【摘要】：目的:齲病是目前世界上發(fā)病率最高的口腔疾病之一。齲病的進程根據(jù)其入侵牙體組織的深度分為淺、中、深齲。而對于已經(jīng)形成齲洞的牙體而言,牙體硬組織尚未發(fā)現(xiàn)任何可以再生的手段,因此目前僅有的治療方法就是通過機械性或者化學性的方法預備去除掉已經(jīng)齲壞組織,并在牙體組織上磨除一定量的健康組織預備充填洞型,隨后代之以修復材料充填,這種治療方法會導致牙體組織過多喪失,剩余的冠部牙體組織更容易折斷。這一現(xiàn)狀提醒我們,預防中、深齲的形成,治療早期尚未形成齲洞的患牙是口腔預防的重要任務,這也符合微創(chuàng)牙科學(Minimally Invasive Dentistry,MID)的原則。在牙體硬組織尚未形成實質(zhì)缺損而僅存在脫礦的條件下最大限度地發(fā)揮牙體自身的愈合潛能,阻斷齲病進展,修復缺失的牙體結(jié)構(gòu)和功能是牙體牙髓臨床需要追求的目標之一。牙齒再礦化是微創(chuàng)牙科的重要治療技術(shù)之一。牙釉質(zhì)再礦化,對于臨床預防和治療如正畸后的白堊齲等釉質(zhì)早期齲壞具有極高價值。如果能夠利用脫礦牙釉質(zhì)表面尚未發(fā)生損壞的牙體硬組織結(jié)構(gòu)進一步仿生再礦化出與天然牙釉質(zhì)相近的結(jié)構(gòu)組織,對于保留整個牙體而言起著至關(guān)重要的作用,這一思路也被稱作仿生礦化。但現(xiàn)有的再礦化方法操作均比較困難,難以滿足臨床上對于操作時間簡便快捷以及特異性連接在牙釉質(zhì)表面等基本需求,且再礦化的作用結(jié)果與天然牙釉質(zhì)表征相去甚遠。在牙體發(fā)育過程中,釉原蛋白對于牙釉質(zhì)的形成起主要作用。其具有誘導無定形磷酸鈣顆粒定向有序沿C軸排列并在降解后促進無定形磷酸鈣向羥基磷灰石轉(zhuǎn)化的能力。實驗證明在缺乏了釉原蛋白中關(guān)鍵序列的大鼠中,均出現(xiàn)了肉眼可見的明顯牙釉質(zhì)形成缺陷癥。本研究創(chuàng)新性地合成了一條誘導合成仿生多肽序列,其組成包括了釉原蛋白的關(guān)鍵序列和特異性羥基磷灰石連接序列。旨在提供一個通過仿生多肽引導的快速仿生再礦化牙釉質(zhì)齲模型的再礦化方法,通過體外牙體組織實驗驗證合成的仿生多肽對于無定形磷酸鈣顆粒的誘導排列能力以及在牙表面再礦化的能力。進而為以后投入臨床牙釉質(zhì)再礦化才做提供一定參考。方法:本實驗選取了10顆正畸前要求拔除的尚未完全萌出的埋伏阻生齒,要求阻生齒完整拔除。將每顆牙體的從軸面四個方向(頰側(cè)、舌側(cè)、近中、遠中)使用金剛砂磨頭均勻切割下4片厚度一致的釉質(zhì)片。每顆牙的4個釉質(zhì)片隨機分配到A、B、C、D四個組中。A組、B組、C組均使用37%磷酸進行牙釉質(zhì)表面酸蝕30s模仿脫礦后的牙齒表面以及臨床操作,D組作為天然牙對照組不做酸蝕處理。隨后B組使用經(jīng)次氯酸鈉(Na Cl O)處理的羧甲基殼聚糖/無定形磷酸鈣(CMC/ACP)再礦化牙體表面,而C組中加入仿生多肽引導的經(jīng)Na Cl O處理的CMC/ACP基于模仿釉原蛋白對ACP的生物礦化的影響。實驗結(jié)果從透射電鏡(TEM)/掃描電鏡(SEM)/激光共聚焦顯微鏡(CLASM)/X射線衍射(XRD)/納米壓痕試驗(nano-indentation)表征礦化后的牙體硬組織結(jié)果。結(jié)果:1、CMC可以穩(wěn)定高濃度過飽和的ACP,形成CMC/ACP納米復合物。2、在人工釉質(zhì)齲模型中,Na Cl O快速降解CMC/ACP納米復合物以模擬基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-20)和激肽釋放酶(KLK4)等釉原蛋白降解酶的作用,并在仿生多肽誘導下,使得納米顆�？焖俣禺愋缘脑谟再|(zhì)表面形成再礦化。3、再礦化得到的牙釉質(zhì)表面機械性能(硬度及彈性模量)與天然牙釉質(zhì)類似。結(jié)論:這種新型合成仿生多肽能夠促進ACP快速向HAP晶體轉(zhuǎn)化并特異性的連接在缺損釉質(zhì)表面,形成的仿生HAP結(jié)構(gòu)和機械強度與天然牙釉質(zhì)晶體類似,臨床上可以進一步用于白堊齲的直接快速治療和預防,并符合微創(chuàng)口腔醫(yī)學的要求。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R788.1
【圖文】：

XRD 特征峰比率、馬爾文粒徑分布統(tǒng)計、經(jīng)由納米壓痕實驗所得到的樣品表面彈性模量和硬度值的統(tǒng)計均使用 one-wayANOVA 評估 95%置信區(qū)間。進行了 95%置信水平的多范圍檢驗（采用 Fisher 的最小顯著性差異（LSD）程序），以確定統(tǒng)計上群體的同質(zhì)性。對于機械測試，student’t 檢驗用于確認酸蝕后、天然牙以及再礦化組之間硬度和彈性模量的差異。1.3 結(jié)果1.3.1 多肽二級結(jié)構(gòu)預測利用在線軟件 PSIPRED 預測 PA 的二級結(jié)構(gòu)，預測結(jié)果如圖 1 所示。PA 有三個部分構(gòu)成，包括 CT-16 序列、HA6-1 序列以及期間的 GGGGS 柔性連接體。這兩個功能序列分別是誘導序列和結(jié)合序列。經(jīng)過對其序列的基本性質(zhì)和二級結(jié)構(gòu)預測可知，該合成多肽序列極易溶于水，等電點位于 pH=6.58 處。二級結(jié)構(gòu)中 CT-16 序列發(fā)生螺旋，與釉原蛋白中 C 末端表現(xiàn)一致。并且二級結(jié)構(gòu)中并未表現(xiàn)出多肽序列中的彼此影響，三段結(jié)構(gòu)均可完整存在，未發(fā)生序列之間的螺旋或者折疊結(jié)構(gòu)。這一結(jié)果為多肽序列發(fā)揮各自功能奠定了基礎(chǔ)。

11圖 3：馬爾文激光顆粒計數(shù)儀計數(shù)納米顆粒直徑分布圖。1.3.3 再礦化后納米壓痕及機械性能比較結(jié)果從納米壓痕檢測得到的負載曲線如圖 4 所示。在相同的載荷力（100mN）作用下，不同組釉質(zhì)表面的位移深度存在明顯差異。A 組表現(xiàn)出最深的位移（圖4 中的黑色曲線）。相比之下，B 組和 C 組（分別為橙色和藍色線）的位移深度相比于 A 組有了明顯的回復。C 組的再礦化結(jié)果表面合成多肽組的釉質(zhì)的力學性能恢復程度最高。與天然牙釉質(zhì)組（粉紅線）最為接近。根據(jù)納米壓痕檢測得到了全部樣本表面的彈性模量和硬度值。其統(tǒng)計結(jié)果分別記錄在表 1 中。脫礦處理后各組的彈性模量和硬度值均顯著降低（p＜0.001）。而 C 組經(jīng)由合成多肽引導的經(jīng) NaClO 處理的 CMC/ACP 組顯出出與天然牙釉質(zhì)相近的（P > 0.05）彈性模量和硬度，表現(xiàn)出本實驗再礦化方法對于脫

不同組釉質(zhì)表面的位移深度存在明顯差異。A 組表現(xiàn)出最深的位移（圖4 中的黑色曲線）。相比之下，B 組和 C 組（分別為橙色和藍色線）的位移深度相比于 A 組有了明顯的回復。C 組的再礦化結(jié)果表面合成多肽組的釉質(zhì)的力學性能恢復程度最高。與天然牙釉質(zhì)組（粉紅線）最為接近。根據(jù)納米壓痕檢測得到了全部樣本表面的彈性模量和硬度值。其統(tǒng)計結(jié)果分別記錄在表 1 中。脫礦處理后各組的彈性模量和硬度值均顯著降低（p＜0.001）。而 C 組經(jīng)由合成多肽引導的經(jīng) NaClO 處理的 CMC/ACP 組顯出出與天然牙釉質(zhì)相近的（P > 0.05）彈性模量和硬度，表現(xiàn)出本實驗再礦化方法對于脫

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本文編號：2758450