【摘要】：目的：涎腺多形性腺瘤（Pleomorphic adenoma, PA）是口腔頜面部常見良性腫瘤。占涎腺上皮性腫瘤的51%，占良性腫瘤的88%。女性略多于男性�？砂l(fā)生于任何年齡，以30-60歲最多見。好發(fā)于腮腺和頜下腺，其中80%-90%發(fā)生于腮腺，約3%-4%可發(fā)生癌變并發(fā)生轉(zhuǎn)移，甚至導(dǎo)致死亡。該瘤雖為良性，但包膜常被瘤細(xì)胞侵襲或包膜結(jié)構(gòu)不完整，是介于良惡性之間的腫瘤，因此依其生物學(xué)特性分類，也可將其歸類為臨界瘤。該瘤膨脹性生長(zhǎng)影響容貌，且手術(shù)后易復(fù)發(fā)，5年后的復(fù)發(fā)率為3.4%，多次復(fù)發(fā)有惡變可能，復(fù)發(fā)次數(shù)越多，其惡變的可能性將越高。本研究目的為檢測(cè)PA組織中是否存在腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（Tumorassociated fibroblasts, TAFs），進(jìn)而研究PA來源TAFs的生物學(xué)特性，并與涎腺腺樣囊性癌（Adenoid cystic carcinoma, ACC）來源的TAFs相比較。 材料和方法：病例組選擇大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院口腔科住院接受手術(shù)治療的PA患者66例，其中男性26例，女性40例，均經(jīng)組織病理學(xué)確診。對(duì)照組為同時(shí)期同一地區(qū)無血緣關(guān)系個(gè)體的正常涎腺，共18例。對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行組織固定、包埋、切片等處理后，采用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)波形蛋白（Vimentin，VIM），平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-Smooth muscle actin, α-SMA)，基質(zhì)金屬蛋白酶2(Matrix metalloproteinases-2, MMP-2)在66例PA及18例對(duì)照組中的表達(dá)。使用Image pro-plus6.0(IPP6.0)、SPSS16.0軟件進(jìn)行蛋白定量及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以p＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的PA、ACC組織取自大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院口腔科，均經(jīng)組織病理學(xué)確診。在無菌條件下進(jìn)行原代細(xì)胞提取，置于CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，免疫熒光染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定，待細(xì)胞鋪滿瓶底面積的70-80%時(shí)，取細(xì)胞進(jìn)行遷移試驗(yàn)，在倒置熒光顯微鏡下觀察并拍照，以計(jì)算細(xì)胞遷移面積的大小判斷其遷移速度。 結(jié)果：VIM在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05），α-SMA在PA間質(zhì)中表達(dá)高于對(duì)照組（p＜0.001），MMP-2在PA間質(zhì)中表達(dá)高于對(duì)照組（p＜0.001）。TAFs遷移實(shí)驗(yàn)證明PA來源的TAFs較ACC來源的TAFs遷移速度慢，并且MMP-2在ACC間質(zhì)中表達(dá)高于PA組（p＜0.05）。 結(jié)論：1. TAFs存在于PA組織中。2. PA來源的TAFs比ACC來源的TAFs遷移能力弱。3. MMP-2在正常涎腺、PA及ACC間質(zhì)中的表達(dá)量呈遞增關(guān)系。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R739.8
【圖文】：

圖 1 細(xì)胞遷移裝置示意圖a, 載玻片; b, PDMS驗(yàn)步驟：待細(xì)胞鋪滿瓶底面積的 70-80%時(shí)，倒掉，胰酶消化使細(xì)胞懸浮，用培養(yǎng)液混勻細(xì)胞，移液接種于 PDMS 的兩個(gè)小孔內(nèi)。待細(xì)胞貼壁后，揭去。集及分析用 Olmpus 顯微鏡，物鏡選擇高倍鏡，啟動(dòng)顯微圖位置，使每張切片都使用同一電壓，調(diào)節(jié)白平衡，對(duì)每張組織切片進(jìn)行十個(gè)視野的隨機(jī)拍攝。用 Image pro-plus6.0（IPP6.0）軟件，打開已拍攝好域的不同（陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：棕黃色顆粒，特異性分布于色，選擇 HIS 界面,將 H 選擇在 0-30 的閾值內(nèi)，這分析中，我們均使用十個(gè)視野的平均值進(jìn)行計(jì)算。

正常涎腺及PA的HE染色（A）正常涎腺；（B）PA，肌上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞排列成導(dǎo)管樣結(jié)構(gòu)；（C）PA，肌上皮細(xì)胞排列成團(tuán)片樣；（D）PA，黏液樣組織.Scalebar=50μm

圖 2 正常涎腺及 PA的 HE 染色（A）正常涎腺；（B）PA，肌上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞排列成導(dǎo)管樣結(jié)構(gòu)；（C）PA，肌上皮細(xì)胞排列成團(tuán)片樣；（D）PA，黏液樣組織. Scale bar = 50 μm2 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果VIM 可以標(biāo)記間質(zhì)及間質(zhì)來源的細(xì)胞，正常成纖維細(xì)胞及 TAFs 都表達(dá)VIM，因此可以通過 VIM 的表達(dá)觀察正常涎腺組織及 PA 中間質(zhì)的分布。結(jié)果顯示 VIM 在正常組織的間質(zhì)成纖維細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)（如圖 3A）。PA間質(zhì)中和包膜中的成纖維細(xì)胞內(nèi)也可見到強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（如圖 3B）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩者無顯著性差異（p ＞ 0.05）。同時(shí)，VIM 在對(duì)照組和 PA 組實(shí)質(zhì)部分的肌上皮細(xì)胞也呈陽(yáng)性表達(dá)，�？梢姷竭B成一片的棕黃色顆粒。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 汪廷樂;徐立群;王世唯;裴慶國(guó);宋萌;陳萬濤;;利用基因芯片技術(shù)篩查腮腺多形性腺瘤差異表達(dá)基因的研究[J];口腔頜面外科雜志;2010年05期

2 陳宇,田鯤,耿寧,楊名仲,章衛(wèi)平;基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制劑在涎腺多形性腺瘤生物學(xué)行為中的意義[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2005年01期

本文編號(hào)：2766053