【摘要】：目的:研究組蛋白去乙�；敢种苿�(HDAC inhibitors,HDACi)對(duì)脂多糖刺激下人外周血單個(gè)核細(xì)胞炎癥因子表達(dá)和牙齦干細(xì)胞(gingival stem cells,GMSCs)成骨分化的影響及其相關(guān)分子調(diào)控機(jī)制,以期為牙周炎治療提供新的線索和思路。方法:1.組蛋白去乙酰化酶抑制劑抑制脂多糖刺激下人外周血單個(gè)核細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)取正常人外周血(肝素抗凝),采用葡聚糖-泛影葡胺密度剃度離心法分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),并進(jìn)行培養(yǎng)。處理組加入脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激4小時(shí)后分別加入伏立諾他(Vorinostat,SAHA),曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)和帕比司他(Panobinostat,LBH589),1小時(shí)后收取上清液,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)炎癥因子的表達(dá)。2.組蛋白去乙酰化酶抑制劑調(diào)節(jié)脂多糖刺激下牙齦干細(xì)胞的成骨分化及其作用機(jī)制收集健康的牙齦組織,用酶消化法分離牙齦干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第三代牙齦干細(xì)胞按照分組分別加入脂多糖及SAHA,TSA,LBH589后進(jìn)行成骨誘導(dǎo),誘導(dǎo)5天、7天后進(jìn)行堿性磷酸酶染色和活性檢測(cè),14天后進(jìn)行茜素紅染色及鈣結(jié)節(jié)定量分析。采用RT-PCR檢測(cè)成骨7天后組蛋白去乙�；傅谋磉_(dá)及不同處理組成骨相關(guān)分子OCN、RUNX2、Osx的表達(dá)。按照分組在牙齦干細(xì)胞中加入LPS,TSA,SAHA或LBH589,5分鐘和15分鐘后收取蛋白進(jìn)行Western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)p65和β-catenin蛋白的表達(dá)。結(jié)果:LPS刺激后人外周血單個(gè)核細(xì)胞炎癥因子IFN-γ,IL-6和TNF-ɑ的表達(dá)顯著增加,而加入TSA,SAHA和LBH589后炎癥因子的表達(dá)水平明顯降低。牙齦干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化期間加入LPS可增加部分組蛋白去乙�；傅谋磉_(dá)。牙齦干細(xì)胞成骨分化實(shí)驗(yàn)表明,HDAC抑制劑(TSA,SAHA和LBH589)組較LPS組ALP染色和茜素紅染色增強(qiáng),ALP表達(dá)明顯上調(diào),鈣離子濃度顯著提高,并且成骨相關(guān)分子OCN、RUNX2、Osx的表達(dá)水平上升。Western blot結(jié)果顯示與LPS組相比,HDAC抑制劑組p65 Ser536位點(diǎn)磷酸化水平下降,p65 K310位點(diǎn)的乙�；斤@著上調(diào)。此外,LPS組GMSCs中β-catenin的表達(dá)水平下降,加入TSA,SAHA和LBH58后可上調(diào)β-catenin的表達(dá)。結(jié)論:HDAC抑制劑(TSA,SAHA和LBH589)可以抑制脂多糖刺激下PBMCs促炎因子的產(chǎn)生,挽救脂多糖刺激下牙齦干細(xì)胞成骨分化潛能的降低。其調(diào)節(jié)炎癥環(huán)境下牙齦干細(xì)胞的成骨分化可能與NF-κB信號(hào)通路和Wnt信號(hào)通路有關(guān)。提示HDAC抑制劑(TSA,SAHA和LBH589)在牙周炎和種植體周圍炎等疾病的治療中可能具有應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R781.42

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本文編號(hào)：2765667