【摘要】：[目的]1.測定DAPC對變形鏈球菌和牙齦卟啉單胞菌的MIC和MBC,評價DAPC對兩種細菌的抗菌活性;2.探討DAPC對變形鏈球菌和牙齦卟啉單胞菌毒力基因表達的影響;3.比較DAPC對變形鏈球菌和牙齦卟琳單胞菌粘附的作用,探討DAPC對釉質(zhì)表面的粘附性。[方法]1.采用液體二倍稀釋法分別測定DAPC和葡萄糖酸氯己定對變形鏈球菌和牙齦卟啉單胞菌的MIC和MBC;2.以葡萄糖酸氯己定為陽性對照,變形鏈球菌以TPY液體培養(yǎng)基為陰性對照,牙齦卟啉單胞菌以BHI肉湯培養(yǎng)基為陰性對照,分別在MIC和MBC濃度下,通過Real-time qPCR檢測藥物作用后變形鏈球菌gtfB、gtfC基因,牙齦卟啉單胞菌rgpA基因的表達量;3.以葡萄糖酸氯己定為陽性對照,PBS為陰性對照,在浸泡過藥物后的釉質(zhì)片表面培養(yǎng)細菌,通過結(jié)晶紫法測定變形鏈球菌和牙齦卟啉單胞菌在釉質(zhì)表面形成的生物膜量。[結(jié)果]1.DAPC對變形鏈球菌的MIC為31.251μg/ml,MBC為62.5μg/ml,葡萄糖酸氯己定對變形鏈球菌的MIC為15.625μg/ml,MBC為31.25μg/ml;DAPC對牙齦卟啉單胞菌的MIC為3.90625μg/ml,MBC為3.90625μg/ml,葡萄糖酸氯己定對牙齦卟琳單胞菌的MIC為1.95312μg/ml,MBC為3.90625μg/ml。2.DAPC濃度為MIC和MBC時,變形鏈球菌gtfB、gtfC基因的表達顯著低于TPY組(P0.01),但與葡萄糖酸氯己定MBC組沒有差異(P0.05);DAPC濃度為1/2MBC和MBC時,牙齦卟啉單胞菌rgpA基因的表達顯著低于陰性對照組(P0.01),且DAPC濃度為1/2MBC和MBC時的抑制作用與葡萄糖酸氯己定的MIC組和MBC組沒有差異(P0.05)。3.DAPC和葡萄糖酸氯己定的浸泡濃度為MIC時,兩者對變形鏈球菌和牙齦卟啉單胞菌的粘附均無抑制作用(P0.05)。(1)對于變形鏈球菌,DAPC浸泡濃度為250μg/ml時,生物膜的形成量顯著低于TPY組(P0.01),24h內(nèi)變形鏈球菌生物膜量高于浸泡濃度為125μg/ml的葡萄糖酸氯己定組(P0.01),而培養(yǎng)48h小時之后兩組沒有差異(P0.05);DAPC浸泡濃度為2400μg/ml時,變形鏈球菌生物膜顯著低于TPY組(P0.01),24h內(nèi)弱于濃度為1200μg/ml的葡萄糖酸氯己定組(P.01),之后與葡萄糖酸氯己定沒有差異(P0.05)。(2)經(jīng)過本實驗各個濃度DAPC的浸泡后,24h內(nèi)釉質(zhì)片表面的牙齦卟啉單胞菌的生物膜量與BHI組均無差異(P0.05)。DAPC浸泡濃度為62.5μg/ml的組在培養(yǎng)48h后牙齦卟啉單胞菌的生物膜量顯著低于BHI組(P0.01),且與葡萄糖酸氯己定浸泡濃度為31.25μg/ml的組沒有差異(P0.05),在培養(yǎng)72 h后生物膜量已經(jīng)顯著低葡萄糖酸氯己定(P0.05);DAPC浸泡濃度為2400μg/ml時,48h后牙齦卟啉單胞菌的生物膜量顯著低于BHI組(P0.01),且生物膜量在48h和72h與葡萄糖酸氯己定浸泡濃度為1200μg/ml的組沒有差異(P0.05)。[結(jié)論]1、DAPC對變形鏈球菌和牙齦卟啉單胞菌均具有較好的抗菌活性。2、DAPC的MIC和MBC濃度均可顯著抑制變形鏈球菌gtfB、gtfC基因和牙齦卟啉單胞菌rgpA基因的表達。3、250μg/ml及以上濃度的DAPC可有效抑制變形鏈球菌的粘附,62.5μg/ml及以上濃度的DAPC在481h后能有效抑制牙齦卟啉單胞菌的粘附。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R781
【圖文】：

啉單胞菌目的基因特異性驗證結(jié)果（從左到右依次為：基因）逡逑因和內(nèi)參的ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ｑＰＣＲ定量結(jié)果逡逑菌相應(yīng)的目的基因以及內(nèi)參的ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ｑＰＣＲ擴示，擴增曲線呈Ｓ形，各個期分段明顯，擴增曲溶解曲線可見單峰，峰尖而窄，說明擴增時反應(yīng)

１．變形鏈球菌和牙齦卟琳單胞菌目的基因特異性驗證。逡逑實驗結(jié)果顯示，變形鏈球菌和牙齦卟啉單胞菌各目的基因引物均能引出唯一逡逑特異的單一條帶，如圖１，２所示。逡逑１９逡逑

２？目的基因和內(nèi)參的ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ｑＰＣＲ定量結(jié)果逡逑兩種細菌相應(yīng)的目的基因以及內(nèi)參的ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ｑＰＣＲ擴增曲線和溶解曲線如逡逑圖３－１２所示，擴增曲線呈Ｓ形，各個期分段明顯，擴增曲線平滑連續(xù)，無明顯逡逑轉(zhuǎn)折拐角。溶解曲線可見單峰，峰尖而窄，說明擴增時反應(yīng)特異性良好。逡逑２０逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2779551