【摘要】：目的本課題旨在研究mi R-320c對(duì)人牙髓干細(xì)胞(human dental pulp stem cells,h DPSCs)成骨、成脂能力以及增殖的影響,并分析對(duì)于成骨、成脂分化相關(guān)基因的影響,為h DPSCs在再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。方法1使用酶消化組織塊法培養(yǎng)原代牙髓組織來(lái)源細(xì)胞,并使用流式細(xì)胞儀鑒定。2 mi R-320c mimic及其陰性對(duì)照NC(mi R-NC組)分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染h DPSCs,24h后采用細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)檢測(cè)兩組細(xì)胞增殖能力;RT-q PCR驗(yàn)證mi R-320c在h DPSCs中的表達(dá)水平,分別檢測(cè)兩組成骨分化相關(guān)基因OCN及Runx2 m RNA表達(dá)水平,成脂分化相關(guān)基因PPAR-γm RNA的基因表達(dá)水平;茜素紅染色分別檢測(cè)兩組成骨分化能力;油紅O染色分別檢測(cè)兩組成脂分化能力。3 mi R-320c inhibitor及其陰性對(duì)照NC(mi R-INNC組)分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染h DPSCs,24h后采用CCK-8法分別檢測(cè)兩組細(xì)胞增殖能力;RT-q PCR驗(yàn)證mi R-320c在h DPSCs中的表達(dá)水平,分別檢測(cè)兩組成骨分化相關(guān)基因OCN及Runx2 m RNA表達(dá)水平,成脂分化相關(guān)基因PPAR-γm RNA的基因表達(dá)水平;茜素紅染色檢測(cè)兩組成骨分化的能力;油紅O染色檢測(cè)兩組成脂分化的能力。結(jié)果1通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)鑒定經(jīng)酶消化組織塊法培養(yǎng)的細(xì)胞為CD34-,CD44+,Strol-1+,符合間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原特征,即所得細(xì)胞為h DPSCs。2成功在h DPSCs內(nèi)過(guò)表達(dá)或敲低mi R-320c(P0.01)。3與mi R-NC組相比,過(guò)表達(dá)mi R-320c的h DPSCs增殖活性顯著降低(P0.01);與mi R-INNC組相比,敲低mi R-320c的h DPSCs增殖活性顯著升高(P0.01)。結(jié)果表明mi R-320c負(fù)向調(diào)控h DPSCs的增殖能力。4茜素紅染色結(jié)果顯示,與mi R-NC組相比,過(guò)表達(dá)mi R-320c的h DPSCs鈣結(jié)節(jié)形成明顯減少(P0.05);RT-q PCR結(jié)果顯示成骨分化相關(guān)基因OCN及Runx2的m RNA表達(dá)水平均有顯著下降趨勢(shì)(P0.01)。相反,與mi R-INNC組相比,敲低mi R-320c的h DPSCs鈣結(jié)節(jié)形成明顯增多(P0.01);RT-q PCR結(jié)果顯示成骨分化相關(guān)基因OCN及Runx2 m RNAs表達(dá)水平均有顯著上升趨勢(shì)(P0.01)。以上結(jié)果表明,mi R-320c負(fù)向調(diào)控h DPSCs中成骨分化相關(guān)基因OCN及Runx2的表達(dá)及細(xì)胞的成骨分化能力。5油紅O染色結(jié)果顯示,與mi R-NC組相比,過(guò)表達(dá)mi R-320c的h DPSCs成脂能力增強(qiáng);RT-q PCR結(jié)果顯示成脂分化相關(guān)基因PPAR-γ的m RNA表達(dá)水平均有顯著上升趨勢(shì)(P0.01)。與mi R-INNC組相比,敲低mi R-320c的h DPSCs脂滴形成減少;RT-q PCR結(jié)果顯示成脂分化相關(guān)基因PPAR-γ的m RNA表達(dá)水平均有顯著下降趨勢(shì)(P0.01)。以上結(jié)果表明,mi R-320c正向調(diào)控h DPSCs中成脂分化相關(guān)基因PPAR-γ表達(dá)及細(xì)胞的成脂分化能力。結(jié)論1應(yīng)用酶消化組織塊法從人牙髓組織中分離培養(yǎng)的細(xì)胞為h DPSCs。2 mi R-320c可負(fù)向調(diào)控h DPSCs增殖能力。3 mi R-320c可能通過(guò)負(fù)向調(diào)控成骨分化基因OCN及Runx2 m RNAs的水平,負(fù)向調(diào)控h DPSCs成骨分化能力。4 mi R-320c可能通過(guò)正向調(diào)控成脂分化基因PPAR-γm RNA的水平,正向調(diào)控h DPSCs成脂分化能力。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R78

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2766847