【摘要】：目的:瞬時感受器電位香草酸受體1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)通道是神經(jīng)纖維以及具有感知功能細(xì)胞發(fā)揮感覺作用的關(guān)鍵分子之一。瞬時受體電位錨蛋白1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)通道常參與疼痛,熱和化學(xué)感覺。TMEM100跨膜蛋白參與調(diào)控TRPV1和TRPA1通道蛋白。已有研究報道TRPA1和TRPV1通道在HODs(Human odontoblasts,HODs)細(xì)胞表達(dá)。目前尚未見HODs細(xì)胞是否表達(dá)TMEM100跨膜蛋白的相關(guān)報道。實驗從細(xì)胞水平對人成牙本質(zhì)細(xì)胞是否表達(dá)TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白進(jìn)行研究,觀察TRPA1、TRPV1和TMEM100三種蛋白在HODs中的表達(dá)情況和分布特點,分析在HODs上TRPA1、TRPV1和TMEM100三種蛋白是否共表達(dá),有助于更深入地了解牙髓感覺傳導(dǎo)機(jī)制。方法:1.收集就診于天津醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院口腔頜面外科18-25歲患者,因阻生和正畸等原因新鮮拔除的完整健康的第三磨牙,進(jìn)行固定,配制乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)脫鈣液對牙齒進(jìn)行脫鈣處理、石蠟包埋和近遠(yuǎn)中向切片,通過普通蘇木精-伊紅(Hematoxylin-eosin,HE)染色確定組織切片質(zhì)量。2.通過免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)染色法檢測牙本質(zhì)涎磷蛋白抗體(Dentin sialophosphoproteins,DSPP)和巢蛋白(nestin)的表達(dá)情況,鑒定并定位成牙本質(zhì)細(xì)胞(odontoblasts,ODs)層,檢測TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白在HODs表達(dá)的情況,使用光學(xué)顯微鏡及圖像系統(tǒng)采集不同部位ODs的圖片觀察其在ODs層分布特點。3.采用多標(biāo)記免疫熒光染色(immunofluorescence,IF),基于抗原、抗體特異性結(jié)合的原理,借助不同的熒光染色燃料標(biāo)記,多輪循環(huán)染色來判斷TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白在HODs上的表達(dá)部位及共定位關(guān)系,應(yīng)用多光譜成像、信號分拆技術(shù)和成像分析軟件測量細(xì)胞內(nèi)的染色定位,并根據(jù)染色光密度和在單個細(xì)胞基礎(chǔ)上的染色進(jìn)行定量分析。結(jié)果:1.顯微鏡下,普通HE染色顯示切片各組織細(xì)胞的形態(tài)完整清晰,為后續(xù)的IHC染色研究奠定實驗基礎(chǔ)。2.IHC染色結(jié)果證實在人牙髓組織切片不同部位ODs細(xì)胞均有DSPP及nestin陽性表達(dá),并與HE染色的ODs細(xì)胞組織學(xué)位置一致。TRPA1通道蛋白在HODs細(xì)胞胞體及細(xì)胞突起均明顯呈陽性表達(dá)。TRPV1通道蛋白在HODs細(xì)胞胞體及近細(xì)胞突起明顯表達(dá),TMEM100蛋白主要在HODs細(xì)胞胞體和細(xì)胞突起呈弱陽性表達(dá)。3.多標(biāo)記IF染色顯示,同一切片同一視野下,在HODs細(xì)胞層中TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白共同表達(dá)。在ODs細(xì)胞胞體和突起,三者表達(dá)部位具有高度重疊區(qū)域,且三者相關(guān)關(guān)系分析顯示,在ODs上,TRPA1~+、TRPV1~+、TMEM100~+三個變量之間存在顯著的強(qiáng)相關(guān)。結(jié)論:1.IHC研究結(jié)果表明TRPA1和TRPV1通道蛋白在HODs細(xì)胞胞體及細(xì)胞突起均明顯呈陽性表達(dá)。TMEM100蛋白主要在HODs細(xì)胞胞體和細(xì)胞突起呈弱陽性表達(dá)。2.多標(biāo)記IF染色研究表明部分HODs細(xì)胞胞體及突起中TRPA1、TRPV1和TMEM100蛋白共同表達(dá),在ODs上,TRPA1~+、TRPV1~+、TMEM100~+三個變量之間存在顯著的強(qiáng)相關(guān)。提示HODs細(xì)胞上TRPA1和TRPV1、TMEM100蛋白可能共表達(dá)并相互作用。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R78
【圖文】：

H&E染色（×200）

DSPPIHC染色（×200）

nestin IHC 染色（×200）

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周怡君;劉蒼維;閆廣興;王爽爽;葉佳朋;張雪;胡月;郝新青;史冊;孫宏晨;;活化蛋白A受體1在成牙本質(zhì)細(xì)胞極化和牙本質(zhì)形成中的作用[J];口腔頜面外科雜志;2019年06期

2 Wang HS;Yang FH;Wang YJ;趙澤亮;;成牙本質(zhì)細(xì)胞外泌體減輕鄰近細(xì)胞凋亡[J];中國口腔頜面外科雜志;2019年06期

3 趙穎煊;趙守亮;唐榮銀;呂海鵬;閆晶;侯銳;;人成牙本質(zhì)細(xì)胞L型鈣離子通道特異性基因片段的克隆研究[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2008年04期

4 宋瑋,趙守亮,石勇,何文喜;人成牙本質(zhì)細(xì)胞的分離和鑒定[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2005年02期

5 崔春,陳智;基膜及其相關(guān)分子在成牙本質(zhì)細(xì)胞分化中的作用[J];國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊;2004年01期

6 王曉春,梁景平;成牙本質(zhì)細(xì)胞分離技術(shù)的新進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊;2004年06期

7 李明偉;李鵬;陳博;白玉;程庚;薛云鵬;肖敏;余擎;;脂多糖對成牙本質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞連接影響的體外研究[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2014年04期

8 姜永;肖明振;楊帆;何文喜;范曉敏;;成牙本質(zhì)細(xì)胞中成纖維細(xì)胞生長因子18的表達(dá)[J];中國臨床康復(fù);2006年37期

9 王捍國,肖明振,趙守亮,郝建軍,張進(jìn);永生化人成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞系的建立[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2003年10期

10 王發(fā)生;;鈉鈣交換體1型通道蛋白在人牙髓成牙本質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)纖維組織中的表達(dá)[J];中國民康醫(yī)學(xué);2016年17期

相關(guān)會議論文 前10條

1 呂海鵬;趙守亮;史俊南;Athony J.Smith;;人成牙本質(zhì)細(xì)胞L型鈣離子通道α1亞基D亞型特異性基因的原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定[A];全國第三次牙體牙髓病學(xué)臨床技術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

2 田衛(wèi)東;謝家敏;劉磊;湯煒;鄭曉輝;李聲偉;;人類牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的實驗研究[A];2007年第七次全國牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 裴斐;;自噬調(diào)節(jié)成牙本質(zhì)細(xì)胞分化及牙本質(zhì)形成[A];2019第九次全國口腔生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2019年

4 郝玉慶;王國荃;劉開泰;;過量氟對培養(yǎng)人牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞合成分泌Ⅰ型膠原的影響[A];新世紀(jì)預(yù)防醫(yī)學(xué)面臨的挑戰(zhàn)——中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會首屆學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2002年

5 朱曉茹;趙守亮;唐榮銀;張蓉;李玉成;;人牙切片器官培養(yǎng)模型的建立[A];2007年第七次全國牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

6 賀丹;吳麗更;闕克華;;內(nèi)源性大麻素AEA調(diào)控HODs細(xì)胞分泌MMP-2的機(jī)制[A];第十次全國老年口腔醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2015年

7 謝家敏;田衛(wèi)東;陳希哲;鄭曉輝;湯煒;劉磊;;體外誘導(dǎo)人牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞分化[A];2004年中國口腔頜面修復(fù)重建外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

8 陳智;;成牙本質(zhì)細(xì)胞分化的調(diào)控機(jī)制—Klf4及其表觀遺傳因子的作用[A];2014年第九次全國牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

9 占云燕;裴斐;陳智;;HDAC6通過調(diào)控自噬體與溶酶體融合影響自噬過程參與成牙本質(zhì)細(xì)胞分化[A];2019第九次全國口腔生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2019年

10 郝新青;周怡君;胡月;劉蒼維;閆廣興;王爽爽;史冊;孫宏晨;;極性蛋白PAR3在小鼠下頜磨牙成牙本質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)淺析[A];2019年中華口腔醫(yī)學(xué)會口腔病理學(xué)專業(yè)委員會第十三次全國口腔病理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2019年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 洪亞蘭;厭食蔬菜對健康的危害[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

2 記者 楊念明　通訊員 龍華 實習(xí)生 文金匯;我省5個課題入選國家973前期專項[N];湖北日報;2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 萬春燕;基質(zhì)金屬蛋白酶-9在小鼠根尖周炎/牙周炎中的作用以及牙本質(zhì)涎蛋白調(diào)控成牙本質(zhì)細(xì)胞分化的研究[D];武漢大學(xué);2015年

2 賈杰;Dspp突變打破小鼠成牙本質(zhì)細(xì)胞分化過程的礦化平衡機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2016年

3 劉釗;HDAC抑制劑LMK-235對DPCs成牙本質(zhì)細(xì)胞向分化的作用及機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

4 李霞;TRAF6對成牙本質(zhì)細(xì)胞功能的調(diào)控作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

5 姜永;成纖維細(xì)胞生長因子18對成牙本質(zhì)細(xì)胞分化的作用及信號傳導(dǎo)通路的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

6 陳新梅;甲狀旁腺激素對牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞、組織影響的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1998年

7 李玉成;組織工程化牙根組織的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2007年

8 何文喜;Smads信號分子在成牙本質(zhì)細(xì)胞分化中作用的研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

9 黃欣;成牙本質(zhì)細(xì)胞分化中microRNA靶向調(diào)控牙本質(zhì)涎磷蛋白基因的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

10 韓娜娜;β-catenin在牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向分化過程中的作用機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王瑜;TRPA1、TRPV1與TMEM100三種蛋白在人成牙本質(zhì)細(xì)胞中共表達(dá)的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2019年

2 文靜;N-花生四烯酸氨基乙醇調(diào)控人成牙本質(zhì)樣細(xì)胞MMP-2表達(dá)相關(guān)miRNA的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2019年

3 謝金芳;Matrilin-4對大鼠牙髓損傷后的修復(fù)作用[D];吉林大學(xué);2019年

4 袁芳;SLPI在成牙本質(zhì)細(xì)胞分化中的作用和機(jī)制研究[D];昆明理工大學(xué);2018年

5 李媛;FoxO3a調(diào)控自噬參與成牙本質(zhì)細(xì)胞炎性損傷修復(fù)的機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2018年

6 宋瑋;人成牙本質(zhì)細(xì)胞的分離和鑒定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 吳煜;過量氟對大鼠牙髓成牙本質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響及免疫組化的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2005年

8 趙穎煊;人成牙本質(zhì)細(xì)胞L型鈣離子通道α_1亞基D亞型特異性基因的克隆研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

9 段晴月;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞的體內(nèi)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 朱曉茹;人成牙本質(zhì)細(xì)胞L型鈣離子通道α_1亞基對牙本質(zhì)礦化的影響研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2007年

本文編號：2762610