【摘要】：目的 研究MHC-Ⅰ類鏈相關(guān)基因A修飾的口腔鱗癌細(xì)胞疫苗對免疫重建荷瘤SCID鼠皮下移植瘤生長的抑制作用及誘導(dǎo)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答的有效性,并探討其可能的作用機(jī)制。 方法 密度梯度離心法分離人外周靜脈血淋巴細(xì)胞(hu-PBL),腹腔注射至已用環(huán)磷酰胺抑制骨髓造血功能的SCID鼠,建立人免疫功能重建Hu-PBL/SCID動物模型,人IgG ELISA檢測試劑盒檢測鼠外周血清中人IgG含量以評價重建效果。 60Co放射源致死劑量照射轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-MICA真核表達(dá)質(zhì)粒并穩(wěn)定過表達(dá)MICA的Tb-pEGFP-N1-MICA細(xì)胞,并以轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒的Tb-pEGFP-N1細(xì)胞及未轉(zhuǎn)染的Tca8113-Tb細(xì)胞作為對照,制備滅活腫瘤細(xì)胞疫苗,分別腹腔注射接種免疫功能重建Hu-PBL/SCID鼠,共3次。2周后皮下接種Tca8113-Tb細(xì)胞,觀察成瘤情況,測量腫瘤體積及重量,計算抑瘤率。 取SCID鼠外周血及脾臟,流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血單個核細(xì)胞(PBMC)和脾細(xì)胞表面NKG2D的表達(dá),LDH釋放法檢測PBMC和脾細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。 采用SPSS16.0軟件包兩獨(dú)立樣本t檢測或方差分析對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,P0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 1.SCID鼠腹腔注射hu-PBL免疫重建1周后,其外周血清中即能檢測到人IgG,且在5周內(nèi)隨時間的延長而升高。 2.接種滅活腫瘤細(xì)胞疫苗的Hu-PBL/SCID鼠皮下注射腫瘤細(xì)胞后均能順利成瘤,成瘤率100%。但Tb-pEGFP-N1-MICA疫苗組與Tca8113-Tb和Tb-pEGFP-N1疫苗組比較,移植瘤體積與重量均明顯較少(P0.05),抑瘤率為63.26%。 3.流式細(xì)胞術(shù)及LDH釋放法檢測結(jié)果顯示Tb-pEGFP-N1-MICA疫苗組Hu-PBL/SCID鼠PBMC和脾細(xì)胞表面NKG2D的表達(dá)及殺傷活性均顯著高于Tca8113-Tb和Tb-pEGFP-N1疫苗組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 1.SCID鼠腹腔注射細(xì)胞密度為2.5×108/mL的Hu-PBL 0.2mL后,其外周血清中可持續(xù)檢測到人IgG,并隨時間延長而增高,表明成功建立了免疫功能重建的hu-PBL/SCID動物模型。 2.MICA基因修飾的口腔鱗癌細(xì)胞疫苗能誘導(dǎo)機(jī)體更為強(qiáng)烈的抗腫瘤免疫應(yīng)答能力,對移植瘤生長具有顯著的抑制作用。其機(jī)制可能是上調(diào)了免疫效應(yīng)細(xì)胞NKG2D的表達(dá),從而促進(jìn)對腫瘤靶細(xì)胞的殺傷。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R739.8
【圖文】：

.3.3根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度與OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖1一2)，曲線擬合度為0.995，據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖計算人IgG含量終濃度，繪制lgG含量變化圖(見圖1一3)。由IgG含量變化lJJ一知，1周后，外周血中均能檢測到人lgG，且在5周內(nèi)隨時間的延長而升高。

腫瘤細(xì)胞移植21天后各組間生長開始出現(xiàn)差異，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義(尸 <0.05)。1.3.3根據(jù)腫瘤體積繪制生長曲線(見圖2一2)，Tb一pEGFP一Nl一MICA疫苗組與 Tcas113一Tb和Tb一pEGFP一1疫苗組比較，移植瘤瘤體體積明顯較少 (P<0.05)。1.3.4腫瘤重量數(shù)據(jù)分析:根據(jù)移植瘤標(biāo)本(見圖2一3)瘤體重量繪制重量比較圖(見圖2一4)，分析各組間尸值，結(jié)果可知，Tb一pEGFP一1一呱CA疫苗組與 Tcas113一Tb和Tb一pEGFP一1疫苗組比較，移植瘤瘤體重量明顯較少(尸<0.05)，而Tca8113一Tb和Tb一pEGFP一1疫苗組結(jié)果無明顯差異(P夕0.05)。1.3.5Th一PEGFP一1一MlcA疫苗組抑瘤率為63.26%(抑瘤率二(對照組平均瘤重一實(shí)驗(yàn)組平均瘤重)/對照組平均瘤重 X100%)。第一組 (thefirstgrouP第二組 (theseeondgrouP第三組 (thethirdgoup圖2一1處死后荷瘤scID鼠(第一組為Tcasll3一Tb組、第二組為仆一pEGFP一NI一MlcA組，第三組為Th一pEGFP一Nl組)FigureZ一 1ThedeadseIDmiees(The15，gro即 15Tcas一13一仆

碩士學(xué)位論文第二章表2一1各組間移植瘤體積均值及比較(n=15，單位:。mTableZ一1ComParisonoftumorsizemeans移杭腫瘤細(xì)胞后天數(shù)15天18大21大2魂大27天30天Tb0.544士0.180月6士0.371.68IJ).82.29士0.553.07士1.063.62士0.89Tb一PEGFP一l0.57生0.541.05士0.95】.79士0.72.77切.793.04士0一963.68士1.03Tb一PEGFP一NI一MICA0刃6士0.070.21士0.130.47士0.280.85士0.482士0.611.37士0刀5P值0.059O刀870.0110.0010.0090.002

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2769628