【摘要】：目的:瞬時感受器電位香草酸受體1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)通道是神經(jīng)纖維以及具有感知功能細胞發(fā)揮感覺作用的關(guān)鍵分子之一。瞬時受體電位錨蛋白1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)通道常參與疼痛,熱和化學(xué)感覺。TMEM100跨膜蛋白參與調(diào)控TRPV1和TRPA1通道蛋白。已有研究報道TRPA1和TRPV1通道在HODs(Human odontoblasts,HODs)細胞表達。目前尚未見HODs細胞是否表達TMEM100跨膜蛋白的相關(guān)報道。實驗從細胞水平對人成牙本質(zhì)細胞是否表達TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白進行研究,觀察TRPA1、TRPV1和TMEM100三種蛋白在HODs中的表達情況和分布特點,分析在HODs上TRPA1、TRPV1和TMEM100三種蛋白是否共表達,有助于更深入地了解牙髓感覺傳導(dǎo)機制。方法:1.收集就診于天津醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院口腔頜面外科18-25歲患者,因阻生和正畸等原因新鮮拔除的完整健康的第三磨牙,進行固定,配制乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)脫鈣液對牙齒進行脫鈣處理、石蠟包埋和近遠中向切片,通過普通蘇木精-伊紅(Hematoxylin-eosin,HE)染色確定組織切片質(zhì)量。2.通過免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)染色法檢測牙本質(zhì)涎磷蛋白抗體(Dentin sialophosphoproteins,DSPP)和巢蛋白(nestin)的表達情況,鑒定并定位成牙本質(zhì)細胞(odontoblasts,ODs)層,檢測TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白在HODs表達的情況,使用光學(xué)顯微鏡及圖像系統(tǒng)采集不同部位ODs的圖片觀察其在ODs層分布特點。3.采用多標記免疫熒光染色(immunofluorescence,IF),基于抗原、抗體特異性結(jié)合的原理,借助不同的熒光染色燃料標記,多輪循環(huán)染色來判斷TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白在HODs上的表達部位及共定位關(guān)系,應(yīng)用多光譜成像、信號分拆技術(shù)和成像分析軟件測量細胞內(nèi)的染色定位,并根據(jù)染色光密度和在單個細胞基礎(chǔ)上的染色進行定量分析。結(jié)果:1.顯微鏡下,普通HE染色顯示切片各組織細胞的形態(tài)完整清晰,為后續(xù)的IHC染色研究奠定實驗基礎(chǔ)。2.IHC染色結(jié)果證實在人牙髓組織切片不同部位ODs細胞均有DSPP及nestin陽性表達,并與HE染色的ODs細胞組織學(xué)位置一致。TRPA1通道蛋白在HODs細胞胞體及細胞突起均明顯呈陽性表達。TRPV1通道蛋白在HODs細胞胞體及近細胞突起明顯表達,TMEM100蛋白主要在HODs細胞胞體和細胞突起呈弱陽性表達。3.多標記IF染色顯示,同一切片同一視野下,在HODs細胞層中TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白共同表達。在ODs細胞胞體和突起,三者表達部位具有高度重疊區(qū)域,且三者相關(guān)關(guān)系分析顯示,在ODs上,TRPA1~+、TRPV1~+、TMEM100~+三個變量之間存在顯著的強相關(guān)。結(jié)論:1.IHC研究結(jié)果表明TRPA1和TRPV1通道蛋白在HODs細胞胞體及細胞突起均明顯呈陽性表達。TMEM100蛋白主要在HODs細胞胞體和細胞突起呈弱陽性表達。2.多標記IF染色研究表明部分HODs細胞胞體及突起中TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白共同表達,在ODs上,TRPA1~+、TRPV1~+、TMEM100~+三個變量之間存在顯著的強相關(guān)。提示HODs細胞上TRPA1和TRPV1、TMEM100蛋白可能共表達并相互作用。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R78
【圖文】：

H&E染色（×200）

DSPPIHC染色（×200）

nestin IHC 染色（×200）

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本文編號：2762610