【摘要】：目的:研究單鏈DNA結(jié)合蛋白1(single-stranded DNA-binding protein1,SSB1)在大鼠頜下腺(submandibular gland,SMG)組織及上皮細(xì)胞放射性損傷修復(fù)中mRNA及蛋白表達(dá)的變化規(guī)律,探討SSB1與DNA雙鏈斷裂(double-strand breaks,DSB)損傷修復(fù)的關(guān)系;并初步探討大鼠頜下腺DSB損傷修復(fù)中SSB1與NBS1的變化關(guān)系及相互作用。方法:1.SD大鼠~(60)Coγ放射性損傷模型建立,用Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)檢測(cè)大鼠頜下腺組織正常對(duì)照組與照射12Gy放射劑量后不同時(shí)間點(diǎn)(1、2、3、4、5、6、7、8小時(shí))組中SSB1基因mRNA的表達(dá);用qRT-PCR、免疫印跡(western blot,WB)分別檢測(cè)鼠頜下腺組織正常對(duì)照組與不同放射劑量(3、6、9、12、15Gy)組SSB1mRNA及蛋白表達(dá)。2.體外培養(yǎng)SMG上皮細(xì)胞,用qRT-PCR檢測(cè)正常對(duì)照組與不同放射劑量(1、2、4、6、8Gy)組大鼠SMG上皮細(xì)胞SSB1mRNA的表達(dá);用WB同時(shí)檢測(cè)正常對(duì)照組與不同放射劑量(1、2、4、6、8Gy)組大鼠SMG上皮細(xì)胞SSB1及NBS1蛋白表達(dá)。3.構(gòu)建大鼠rAdE5-SSB1-1p2shRNA重組腺病毒,并進(jìn)一步轉(zhuǎn)染大鼠SMG上皮細(xì)胞(rAd-shRNA組),增設(shè)空白質(zhì)粒對(duì)照組(rAd-HK組)及空白對(duì)照組(control組),通過WB法檢測(cè)SSB1沉默效果及NBS1蛋白表達(dá)情況。4.進(jìn)一步使用大鼠rAdE5-SSB1-1p2shRNA重組腺病毒轉(zhuǎn)染SMG上皮細(xì)胞,沉默SSB1基因表達(dá)后,照射不同放射劑量(0、6Gy)后分為rAd-shRNA、rAd-shRNA+IR組,另設(shè)單純照射6Gy組(Irradiation,IR組)及空白對(duì)照組(control組),用WB檢測(cè)SSB1及NBS1蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.大鼠頜下腺組織經(jīng)~(60)Coγ12Gy放射劑量照射后,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),SSB1mRNA的相對(duì)表達(dá)量先增高后逐漸減低,于4h組達(dá)到高峰,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;~(60)Coγ不同放射劑量照射后,隨著放射劑量的增高,SSB1 mRNA、蛋白的相對(duì)表達(dá)量先增高后減低并皆于9Gy放射劑量組達(dá)到峰值,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.不同放射劑量照射后大鼠SMG上皮細(xì)胞SSB1基因mRNA表達(dá)隨劑量的增加而增加,在2Gy組達(dá)到最高峰,隨后逐漸下降;SSB1、NBS1蛋白表達(dá)量皆隨著照射劑量的增加先增加后降低,在2Gy組達(dá)到高峰;p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.WB分析結(jié)果表明,rAd-shRNA組SSB1、NBS1蛋白相對(duì)表達(dá)量均較rAd-HK組、control組顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05);rAd-HK組與control組比較,均p0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.沉默SMG上皮細(xì)胞SSB1基因后,rAd-shRNA+IR組及rAd-shRNA組NBS1基因蛋白表達(dá)量與control組相比皆出現(xiàn)下調(diào),p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而IR組SSB1、NBS1蛋白相對(duì)表達(dá)量較control組高,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:在大鼠頜下腺組織及SMG上皮細(xì)胞放射性損傷修復(fù)中SSB1基因mRNA及蛋白表達(dá)無劑量依賴性,其表達(dá)量隨放射劑量的增加先增加后降低;成功沉默大鼠SMG上皮細(xì)胞SSB1基因,SSB1沉默可下調(diào)NBS1蛋白表達(dá),二者存在協(xié)同關(guān)系。在大鼠頜下腺放射性損傷修復(fù)中,SSB1可能是DSB修復(fù)通路信號(hào)啟動(dòng)的鑰匙。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R781.7
【圖文】：

圖3-160Coγ12Gy放射后不同時(shí)間點(diǎn)大鼠頜下腺組織SSB1mRNA相對(duì)表達(dá)量re3-1 The relative expression of SSB1 mRNAin submandibular gland tissues after iGy dose注：* 與對(duì)照組比較，p<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義Coγ不同放射劑量照射后大鼠頜下腺組織 SSB1mRN變化劑量升高SSB1mRNA的相對(duì)表達(dá)量先增高后減低，放射劑mRNA相對(duì)表達(dá)量達(dá)最高。行單因素方差分析，p<0.05，。組間兩兩比較，6、9、12Gy放射組與對(duì)照組比較，p<學(xué)意義。表 3-260Coγ不同放射劑量照射后大鼠頜下腺組織 SSB1mRNA 相對(duì)表達(dá)量he relative expression of SSB1 mRNA in submandibular gland tissues after irradiat

圖3-260Coγ不同放射劑量照射后大鼠頜下腺組織SSB1mRNA相對(duì)表達(dá)量ure3-2 The relative expression of SSB1 mRNA in submandibular gland tissues afterdifference doses注：* 與對(duì)照組比較，p<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義oγ不同放射劑量照射后大鼠頜下腺組織SSB1蛋白表劑量升高SSB1蛋白相對(duì)表達(dá)量先增高后減低，放射劑量白相對(duì)表達(dá)量達(dá)最高，行單因素方差分析，p<0.05，差異有間兩兩比較，6、9、12Gy放射組與對(duì)照組比較，p<0.05，義。

圖3-260Coγ不同放射劑量照射后大鼠頜下腺組織SSB1mRNA相對(duì)Figure3-2 The relative expression of SSB1 mRNA in submandibular gland tissudifference doses注：* 與對(duì)照組比較，p<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義3.360Coγ不同放射劑量照射后大鼠頜下腺組織SSB1蛋隨著劑量升高SSB1蛋白相對(duì)表達(dá)量先增高后減低，放射SB1蛋白相對(duì)表達(dá)量達(dá)最高，行單因素方差分析，p<0.05，義；組間兩兩比較，6、9、12Gy放射組與對(duì)照組比較，p<計(jì)學(xué)意義。

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本文編號(hào)：2760255