【摘要】：目的：利用小干擾RNA(small interfering RNA, siRNA)抑制人舌癌耐藥細(xì)胞多藥耐藥相關(guān)蛋白1(multidrug resistance associated protein 1, MRP1)的表達(dá),觀察其對所培養(yǎng)細(xì)胞耐藥性的干擾情況。 方法：設(shè)計針對MRP1基因的siRNA,轉(zhuǎn)染人舌癌多藥耐藥細(xì)Tca8113/CDDP,鏡下觀察動態(tài)轉(zhuǎn)染情況并確定轉(zhuǎn)染效率。用RT-PCR分析MRP1 mRNA的表達(dá)；免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測MRP1的蛋白表達(dá)；MTT法檢測MRP1 siRNA對耐藥細(xì)胞的干擾作用。 結(jié)果：Tca8113/CDDP細(xì)胞轉(zhuǎn)染MRP1 siRNA后,MRP1 mRNA表達(dá)較對照組明顯降低,降低率為61.3%；轉(zhuǎn)染36h后MRP1 siRNA組的MRP1蛋白表達(dá)陽性率較對照組明顯減低；MRP1 siRNA組中順鉑對Tca8113/CDDP細(xì)胞生長的抑制作用明顯強(qiáng)于其他對照組,且抑制作用隨時間的延長而增強(qiáng)。 結(jié)論：MRP1 siRNA可以明顯抑制口腔癌耐藥細(xì)胞的多藥耐藥。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R739.8
【圖文】：

圖1重組體酶切電泳圖EleetroPhoresisdisPlayofthereeombinantenzyme一digestio1:MRPISael，2:MRPISael，3:MRPISaelarker:20O0bP、1000bP、75ObP、SO0bP、25ObP、10ObP)

圖2pGenesll一1.1一MRPlsiRNA重組質(zhì)粒測序峰圖Figure2SequencinggraPhofPGenesil一1.1一MRPIsiRNA2MRPIsiRNA轉(zhuǎn)染情況及轉(zhuǎn)染效率MRP1siRNA轉(zhuǎn)染Tcas113/cDDP細(xì)胞后，在熒光倒置顯微鏡下察，可見轉(zhuǎn)染后12、24、36、48h的綠色熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，轉(zhuǎn)染率逐漸提高，轉(zhuǎn)染后36h的轉(zhuǎn)染率達(dá)最高，為68.4%。轉(zhuǎn)染后48和36的轉(zhuǎn)染效率無統(tǒng)計學(xué)意義(P>O.05)。結(jié)果表明:MRPIsiRNA轉(zhuǎn)染Tcas113/CDDp細(xì)胞36h后，可達(dá)最高轉(zhuǎn)染效率(圖1)。故后續(xù)實選擇轉(zhuǎn)染后36h的細(xì)胞以測定其基因和蛋白表達(dá)。

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本文編號：2735699