，陽性染色主要定位于胞漿，Bcl-2對照組細(xì)胞漿著色很深，胞漿呈現(xiàn)清晰的棕黃色,隨著野黃芩苷濃度的增高，Bcl-2的陽性信號(hào)越來越弱。而Bax對照組細(xì)胞漿著色很淺，隨著野黃芩苷濃度的增高，Bax的陽性信號(hào)越來越強(qiáng)。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組之間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)。 3.應(yīng)用蛋白印跡(Western-blot)技術(shù)檢測，在不同濃度野黃芩苷(80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml)作用下，各組人舌鱗癌細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)48h，人舌鱗癌細(xì)胞Bcl-2的相對表達(dá)量分別為1.172±0.026、1.074±0.069、0.776±0.041、0.566±0.054，以對照組的表達(dá)量最高，隨野黃芩苷濃度的不斷增高，人舌鱗癌細(xì)胞的Bcl-2表達(dá)量逐漸降低。人舌鱗癌細(xì)胞Bax的相對表達(dá)量分別為0.356±0.028、0.451±0.044、0.698±0.078、0.779±0.035，以對照組的表達(dá)量最低，隨野黃芩苷濃度的不斷增高，人舌鱗癌細(xì)胞的Bax表達(dá)量逐漸增高。呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組之間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)。 4.RT-PCR技術(shù)檢測，在不同濃度野黃芩苷(80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml)作用下，各組人舌鱗癌細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)48h，人舌鱗癌細(xì)胞Bcl-2mRNA的相對表達(dá)量分別為0.975±0.069、0.850±0.073、0.776±0.082、0.575±0.047，以空白對照組Bcl-2的mRNA的表達(dá)水平最高，隨野黃芩苷濃度的不斷增高，人舌鱗癌細(xì)胞Bcl-2的mRNA表達(dá)水平逐漸降低。人舌鱗癌細(xì)胞BaxmRNA的相對表達(dá)量分別為0.769±0.061、0.817±0.121、0.895±0.044、0.975±0.115，以對照組Bax的mRNA的表達(dá)水平最低，隨野黃芩苷濃度的不斷增高，人舌鱗癌細(xì)胞BaxmRNA表達(dá)水平逐漸增高。呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組之間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)。 結(jié)論： 1.野黃芩苷能抑制人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)其凋亡。 2.野黃芩苷誘導(dǎo)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞凋亡可能是通過下調(diào)Bcl-2的表達(dá)和上調(diào)Bax的表達(dá)，而達(dá)到抗腫瘤的作用。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.86

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本文編號(hào)：2789214