【摘要】： 目的:研究γ射線對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞線粒體DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)相關(guān)基因Tfam、OGG1和POLG表達(dá)的影響,并通過抑制線粒體DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)而增加γ射線不敏感的口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的凋亡。 方法:體外培養(yǎng)OSC-2和OSC-5細(xì)胞,并用γ射線處理,MTT比色法和流式細(xì)胞儀檢測口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞存活率,氣相色譜/質(zhì)譜(GC/MS)法測定細(xì)胞核與線粒體中8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)的含量,DNA聚合酶鏈反應(yīng)檢測mtDNA基因位點(diǎn)的缺失,RNA干涉技術(shù)敲除相關(guān)基因,半定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測相關(guān)mRNA的表達(dá)水平,Western Blot檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:經(jīng)過30Gyγ射線處理后OSC-2和OSC-5細(xì)胞的存活率分別為(35.33±6.03)%和(75.67±4.16)%;nDNA和mtDNA中8-OHdG的含量增加(P0.05);?mtDNA也呈現(xiàn)較高水平。OSC-2和OSC-5細(xì)胞經(jīng)過γ射線處理后Tfam mRNA的水平也都升高,但是OSC-5細(xì)胞Tfam mRNA水平存在時(shí)相性:即在γ射線處理6小時(shí)后Tfam mRNA水平較高。此外,經(jīng)過γ射線處理的OSC-5細(xì)胞中Nrf1向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移較OSC-2細(xì)胞更為顯著,OGG1和POLG的表達(dá)及pAKT/PI-3K的活性也較強(qiáng)。在經(jīng)PI-3K抑制劑(LY 294002)和Akt的抑制劑(Akt InhibitorⅥ)處理的細(xì)胞中,Tfam mRNA、OGG1和POLG蛋白表達(dá)水平都被下調(diào)。在OSC-5細(xì)胞株上單獨(dú)使用γ射線并不會(huì)誘導(dǎo)mtDNA的缺失,但是經(jīng)過γ射線和PI-3K或Akt抑制劑預(yù)處理后mtDNA有缺失。另外,LY 294002或InhibitorⅥ處理后能使細(xì)胞Tfam mRNA的含量、OGG1和POLG蛋白表達(dá)減少而8-OHdG合成增加,細(xì)胞的凋亡也增加。Tfam、OGG1和POLG各自的siRNA都下調(diào)了相應(yīng)的蛋白表達(dá)水平(P0.05)。siRNAs轉(zhuǎn)染的細(xì)胞經(jīng)30Gyγ射線處理后凋亡數(shù)量有所增加。 結(jié)論:γ射線能上調(diào)射線非敏感的OSC-5細(xì)胞中Tfam、POLG和OGG1的表達(dá)。Tfam、POLG和OGG1表達(dá)水平的上調(diào)與PI-3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活有關(guān)。此外,通過抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞mtDNA損傷修復(fù)系統(tǒng)能增加對(duì)γ射線不敏感的OSC細(xì)胞的凋亡。
【學(xué)位授予單位】：佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R739.8
【圖文】：

-30-圖1：人線粒體DNA基因結(jié)構(gòu)。來自Doug Wallace博士維護(hù)的MITOMAP網(wǎng)站(http:www.gen.emory.edu/mitomap.html)。Fig. 1: Human mitochondrial genome. This figure is adapted from MITOMAP, a web simaintained by Dr. Doug Wallace (http://www.gen.emory.edu/mitomap.html).

圖2：口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株對(duì)γ射線的敏感性。OSC細(xì)胞經(jīng)過30Gy γ射線處理后，細(xì)胞的存活率情況(*: P<0.05，+: P<0.05， Mann-Whitney’s U-test)。Fig. 2: Susceptibility of oral squamous cell carcinoma cell lines to γ irradiation. After OSCcells were irradiated at a dose of 30 Gy, the cell proliferation (left) and apoptosis induction(right) were determined by MTT assay and FACscan using propidium iodide andFITC-conjugated annexin V staining at 48 h and 24 h, respectively. *: p<0.05 compared tocontrol cells and +: p<0.05 compared to γ-ray-treated OSC-2 cells, by Mann-Whitney’sU-test.

-32-圖3：30Gy γ射線處理后OSC-2細(xì)胞和OSC-5細(xì)胞的細(xì)胞核(上圖)與線粒體(下圖)8-OHdG /106dG的含量(*：P<0.05，Mann-Whitney’s U-test)。Fig. 3: The levels of 8-OHdG in nuclear DNA (upper) and mtDNA (lower) were analyzedin OSC-2 and OSC-5 cells at the indicated times after 30 Gy irradiation. *: p<0.05compared to each control, by Mann-Whitney’s U-test.

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本文編號(hào)：2751487