【摘要】：牙本質(zhì)礦化的分子機(jī)制尚不清楚。目前己知的是牙本質(zhì)磷蛋白(dentinphosphoprotein，DPP)和牙本質(zhì)涎蛋白(dentin sialoprotein，DSP)是唯一由成牙本質(zhì)細(xì)胞合成和分泌的兩種牙本質(zhì)特異性非膠原蛋白，分泌至礦化前沿，起著啟動(dòng)牙本質(zhì)礦化以及調(diào)節(jié)羥基磷灰石晶體的大小和生長速度的作用。大鼠DPP和DSP cDNA已分別被克隆和特征。近來關(guān)于牙本質(zhì)特異性蛋白的一個(gè)重要進(jìn)展是發(fā)現(xiàn)DPP和DSP是由單一基因，命名為牙本質(zhì)涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein，DSPP)基因編碼的同一轉(zhuǎn)錄模本的表達(dá)產(chǎn)物。但是否存在一個(gè)完整的牙本質(zhì)涎磷蛋白，尚需要在蛋白水平加以證實(shí)。本研究針對上述問題，采用分子生物學(xué)技術(shù)，對牙本質(zhì)涎磷蛋白cDNA進(jìn)行了克隆，原核表達(dá)和純化，并制備了抗牙本質(zhì)涎磷蛋白的抗體，進(jìn)行了蛋白印跡(Western blot)和免疫組化的研究，從蛋白水平和分子水平探討了牙本質(zhì)涎磷蛋白的組織表達(dá)特異性，為獲得有活性的牙本質(zhì)涎磷蛋白及其功能研究奠定了基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)分為三部分：1．小鼠牙本質(zhì)磷蛋白和牙本質(zhì)涎磷蛋白cDNA的克隆和部分序列分析；2．小鼠牙本質(zhì)涎磷蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)和純化；3．小鼠牙本質(zhì)涎磷蛋白抗血清的制備及其組織表達(dá)特異性研究。 一．小鼠牙本質(zhì)磷蛋白和牙本質(zhì)涎磷蛋白cDNA的克隆和部分序列分析 采用異硫氰酸胍一步法從小鼠牙胚組織中抽提總RNA，用Oligo(dt)作引物逆轉(zhuǎn)錄合成牙胚cDNA，然后利用PCR方法，從cDNA中擴(kuò)增出小鼠DPP、DSPPcDNA基因片段(約1.6 kb和3.0kb)，將所得基因片段插入pBluescript Ks(pBS)質(zhì)粒載體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌XL1-Blue，挑選陽性克隆，提取重組質(zhì)粒DNA，通過酶切分析和核苷酸序列分析鑒定陽性克隆。所用引物為根據(jù)國外文獻(xiàn)報(bào)道的大鼠DPP cDNA和小鼠DSPP cDNA序列進(jìn)行設(shè)計(jì)的，具有良好的準(zhǔn)確性和重復(fù)
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1999
【分類號】：R78
【圖文】：

第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文文角義回顧是特殊的礦化組織，由礦化的硬組織包括組成。牙本質(zhì)構(gòu)成牙齒的主體，由細(xì)胞和的形成，主要基于如下假說(圖)l:成牙，即前期牙本質(zhì)，被轉(zhuǎn)運(yùn)至礦化前沿，然開始形成。在此過程中，成牙本質(zhì)細(xì)胞不胞漿突起，即成牙本質(zhì)細(xì)胞突，與成牙本

圖2不同形式的DPP在7.5%SDS一APGE中的分析等四認(rèn)為MP、LP與FPIZ是同一蛋白不同磷酸化的表現(xiàn)形成和磷酸化程度方面均與HPZ不同，提示可能存在著多PP的分離和純化世紀(jì)60年代中期，人們在純化牙本質(zhì)膠原蛋白過程中發(fā)現(xiàn)牛、大鼠以及人牙本質(zhì)中提純DPP的方法。由于DPP合，因此，只有在牙本質(zhì)脫鈣后方能提純。牛牙本質(zhì)中DPP。Kuboki等[3’]發(fā)現(xiàn)鈣離子可使DPP發(fā)生特異性沉淀，地將游離型DPP和結(jié)合型DPP分別從牙本質(zhì)脫鈣液、。具體步驟如下:

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 戈迎迎,翁雨來;成牙本質(zhì)細(xì)胞的基本特征及其研究進(jìn)展[J];上海口腔醫(yī)學(xué);2004年03期

2 董偉,周學(xué)東,張靜儀;人胚牙本質(zhì)磷蛋白的提取[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年01期

3 奚珊珊,李盛林;人牙髓細(xì)胞骨基質(zhì)蛋白表達(dá)的研究進(jìn)展[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2003年04期

4 孫漢堂;肖明振;吳補(bǔ)領(lǐng);朱慶林;費(fèi)儉;;牙本質(zhì)涎蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

5 孫漢堂;肖明振;吳補(bǔ)領(lǐng);朱慶林;費(fèi)儉;;牙本質(zhì)涎蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠的建立和轉(zhuǎn)基因表達(dá)的初步分析[J];上�？谇会t(yī)學(xué);2006年02期

6 張菁;梅陵宣;;牙本質(zhì)涎蛋白在牙齒發(fā)育、牙本質(zhì)疾病中的表達(dá)和作用[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2009年05期

7 江衛(wèi)民,史俊南,郝建軍,費(fèi)儉,趙大為;小鼠牙本質(zhì)磷蛋白cDNA的克隆和部分序列分析[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;1999年03期

8 萬領(lǐng),李玉晶,張福萍,董小平;人牙本質(zhì)磷蛋白功能片段的原核表達(dá)[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2005年03期

9 張菁;冀章章;梅陵宣;;短期高濃度氟對小鼠磨牙胚中牙本質(zhì)涎蛋白表達(dá)的影響[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2009年06期

10 王英;張瑩;史俊南;;牙本質(zhì)磷蛋白基因突變和序列多態(tài)性分析[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2006年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 江衛(wèi)民;小鼠牙本質(zhì)涎磷蛋白cDNA克隆、表達(dá)、純化、抗體制備及其組織表達(dá)特異性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1999年

2 劉軍;神經(jīng)生長因子和神經(jīng)肽對牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞和牙胚生長、分化影響的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1998年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 宋瑋;人成牙本質(zhì)細(xì)胞的分離和鑒定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

2 王渝;SIBLING蛋白在牙及牙周組織中的分布及意義研究[D];吉林大學(xué);2011年

3 焉妍;人正畸牙齦溝液中MMP-13和DPP表達(dá)變化及與牙根吸收關(guān)系的研究[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2011年

本文編號：2736413