【摘要】：口腔癌是頭頸部常見的惡性腫瘤,其中90%以上是來自黏膜上皮的鱗狀細(xì)胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC),在世界常見癌癥中排名第六,5年生存率僅60%,預(yù)后較差,對(duì)患者說話、進(jìn)食、美觀及心理健康造成嚴(yán)重影響。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)口腔微生物菌群改變與口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展有著錯(cuò)綜復(fù)雜的關(guān)系,例如鱗癌組織表面鏈球菌屬、卟啉單胞菌屬、韋榮菌屬、梭桿菌屬、放線菌數(shù)、嗜血菌屬、腸桿菌屬、梭菌屬的菌量明顯增加。咽峽炎鏈球菌(Streptococcus anginosus,S.anginosus)是口腔、胃腸道和泌尿生殖道的共生菌,我們前期研究發(fā)現(xiàn)咽峽炎鏈球菌在口腔唾液和菌斑的檢出率,有報(bào)道舌、口底、頰部、牙齦多個(gè)部位發(fā)生的口腔癌組織樣本中,咽峽炎鏈球菌DNA總的檢出率高達(dá)88%,在食管癌、胃癌檢出率也增高。咽峽炎鏈球菌是否與口腔癌有相關(guān)性需要進(jìn)一步探索。自噬是一種真核細(xì)胞為維持細(xì)胞自身穩(wěn)態(tài)進(jìn)行的一種生理性代謝代償過程,在癌癥、衰老和抗感染性疾病等多方面都起著重要作用,具有十分復(fù)雜的生理功能。自噬與腫瘤細(xì)胞關(guān)系密不可分,在其形成、增殖、轉(zhuǎn)移以及能量代謝等諸多方面發(fā)揮及其重要的作?。在生物學(xué)上,根據(jù)腫瘤細(xì)胞基因組成和所處微環(huán)境的變化,自噬這把雙刃劍既能發(fā)揮腫瘤抑制作用,又可幫助腫瘤細(xì)胞逃過機(jī)體的自然代謝。本課題就咽峽炎鏈球菌對(duì)口腔癌細(xì)胞的影響進(jìn)行了初步研究,并進(jìn)一步探討該過程是否存在自噬調(diào)控,初步分析此過程自噬與凋亡的關(guān)系,以期為口腔癌的病因?qū)W和防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),為口腔微生態(tài)與疾病關(guān)系研究提供補(bǔ)充。目的:探析咽峽炎鏈球菌是否通過自噬影響人舌鱗癌細(xì)胞SCC-15的細(xì)胞生物學(xué)行為。方法:測(cè)定咽峽炎鏈球菌生長曲線及濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線,確定咽峽炎鏈球菌上清與SCC-15共培養(yǎng)的濃度和時(shí)間,設(shè)立SCC-15/咽峽炎鏈球菌組為實(shí)驗(yàn)組(SCC-15/S),SCC-15/THB培養(yǎng)基組(SCC-15/T)、SCC-15/S+3-MA為條件對(duì)照組,SCC-15/3-MA為陰性對(duì)照組,SCC-15無處理組為空白對(duì)照組;MDC染色、qRT-PCR、Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)自噬活性,CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞增殖活性,流式檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡,劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞遷移能力,Transwell檢測(cè)各組細(xì)胞侵襲能力。結(jié)果:根據(jù)咽峽炎鏈球菌生長曲線和濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果,取咽峽炎鏈球菌生長16h上清進(jìn)行實(shí)驗(yàn),上清與細(xì)胞培養(yǎng)基比例1:1,篩選確定共培養(yǎng)時(shí)間為16h。(1)MDC染色,PCR,WB的結(jié)果均提示SCC-15/S組自噬活性增高,說明咽峽炎鏈球菌增強(qiáng)了SCC-15細(xì)胞的自噬活性;(2)咽峽炎鏈球菌上清明顯抑制了SCC-15細(xì)胞的遷移能力(P0.05);(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè),SCC-15/S組細(xì)胞周期阻滯在G1期,與對(duì)照組相比,S期細(xì)胞和G2/M期細(xì)胞比例減少(P0.05);細(xì)胞凋亡檢測(cè)表明,SCC-15/S組細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組(P0.01);(4)傷口愈合試驗(yàn)結(jié)果顯示,S.anginosus顯著抑制SCC-15/S組的遷移能力,差異具有顯著性(P0.05);(5)與對(duì)照組相比,SCC-15/S組細(xì)胞侵襲力明顯減弱,結(jié)果具有顯著差異(P0.05)。結(jié)論咽峽炎鏈球菌可以通過自噬降低SCC-15細(xì)胞增殖活力、遷移和侵襲能力,抑制細(xì)胞生長,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.8
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果.1 咽峽炎鏈球菌生長曲線咽峽炎鏈球菌生長曲線符合微生物生長的一般規(guī)律，需經(jīng)過 4 個(gè)時(shí)期，分別 0h-4h 遲緩期，4h-16h 對(duì)數(shù)期，16h-24h 穩(wěn)定期，24h 以后為衰亡期。

咽峽炎鏈球菌濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

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本文編號(hào)：2738474