【摘要】：隨著生活水平的提高和口腔健康知識(shí)的普及,大眾越來(lái)越重視面部美觀及口腔健康,要求正畸治療以改善面部美觀和口腔功能的患者也越來(lái)越多。但不少患者往往對(duì)長(zhǎng)達(dá)2-3年的矯治周期望而卻步,進(jìn)而選擇放棄正畸治療或者選擇其他治療手段。如何尋找到高效又安全的加速正畸治療過(guò)程中牙齒移動(dòng)的方法是近年來(lái)正畸研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)之一,而要解決這個(gè)難點(diǎn),重點(diǎn)在于明確正畸牙移動(dòng)(orthodontic tooth movement,OTM)過(guò)程中調(diào)控牙周組織改建和重塑的生物學(xué)機(jī)制。自正畸這門學(xué)科誕生以來(lái),國(guó)內(nèi)外的學(xué)者已經(jīng)做了很多有關(guān)OTM過(guò)程中牙周組織改建和重塑機(jī)制的研究,并且發(fā)現(xiàn)在牙移動(dòng)過(guò)程中,有眾多因子參與其中,包括Wnt/β-catenin信號(hào)、P13K/AKt/m TOR信號(hào)、RANK-RANKL-OPG及Caspase-3信號(hào)等共同參與了牙周組織的改建過(guò)程。Wnt/β-catenin信號(hào)主要參與成骨細(xì)胞對(duì)正畸機(jī)械應(yīng)力的反應(yīng)過(guò)程,Wnt配體如Wnt3a和Wnt10b可通過(guò)誘導(dǎo)堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和成骨細(xì)胞生成來(lái)調(diào)節(jié)骨量和礦化;P13K/AKt/m TOR信號(hào)則參與OTM期間成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞等牙周膜細(xì)胞蛋白的合成與轉(zhuǎn)錄過(guò)程,為牙周組織改建做準(zhǔn)備;RANK-RANKL-OPG三者相互作用在OTM期間抑制破骨細(xì)胞生成和骨吸收,Caspase-3信號(hào)則參與OTM期間的細(xì)胞凋亡過(guò)程。近年來(lái)越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)通路在細(xì)胞與細(xì)胞間信號(hào)傳遞的過(guò)程中起著關(guān)鍵作用,尤其是在骨代謝過(guò)程中,Notch信號(hào)具有調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞譜系細(xì)胞分化和功能的潛能,并在骨骼發(fā)育、軟骨形成等過(guò)程中起關(guān)鍵作用。成骨細(xì)胞和骨細(xì)胞中Notch1信號(hào)的激活誘導(dǎo)骨保護(hù)素(osteoprotegerin,OPG)生成增加并抑制骨吸收。Notch1通過(guò)直接和間接機(jī)制抑制破骨細(xì)胞生成,同時(shí)誘導(dǎo)OPG的生成增加。骨髓細(xì)胞培養(yǎng)物中Notch受體的Rbpjκ失活導(dǎo)致破骨細(xì)胞生成增強(qiáng),表明Rbpjκ是破骨細(xì)胞生成的抑制劑,Notch1在破骨細(xì)胞分化中的作用是由經(jīng)典機(jī)制介導(dǎo)的。而OTM正是正畸機(jī)械負(fù)荷介導(dǎo)下的牙周組織改建過(guò)程,骨改建是其中的重點(diǎn),包括骨吸收改建和骨形成改建兩個(gè)部分。有關(guān)Notch信號(hào)傳導(dǎo)在參與骨免疫調(diào)節(jié)的骨丟失的細(xì)胞發(fā)育中的作用已有許多研究。然而,關(guān)于Notch1信號(hào)傳導(dǎo)是否參與OTM期間正畸力誘導(dǎo)的牙槽骨吸收改建過(guò)程以及其作用機(jī)理尚不明確。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠OTM模型及使用HE、TRAP及免疫組化染色技術(shù),初步探討Notch1信號(hào)通路是否參與OTM期間的牙槽骨組織吸收改建過(guò)程,以及使用Notch1信號(hào)通路抑制劑DAPT后對(duì)OTM期間的牙槽骨吸收改建過(guò)程進(jìn)行初步研究。目的:通過(guò)檢測(cè)Notch1信號(hào)通路相關(guān)分子(Notch1和Jagged1)在大鼠OTM期間的表達(dá)情況,以及使用Notch1信號(hào)通路抑制劑DAPT后對(duì)OTM過(guò)程中的牙槽骨組織吸收改建過(guò)程進(jìn)行初步研究,探討Notch1信號(hào)通路參與OTM過(guò)程的作用機(jī)理。方法:本實(shí)驗(yàn)納入60只健康、成年、雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠,隨機(jī)分成A、B兩組:每組30只,每組又隨機(jī)分成6個(gè)小組:0天組,1天組,4天組,7天組,10天組和14天組,每組5只。A組大鼠上頜左側(cè)加力建立OTM模型,作為加力組;右側(cè)不加力,作為不加力組;B組大鼠上頜左側(cè)加力建立OTM模型,右側(cè)不加力,且同時(shí)雙側(cè)第一磨牙粘膜轉(zhuǎn)折處均注射0.6ml/kg DAPT溶液,自加力開(kāi)始(0天),每?jī)商熳⑸湟淮?即左側(cè)為加力+DAPT組,右側(cè)為不加力+DAPT組。在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠后,取下雙側(cè)包括上頜第一、第二磨牙及周圍牙槽骨在內(nèi)的組織塊,測(cè)量第一、第二磨牙間的距離來(lái)評(píng)估OTM距離,采用HE染色觀察OTM過(guò)程中牙周組織形態(tài)學(xué)變化、TRAP染色觀察破骨細(xì)胞變化以及通過(guò)免疫組化染色觀察牙移動(dòng)過(guò)程中表達(dá)Notch1、Jagged1、OPG、RANK和RANKL的情況,并通過(guò)Image-Plus Pro 6.0軟件測(cè)量免疫組化染色切片的平均光密度(mean optical density,MOD)值。所有數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行分析。結(jié)果:1.OTM距離:在加力組和加力+DAPT組這兩組中,從加力第1天起,OTM距離隨加力時(shí)間增加而不斷增大。除0天外,加力組與不加力組及加力+DAPT組與不加力+DAPT組比較,其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在第10天和第14天,加力組OTM距離明顯小于加力+DAPT組(P0.05)。2 HE染色:在不加力組、不加力+DAPT組這兩組中,大鼠磨牙牙根和牙槽骨表面較光滑,牙周膜韌帶(periodontal ligament,PDL)寬度基本沒(méi)有變化。從第4天開(kāi)始,在加力組、加力+DAPT組這兩組中觀察到壓力側(cè)PDL寬度相對(duì)于張力側(cè)PDL寬度變窄,隨加力時(shí)間增加,這兩組壓力側(cè)的PDL寬度比不加力組、不加力+DAPT組這兩組壓力側(cè)的PDL寬度窄。在壓力側(cè)觀察到破骨細(xì)胞和骨吸收凹坑,而在張力側(cè)觀察到成骨細(xì)胞和骨形成。3.TRAP染色:在不加力組、不加力+DAPT組這兩組中,牙槽骨表面未觀察到明顯的TRAP陽(yáng)性多核破骨細(xì)胞再吸收空洞。在加力組、加力+DAPT組這兩組中,在第4天觀察到壓力側(cè)牙槽骨表面出現(xiàn)明顯TRAP陽(yáng)性多核破骨細(xì)胞再吸收空腔。在第4、7、10和14天,加力組、加力+DAPT組這兩組的TRAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯多于不加力組、不加力+DAPT組這兩組(P0.05)。在第10和14天,加力+DAPT組的TRAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯多于加力組(P0.05)。4.免疫組化染色:OTM模型建立后,隨時(shí)間增加,加力組壓力側(cè)牙周膜Notch1、Jagged1、RANKL和RANK的陽(yáng)性表達(dá)量逐漸上升,OPG的表達(dá)量則逐漸降低;不加力組壓力側(cè)牙周膜Notch1、Jagged1、RANKL、RANK和OPG的陽(yáng)性表達(dá)量未見(jiàn)明顯變化;加力+DAPT組壓力側(cè)牙周膜Notch1和OPG的表達(dá)量逐漸降低,Jagged1的表達(dá)量在第4和14天略有增加,RANKL和RANK的表達(dá)量逐漸上升;不加力+DAPT組壓力側(cè)牙周膜Notch1的表達(dá)水平逐漸降低,Jagged1、RANKL、RANK和OPG的表達(dá)量則未見(jiàn)明顯變化。除0天外的其他時(shí)間點(diǎn),加力組在壓力側(cè)牙周膜的Notch1、Jagged1、RANKL和RANK表達(dá)顯著高于不加力組(P0.05),除0和1天,加力組OPG的表達(dá)顯著低于不加力組(P0.05)。除0天外Notch1在加力+DAPT組的表達(dá)均顯著低于加力組(P0.05),加力+DAPT組在第1、7、10和14天Jagged1的表達(dá)量均顯著低于加力組(P0.05),加力+DAPT組RANKL的表達(dá)量在第4、7和10天均明顯高于加力組(P0.05),加力+DAPT組OPG的表達(dá)水平在第4、7和10天均明顯低于加力組(P0.05),除0和14天外,加力+DAPT組、加力組這兩組的RANK表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。除0和1天外加力+DAPT組Notch1和RANK的表達(dá)水平均顯著高于不加力+DAPT組,OPG的表達(dá)量明顯低于不加力+DAPT組;除0天外加力+DAPT組RANKL的表達(dá)量均明顯高于不加力+DAPT組(P0.05)。結(jié)論:Notch1信號(hào)通路相關(guān)蛋白Notch1、Jagged1以及OPG、RANK、RANKL的表達(dá)與在大鼠施加正畸力后的牙周骨組織吸收改建有關(guān),這些觀察結(jié)果表明Notch1信號(hào)通路可能在OTM期間的牙槽骨吸收改建過(guò)程中發(fā)揮作用。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R783.5
【圖文】：

TRAP 染色結(jié)果以破骨細(xì)胞胞漿呈酒紅色為陽(yáng)性信號(hào)，免疫組化染色結(jié)果以棕黃色顆粒為陽(yáng)性信號(hào)。通過(guò) Image-Plus Pro 6.0 軟件測(cè)量其平均光密度（MOD）值，各組數(shù)據(jù)采用 SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn)。P＜0.05 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1 OTM 距離在加力組和加力+DAPT 組這兩組中，從加力第 1 天起，OTM 距離隨時(shí)間增加而不斷增大。加力組與不加力組及加力+DAPT 組與不加力+DAPT 組比較，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在第 10 天和第 14 天，加力組 OTM 距離明顯小于加力+DAPT 組(P＜0.05)。各組 OTM 距離見(jiàn)圖 1。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2.2 HE 染色各組 HE 染色結(jié)果見(jiàn)圖 2。在不加力組、不加力+DAPT 組這兩組中，大鼠磨牙 PDL 標(biāo)本由相對(duì)致密的纖維和從根表面向牙槽骨延伸的成纖維細(xì)胞組成，牙根表面光滑，PDL 寬度沒(méi)有變化。在加力組、加力+DAPT 組這兩組中，觀察到帶有壓縮毛細(xì)血管的 PDL 纖維排列紊亂且粗糙，并且在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間觀察到拉伸的纖維。從第 4 天觀察到加力組、加力+DAPT 組這兩組中，壓力側(cè) PDL 寬度相對(duì)于張力側(cè) PDL 寬度變窄，隨加力時(shí)間增加，比不加力組、不加力+DAPT 組這兩組的PDL 寬度變窄，且張力側(cè) PDL 寬度則增大。此外，在壓力側(cè)觀察到破骨細(xì)胞和骨吸收凹坑，而在張力側(cè)觀察到成骨細(xì)胞和骨形成（圖 3）。

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本文編號(hào)：2719023