【摘要】：背景和目的 Cthrc1首先在受傷的大鼠血管中發(fā)現(xiàn),它是一種分泌型的糖基化蛋白,具有抑制膠原表達和促進細胞運動的功能。在TGF-β家族的成員(BMP4, BMP2, TGF-β)的影響下,Cthrc1在纖維母細胞和軟骨細胞中的表達升高。Cthrc1也跟很多重要的信號通路有關(guān)系,比如Wnt和TGF-β。體內(nèi)外實驗模型都證明了Cthrc1抑制TGF-β信號通路的功能是通過減少Smad2和Smad3的磷酸化實現(xiàn)的。Cthrc1在腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的表達升高,但是它在其過程中的作用還不清楚。最近的研究證明Cthrc1可以激活Wnt/PCP信號通路,它是非經(jīng)典Wnt途徑的一種。Cthrc1的激活狀態(tài)是一種錨在細胞膜表面的一種N末端糖基化的三聚體。雖然Cthrc1在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的表達升高,但是其過表達的機制和其在病理過程中的功能還不清楚。 Wnt/PCP信號通路在惡性腫瘤的發(fā)展中起著復雜的作用。在惡性腫瘤的早期階段,Wnt/PCP通過抑制Wnt/β信號通路來抑制腫瘤的發(fā)展。隨著腫瘤的成長,在腫瘤的晚期階段,Wnt/PCP被激活并且可以促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移和侵襲,從而促進了腫瘤的轉(zhuǎn)移。先前的研究證明了Wnt/β信號通路在口腔鱗狀細胞癌中是激活的狀態(tài)。并且我們過去的研究也報道了,在口腔鱗狀細胞癌中E-cadherin的大量的N末端糖基化引起的細胞之間粘附的松解。E-cadherin的過度的糖基化又是由于DPAGT1的過表達引起的,DPAGT1是N末端糖基化的重要的調(diào)節(jié)基因。然而,我們近期的研究顯示,DPAGT1基因又是經(jīng)典Wnt信號通路的靶基因。經(jīng)典Wnt信號通路的激活能夠?qū)е耊nt蛋白的N末端糖基化的增加,例如Wnt3a和LRP5/6,并且能夠通過這個正反饋環(huán)引起DPAGT1的進一步高表達。這個反饋環(huán)的不適當?shù)募せ罹湍軌虼龠M口腔鱗狀細胞癌的增值。 Cthrc1是分泌型的糖基化蛋白,所以我們可以推測,Cthrc1在口腔鱗狀細胞癌中的過表達或許是DPAGT1和Wnt/β信號通路形成的這個反饋環(huán)作用的結(jié)果。并且,Cthrc1可能在口腔鱗狀細胞癌中通過激活Wnt/PCP信號通路來促進腫瘤細胞的遷移和腫瘤的轉(zhuǎn)移。 方法 在口腔鱗狀細胞癌腫瘤標本和人舌鱗狀細胞癌細胞Ca127中我們用western blot和免疫熒光的方法檢測了Cthrc1和DPAGT1的蛋白水平的表達。對Cthrc1進行了去糖基實驗。在ca127細胞中,我們沉默掉DPAGT1基因,然后檢測了Cthrc1蛋白的表達水平。染色質(zhì)免疫沉淀實驗檢測了在Cthrc1啟動子上β-catenin和TCF的結(jié)合位點。在Ca127田胞中我們沉默掉Cthrc1基因,然后進行了細胞移動實驗和刮傷愈合實驗。 結(jié)果 在口腔鱗狀細胞癌中Cthrc1表達升高。Cthrc1在很多人類實性腫瘤中表達升高,所以我們在腫瘤標本和腫瘤的臨近正常上皮組織中用western blot和免疫熒光的方法檢測了其蛋白表達水平。Cthrc1的表達在腫瘤組織中比正常組織中有非常顯著的增高。在免疫熒光的結(jié)果中我們看到,在腫瘤上皮島中表達升高,而在正常組織中幾乎沒有表達。過去的研究表明,Cthrc1的激活狀態(tài)是一個錨在細胞膜上的N末端糖基化的三聚體,并且N末端的糖基化對其錨在細胞膜上起著重要的作用。所以我們在腫瘤標本及正常組織中用western blot和免疫熒光的辦法檢測了DPAGT1的表達,發(fā)現(xiàn)DPAGT1在腫瘤組織里的表達遠遠超過正常組織。并且在免疫熒光中我們看到,在正常上皮組織中DPAGT1僅僅在基底層表達,而在腫瘤組織中則是整個腫瘤上皮島都有高表達。Cthrc1是糖基化蛋白,所以我們進行了去糖基實驗,發(fā)現(xiàn)Cthrc1的激活狀態(tài)確實有N末端糖基修飾。 N末端糖基化能夠增加口腔鱗狀細胞癌中Cthrc1蛋白的穩(wěn)定性。有研究證明N末端糖基化增加了Cthrc1的分泌,也是其錨在細胞膜上的重要因素。為了搞清楚N末端糖基化在Cthrc1過表達中起的作用,我們在cal27細胞中沉默掉了DPAGT1基因,從而使得N末端的糖基化減少。這樣我們發(fā)現(xiàn)在沉默掉DPAGT1基因的cal27田胞中的Cthrc1的蛋白水平嚴重下降。隨后我們用環(huán)己酰亞胺處理了經(jīng)DPAGT1siRNA轉(zhuǎn)染的ca127細胞及其對照組,我們發(fā)現(xiàn)N末端的糖基化使Cthrc1的半衰期增加,也就是增加了其穩(wěn)定性。所以我們認為這可能是Cthrc1在口腔鱗狀細胞癌中高表達的一個原因。 經(jīng)典Wnt信號通路的激活也是口腔鱗狀細胞癌中Cthrcl高表達的促進因素。我們過去的研究表明,在口腔鱗狀細胞癌中DPAGT1與經(jīng)典Wnt信號通路形成了一個正反饋的作用環(huán)。在我們的實驗中,經(jīng)過Wnt3a條件培養(yǎng)基培育過的ca127田胞的Cthrc1的表達水平增加。隨后我們在染色質(zhì)免疫沉淀實驗中發(fā)現(xiàn)在Cthrc1的啟動子上有β-catenin和TCF的結(jié)合位點。眾所周知,β-catenin處在經(jīng)典Wnt信號通路的最末端,TCF又是β-catenin的靶基因。所以經(jīng)典Wnt信號通路的激活能夠使Cthrc1勺表達升高。這也許是口腔鱗狀細胞癌中Cthrc1蛋白表達升高的另一種機制。 Cthrc1促進了口腔鱗狀細胞癌的遷移。我們大量的觀察發(fā)現(xiàn),利用DPAGT1cDNA上調(diào)Cthrc1表達之后,在刮傷愈合實驗中傷口邊緣的Cthrc1表達增多和傷口愈合加快,這都說明Cthrc1可能具有促進了細胞遷移的功能。因此我們在Ca127細胞中沉默掉Cthrc1,進行了細胞移動實驗和刮傷愈合實驗。在細胞移動實驗中沉默組細胞移動率比對照組明顯降低,在刮傷愈合實驗中沉默組愈合速度比對照組明顯減慢。這些結(jié)果表明在Ca127細胞中Cthrc1是具有促進細胞遷移的功能的。 DPAGT1轉(zhuǎn)染的CAL27細胞中的Cthrc1在遷移的邊緣位置表達升高的特點說明了Cthrc1的促進細胞遷移的功能是依賴于Wnt/RhoA信號通路的。確實如此,繼western blot之后免疫沉淀實驗表明Cthrc1與Wnt/PCP的配體Wnt5a,受體Fzd6有相互的結(jié)合作用。并且,Wnt5a在腫瘤中表達水平比正常組織中有明顯的增高。所以,這些都說明在口腔鱗狀細胞癌中,Cthrcl可能通過一個非經(jīng)典Wnt信號通路Wnt/PCP信號通路來促進細胞的遷移。 結(jié)論 我們的結(jié)果證明了N末端糖基化和經(jīng)典Wnt信號通路的激活能夠引起Cthrcl的表達升高,也就是DPAGT1與Wnt/β信號通路形成的反饋環(huán)的異常激活能夠?qū)е翪thrc1在口腔鱗狀細胞癌中的異常高表達。 結(jié)果也間接的說明,Cthrc1可能通過Wnt/PCP信號通路在口腔鱗狀細胞癌的晚期促進癌細胞的遷移,從而導致腫瘤的轉(zhuǎn)移。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.8

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 賁呈瑞,向彬;口腔鱗狀細胞癌與人乳頭狀瘤病毒感染的關(guān)系[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學雜志;1997年02期

2 劉杰,黃洪章;口腔鱗狀細胞癌Rb基因的檢測[J];口腔頜面外科雜志;1998年02期

3 聶敏海;馮燕;;口腔鱗狀細胞癌中細胞角蛋白研究進展[J];實用醫(yī)院臨床雜志;2007年02期

4 朱虹,曾慶華,白淑清,王影,歐陽喈;CD44 v6在口腔鱗狀細胞癌中表達的意義[J];華西口腔醫(yī)學雜志;1998年03期

5 董瀅;史培榮;;口腔鱗狀細胞癌組織中CyclinD_3的表達及意義[J];山西醫(yī)藥雜志;2011年06期

6 高文信,周傳香,王雷;PTEN和VEGF在口腔鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的表達及意義[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學雜志;2004年05期

7 王志軍;萬飛;劉來奎;陳湘華;;P16及CyclinD1在口腔白斑和鱗狀細胞癌中的表達及意義[J];實用老年醫(yī)學;2005年06期

8 李立;楊明明;劉鐸;葉歐江;;細胞凋亡指數(shù)在口腔鱗狀細胞癌中的變化[J];江蘇醫(yī)藥;2008年09期

9 王雪;張茹慧;余立江;;Skp2在口腔鱗狀細胞癌中的表達[J];口腔醫(yī)學研究;2008年01期

10 ;口腔、頜面部腫瘤[J];國外科技資料目錄(醫(yī)藥衛(wèi)生);2000年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 吳衍昌;李芳;;熱休克蛋白60在口腔鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

2 蘇樂;沈愛國;胡繼明;;口腔鱗狀細胞癌組織以及細胞的拉曼光譜研究[A];第十六屆全國光散射學術(shù)會議論文摘要集[C];2011年

3 李明賀;張茹慧;吳國民;;CD44 podoplanin在口腔鱗狀細胞癌中的表達及其意義[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

4 張偉偉;熊學鵬;何三綱;張文峰;;≤40歲年輕女性口腔鱗狀細胞癌的臨床特點分析[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

5 馬利;;信號轉(zhuǎn)導蛋白p65在放療誘導口腔鱗狀細胞癌細胞凋亡中的作用[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

6 羅軍;季彤;楊雯君;田臻;鐘來平;;Maspin蛋白在口腔鱗狀細胞癌中的表達及意義[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

7 孫祖俊;陳福祥;;SENP3在口腔鱗狀細胞癌中的表達[A];中華醫(yī)學會第九次全國檢驗醫(yī)學學術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學術(shù)會議論文匯編[C];2011年

8 王雪;張茹慧;;p27和增殖細胞核抗原在口腔鱗狀細胞癌中的表達[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

9 李勝鋒;張東升;;cN_0口腔鱗狀細胞癌患者不同頸淋巴清掃術(shù)式的預后生存分析[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

10 魯大鵬;祝華s

本文編號：2764113