【摘要】：最新的發(fā)育生物學(xué)研究證實,在顱神經(jīng)嵴細(xì)胞分化形成牙頜骨器官的過程中,先后經(jīng)歷了顱神經(jīng)嵴→第一鰓弓外胚間充質(zhì)→牙頜骨外胚間充質(zhì)兩次關(guān)鍵性級聯(lián)分化。本研究旨在建立Balb/c胎小鼠第一鰓弓外胚間充質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)模型,在此基礎(chǔ)上,進(jìn)行多向誘導(dǎo)分化研究,鑒定其干細(xì)胞生物學(xué)特性。同時,構(gòu)建第一鰓弓外胚間充質(zhì)細(xì)胞牙向分化雙向抑制消減文庫,初步篩選、驗證、分析差異表達(dá)基因,為全面揭示牙發(fā)生、發(fā)育的分子調(diào)控機(jī)制提供理論依據(jù)。 首先,精確解剖分離孕9.5天(E9.5)Balb/c胎鼠第一鰓弓,采用組織塊法和改良酶消化法對其進(jìn)行原代培養(yǎng),利用反復(fù)貼壁和多次差異消化法對其進(jìn)行純化,通過細(xì)胞形態(tài)觀察、細(xì)胞生長曲線描記、計算細(xì)胞倍增時間和特異性標(biāo)記物檢測對其細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行研究。其次,利用端粒酶原位雜交熒光探針和Brdu攝取實驗,檢測第一鰓弓外胚間充質(zhì)細(xì)胞的增殖和自我更新能力;取第3代細(xì)胞,更換不同的條件培養(yǎng)液,觀察其在成脂、成內(nèi)皮和礦化誘導(dǎo)液的刺激下,細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,并檢測鑒定相應(yīng)的特異性細(xì)胞表型標(biāo)記,對細(xì)胞的可塑性進(jìn)行研究。然后,在相同的培養(yǎng)條件下,收取第3代第一鰓弓外胚間充質(zhì)細(xì)胞和E16.5下頜第一磨牙牙乳頭細(xì)胞,采用抑制消減雜交技術(shù),構(gòu)建雙向抑制消減文庫,并對細(xì)胞的總RNA質(zhì)量、雙鏈cDNA酶切效果、接頭連接率、抑制消減效率、差異基因的富集程度和載體連接效率進(jìn)行全面質(zhì)控分析。最后,在雙向抑制消減文庫中隨機(jī)挑
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R78
【圖文】：

道栓合籠后次日晨見雌性Balb/c小?

9.5孕鼠子宮成申珠樣(體視顯徽鏡X1

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本文編號：2723689