發(fā)布時間：2020-07-21 09:53

【摘要】： 動物牙齒及頜面部生長發(fā)育的重要階段包括乳恒牙替換,其中有乳牙根、牙槽骨的吸收,恒牙胚的發(fā)育和恒牙萌出等一系列復雜的生理過程[1]。乳恒牙替換是兒童口腔中的正常生理現(xiàn)象,其中萌出通道的形成,牙槽骨的改建以及乳牙根的吸收,是牙齒正常萌出和替換的先決條件,在這些過程中破骨細胞(OC)起著重要作用,它不僅參與吸收乳牙根、牙槽骨等組織,還為恒牙胚的發(fā)育和萌出開辟道路[2]。但其機制至今不明,因此研究破骨細胞的激活、分化、成熟及表達等生物學特性對了解和調(diào)控乳恒牙的萌出有重要意義。 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是由血小板、巨核細胞、內(nèi)皮細胞和成骨細胞或腫瘤細胞合成和分泌的多功能細胞素,是一種由亞基內(nèi)及亞基間二硫鍵交聯(lián)形成的同源二聚體糖蛋白。VEGF是一類高度特異的血管內(nèi)皮細胞有絲分裂素,具有促進內(nèi)皮細胞增殖、血管生成、增加血管通透性以及血管維持等功能。VEGF既是主要的血管形成因子,又是骨生長因子,與骨代謝關系密切。VEGF能明顯提高大鼠成骨細胞活性、增強其遷移、增殖、分化并加速其骨形成[3]。VEGF可促進破骨細胞分化,維持骨髓功能,且達到類似于巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)的作用。許多研究表明,VEGF在骨代謝過程中協(xié)調(diào)著骨細胞的消長、細胞外基質(zhì)的改建、血管增生及骨形成、骨吸收間的關系。本研究采用細胞培養(yǎng)、免疫組織化學、原位雜交、圖像分析等方法,觀察了體外培養(yǎng)大鼠破骨細胞中VEGF表達情況,以及犬乳恒牙替換過程中乳牙牙根穩(wěn)定期、乳牙根吸收期、恒牙列期三個階段的乳牙牙根、牙槽骨中的破牙細胞、破骨細胞和恒牙胚的成釉細胞、成牙本質(zhì)細胞中VEGF的表達情況。初步探討VEGF在乳恒牙替換期和體外培養(yǎng)破骨細胞中所起的作用。主要研究內(nèi)容及結果如下: 第一部分犬乳恒牙替換期VEGF表達的研究 分別采用免疫組化和原位雜交方法,觀察犬乳牙根穩(wěn)定期、乳牙根吸收期和恒牙列期中VEGF的表達染色情況。 1.犬乳牙牙根穩(wěn)定期:犬乳牙牙根尚未發(fā)生生理性根吸收,乳牙根周圍牙槽骨未見吸收陷窩。恒牙胚處于牙冠發(fā)育階段,恒牙胚牙本質(zhì)、牙釉質(zhì)基質(zhì)開始形成。此時VEGF在牙槽骨的破骨細胞、成骨細胞免疫組化及原位雜交染色陽性,提示VEGF可能參與破骨細胞的分化、成熟,參與犬乳牙牙根穩(wěn)定期的骨質(zhì)改建。恒牙胚的成釉細胞、成牙本質(zhì)細胞VEGF免疫組化及原位雜交染色也為陽性,推測VEGF可能參與恒牙胚的發(fā)育過程。 2.犬乳牙牙根吸收期:犬乳牙牙根發(fā)生生理性吸收,乳牙根面可見多數(shù)吸收陷窩,呈蠶食狀,陷窩中可見多核破牙細胞。牙囊周圍及接近牙胚的牙槽骨陷窩可見多核破骨細胞。恒牙胚冠部牙本質(zhì)、牙釉質(zhì)進一步形成和礦化。此時可見VEGF在乳牙根吸收面的破牙細胞、牙槽骨中的破骨細胞、成骨細胞、恒牙胚的成釉細胞、成牙本質(zhì)細胞免疫組化染色陽性,其中破骨細胞染色為強陽性,提示此期VEGF蛋白表達增強,以促進牙槽骨和乳牙根的吸收。破骨/破牙細胞原位雜交結果為強陽性,成骨細胞、恒牙胚的成釉細胞、成牙本質(zhì)細胞原位雜交結果陽性,提示此期破骨細胞分泌、合成VEGF功能增強。 3.犬恒牙列期:乳牙脫落,恒牙萌出。牙槽骨破骨細胞免疫組化及原位雜交染色弱陽性,染色灰度值均顯著增加,提示破骨細胞VEGF分泌量明顯減少,牙槽骨處于骨質(zhì)改建較弱的時期。 第二部分體外培養(yǎng)大鼠破骨細胞VEGF表達的研究 分別采用免疫組化和原位雜交方法,觀察體外培養(yǎng)大鼠破骨細胞VEGF表達的情況。 實驗取大鼠長骨骨髓,采用骨髓誘導培養(yǎng)方法,培養(yǎng)體系中加入1,25(OH)2D3、IL-1β誘導破骨細胞分化,進行細胞培養(yǎng),倒置顯微鏡觀察破骨細胞形成情況。細胞培養(yǎng)6d后可見有多核巨細胞形成。取原代培養(yǎng)9d后的細胞爬片進行破骨細胞特征性染色鑒定,出現(xiàn)抗酒石酸酸性磷酸酶染色陽性的多核細胞,并且與細胞共同培養(yǎng)的骨片上出現(xiàn)吸收陷窩,即為破骨細胞樣細胞。取所培養(yǎng)的破骨細胞樣細胞進行VEGF免疫組化和原位雜交染色,結果均為陽性,證實體外培養(yǎng)大鼠破骨細胞中有VEGF蛋白和mRNA的表達,提示VEGF可能參與破骨細胞的分化與成熟。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R78
【圖文】：

域的長度約為14kb。外顯子1-5編碼的區(qū)域可能含有識別受體KDR/FLK-1和FLT-1的區(qū)域，該區(qū)域存在于所有種類的VEGF中，外顯子8編碼的氨基酸也存在于所有種類的VEGF中（見下圖1）。各種VEGF之間的差別主要在于是否存在由VEGF基因外顯子6和7編碼的肽鏈。圖1 人VEGF五種異構體的剪接示意圖1.2 蛋白結構VEGF是胱氨酸結生長因子超家族一員，是通過兩對鏈間二硫鍵共價連接的反平行同型二聚體。VEGF單體N端8-109位氨基酸殘基形成的二級結構

圖 2 OC 分泌酸（H+，Cl-），致使骨組織脫礦1.6.4 VEGF 與其它骨生長因子間的關系VEGF與BMP及TGF-β的關系 骨形成蛋白(BMPs)屬于轉化生長因子

TNF等[39，40，41]（見下圖3）。OPG圖3 骨髓基質(zhì)細胞/OB在各種激素、因子的分別作用下形成OC不同的促進骨吸收因子其信號轉導方式也不盡相同，主要分為3類:通過維生素D3受體轉導的信號[1,25(OH)2D3]；通過蛋白激酶A途徑轉導的信號[PTH、IL-1、PGE]以及通過gp130轉導的信號[IL-6、IL-11等]。但骨組織培養(yǎng)

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 王興強,楊富生,葛前進;雙因子對體外培養(yǎng)大鼠破骨細胞的誘導作用[J];牙體牙髓牙周病學雜志;2003年11期

本文編號：2764253