發(fā)布時(shí)間：2020-07-01 06:38

【摘要】：牙本質(zhì)礦化的分子機(jī)制尚不清楚。目前己知的是牙本質(zhì)磷蛋白(dentinphosphoprotein，DPP)和牙本質(zhì)涎蛋白(dentin sialoprotein，DSP)是唯一由成牙本質(zhì)細(xì)胞合成和分泌的兩種牙本質(zhì)特異性非膠原蛋白，分泌至礦化前沿，起著啟動(dòng)牙本質(zhì)礦化以及調(diào)節(jié)羥基磷灰石晶體的大小和生長(zhǎng)速度的作用。大鼠DPP和DSP cDNA已分別被克隆和特征。近來關(guān)于牙本質(zhì)特異性蛋白的一個(gè)重要進(jìn)展是發(fā)現(xiàn)DPP和DSP是由單一基因，命名為牙本質(zhì)涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein，DSPP)基因編碼的同一轉(zhuǎn)錄模本的表達(dá)產(chǎn)物。但是否存在一個(gè)完整的牙本質(zhì)涎磷蛋白，尚需要在蛋白水平加以證實(shí)。本研究針對(duì)上述問題，采用分子生物學(xué)技術(shù)，對(duì)牙本質(zhì)涎磷蛋白cDNA進(jìn)行了克隆，原核表達(dá)和純化，并制備了抗牙本質(zhì)涎磷蛋白的抗體，進(jìn)行了蛋白印跡(Western blot)和免疫組化的研究，從蛋白水平和分子水平探討了牙本質(zhì)涎磷蛋白的組織表達(dá)特異性，為獲得有活性的牙本質(zhì)涎磷蛋白及其功能研究奠定了基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)分為三部分：1．小鼠牙本質(zhì)磷蛋白和牙本質(zhì)涎磷蛋白cDNA的克隆和部分序列分析；2．小鼠牙本質(zhì)涎磷蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)和純化；3．小鼠牙本質(zhì)涎磷蛋白抗血清的制備及其組織表達(dá)特異性研究。 一．小鼠牙本質(zhì)磷蛋白和牙本質(zhì)涎磷蛋白cDNA的克隆和部分序列分析 采用異硫氰酸胍一步法從小鼠牙胚組織中抽提總RNA，用Oligo(dt)作引物逆轉(zhuǎn)錄合成牙胚cDNA，然后利用PCR方法，從cDNA中擴(kuò)增出小鼠DPP、DSPPcDNA基因片段(約1.6 kb和3.0kb)，將所得基因片段插入pBluescript Ks(pBS)質(zhì)粒載體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌XL1-Blue，挑選陽性克隆，提取重組質(zhì)粒DNA，通過酶切分析和核苷酸序列分析鑒定陽性克隆。所用引物為根據(jù)國外文獻(xiàn)報(bào)道的大鼠DPP cDNA和小鼠DSPP cDNA序列進(jìn)行設(shè)計(jì)的，具有良好的準(zhǔn)確性和重復(fù)
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1999
【分類號(hào)】：R78
【圖文】：

第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文文角義回顧是特殊的礦化組織，由礦化的硬組織包括組成。牙本質(zhì)構(gòu)成牙齒的主體，由細(xì)胞和的形成，主要基于如下假說(圖)l:成牙，即前期牙本質(zhì)，被轉(zhuǎn)運(yùn)至礦化前沿，然開始形成。在此過程中，成牙本質(zhì)細(xì)胞不胞漿突起，即成牙本質(zhì)細(xì)胞突，與成牙本

圖2不同形式的DPP在7.5%SDS一APGE中的分析等四認(rèn)為MP、LP與FPIZ是同一蛋白不同磷酸化的表現(xiàn)形成和磷酸化程度方面均與HPZ不同，提示可能存在著多PP的分離和純化世紀(jì)60年代中期，人們?cè)诩兓辣举|(zhì)膠原蛋白過程中發(fā)現(xiàn)牛、大鼠以及人牙本質(zhì)中提純DPP的方法。由于DPP合，因此，只有在牙本質(zhì)脫鈣后方能提純。牛牙本質(zhì)中DPP。Kuboki等[3’]發(fā)現(xiàn)鈣離子可使DPP發(fā)生特異性沉淀，地將游離型DPP和結(jié)合型DPP分別從牙本質(zhì)脫鈣液、。具體步驟如下:

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本文編號(hào)：2736413