【摘要】：目的： 本研究探討炎癥微環(huán)境下,牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞的乙�；揎�,并觀察曲古抑菌素A (Trichostatin A, TSA)體外條件下促進(jìn)炎癥牙齦干細(xì)胞的成骨分化能力,為研究牙周炎治療提供可能的新型治療藥物。 方法： 1.牙齦干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及生物學(xué)鑒定 選取牙周健康及慢性牙周炎患者的牙齦,采用酶消化法進(jìn)行原代培養(yǎng)。取生長(zhǎng)狀況良好的第三代牙齦干細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)并分析其表面抗原CD146、 CD90、SSEA-4、OTC-4的表達(dá),測(cè)定克隆形成率,進(jìn)行成骨和成脂誘導(dǎo),分別進(jìn)行堿性磷酸酶染色、茜素紅染色和油紅O染色,檢測(cè)成骨分化和成脂分化情況。 2. RT-PCR法檢測(cè)組蛋白去乙�；窰DAC1、3、6在健康及炎癥牙齦干細(xì)胞中的表達(dá),計(jì)算相對(duì)灰度值并進(jìn)行半定量分析。 3.組蛋白去乙�；敢种苿㏕SA對(duì)健康和炎癥牙齦干細(xì)胞成骨分化的影響取第3-5代炎癥及健康牙齦干細(xì)胞,傳代接種至6孔板,待80%融合后加入成骨誘導(dǎo)液中誘導(dǎo)培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)組加入含TSA的DMSO使終濃度為100nM,對(duì)照組加入等量DMSO。成骨誘導(dǎo)7天進(jìn)行堿性磷酸酶染色、堿性磷酸酶活性分析,誘導(dǎo)21天RT-PCR檢測(cè)Runx2、OCN、HDAC1、HDAC3、HDAC6mRNA的表達(dá),誘導(dǎo)28天進(jìn)行茜素紅染色、Ca2+濃度定量分析。 結(jié)果： 1.通過(guò)酶消化法獲得的人健康及炎癥牙齦干細(xì)胞,鏡下呈巢式生長(zhǎng),細(xì)胞排列緊密,周邊細(xì)胞呈短梭形,體積較小。流式細(xì)胞儀檢測(cè)并分析其表面抗原CD146陽(yáng)性細(xì)胞率49.33%,CD90陽(yáng)性細(xì)胞率90.77%,SSEA-4陽(yáng)性細(xì)胞率54.98%,OTC-4陽(yáng)性細(xì)胞率33.69%�？寺⌒纬陕适�27%。牙齦干細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)液的作用下,細(xì)胞復(fù)層生長(zhǎng),堿性磷酸酶染色可見(jiàn)細(xì)胞胞漿藍(lán)染,誘導(dǎo)21天后可觀察到鈣結(jié)節(jié)形成,經(jīng)茜素紅染色呈橘紅色或紅色。在成脂誘導(dǎo)28天可見(jiàn)個(gè)別細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)高強(qiáng)度的折射點(diǎn),油紅O染色呈橙紅色。 2. RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳可見(jiàn),與健康牙齦組織來(lái)源的牙齦干細(xì)胞相比,HDAC1、3、6在炎癥牙齦組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)升高。 3.與對(duì)照組比較,加入100nM TSA誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)組,ALP染色,細(xì)胞藍(lán)染較強(qiáng),堿性磷酸酶活性較高；茜素紅染色并進(jìn)行定量分析,鈣結(jié)節(jié)較多；RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳可觀察到OCN、Runx2mRNA表達(dá)升高,HDAC1、3、6表達(dá)降低。 結(jié)論： 1.牙齦組織中存在可體外分離培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞,表達(dá)干細(xì)胞的標(biāo)志物CD90、CD146、OCT-4、SSEA-4,具有較高的克隆形成和多向分化能力； 2.人炎癥牙齦干細(xì)胞中組蛋白去乙�；�1、3、6高表達(dá),提示其可能參與牙周炎癥反應(yīng)的基因調(diào)控； 3.組蛋白去乙�；敢种苿㏕SA能夠增強(qiáng)牙齦干細(xì)胞的成骨分化能力,提示TSA可能作為局部藥物治療手段控制牙周炎癥反應(yīng),促進(jìn)牙周組織再生。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R781.42

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉蘭寧;張世華;王湞;;釉基質(zhì)蛋白對(duì)牙周膜成纖維細(xì)胞增殖活性的影響[J];第一軍醫(yī)大學(xué)分校學(xué)報(bào);2005年02期

本文編號(hào)：2725386