【摘要】：目的: 齲病是在以細(xì)菌為主的多種因素作用下發(fā)生的牙體硬組織疾病，變形鏈球菌在齲病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用,主要表現(xiàn)在它的產(chǎn)酸性和耐酸性.隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)的發(fā)展，及對變形鏈球菌耐酸性的深入研究，現(xiàn)已鑒定并檢測出多條耐酸相關(guān)基因,其中包括comD和gbpB基因。氟化物的防齲功效已被世人所公認(rèn)，，并在全世界推廣使用�？茖W(xué)實驗證明適量的使用氟化物能夠有效的防止齲病的發(fā)生，然而長期大量的應(yīng)用氟化物可能導(dǎo)致耐氟菌株的生長，它比親代野生型菌株有更強(qiáng)的致齲能力。com感受態(tài)基因家族是一個重要的雙組分信號傳導(dǎo)系統(tǒng)(TCSTS),其中comD基因的編碼產(chǎn)物為一種跨膜感受器,它能感受特異性刺激，將外界信號傳遞到胞內(nèi),產(chǎn)生一系列的生物學(xué)性狀改變。gbpB在變形鏈球菌的附著方面有著重要的作用，它們在細(xì)菌間及細(xì)菌與菌斑基質(zhì)間起著“橋梁”作用。然而變形鏈球菌耐氟菌株中耐酸相關(guān)基因comD及gbpB突變與耐氟菌株耐酸性增強(qiáng)的關(guān)系方面的研究未見報道。本實驗通過誘導(dǎo)變形鏈球菌耐氟菌株，檢測其耐酸相關(guān)基因comD及gbpB的突變位點，從基因水平上揭示變形鏈球菌耐氟菌株致齲機(jī)制，明晰耐氟菌株耐酸基因突變與致齲強(qiáng)度的關(guān)系，為今后合理的利用氟化物及研制新的防齲疫苗打下基礎(chǔ)。 方法: 1變形鏈球菌耐氟菌株的體外誘導(dǎo) 2變形鏈球菌耐氟菌株全基因組的提取 3構(gòu)建重組質(zhì)粒:以變形鏈球菌耐氟菌株基因組為模板，對耐酸相關(guān)基因comD和gbpB進(jìn)行PCR。將PCR產(chǎn)物與PMD18-T載體連接并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞(E. coli JM109)中構(gòu)建重組質(zhì)粒。 4提取質(zhì)粒，PCR及酶切鑒定測序。 結(jié)果: 成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒。通過使用BLAST工具對所獲得的comD和gbpB基因片段與GenBank中所發(fā)表的comD和gbpB的基因序列進(jìn)行同源性比對。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關(guān)基因gbpB的基因序列與GenBank中所發(fā)表的gbpB的基因序列完全相同。然而，comD的基因序列與GenBank中所發(fā)表的comD基因序列有1處不同：位于1795538（A G）。 結(jié)論: 成功的在大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中構(gòu)建了變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關(guān)基因comD和gbpB的重組質(zhì)粒，并分別進(jìn)行PCR及酶切鑒定及DNA測序，此研究對于今后齲病的防治具有重要的意義。
【圖文】：

圖 1. BHI 固體培養(yǎng)基培養(yǎng) UA159FRD 及 gbpB 的 PCR 產(chǎn)物：allk 發(fā)表的變形鏈球菌 comD 和 gbpB 的基因序列，在保因全長 1325bp,pCR 產(chǎn)物長度 1391bp。：5’ATGAATGAAGCCTTAATGATACTTTCAAATGG3’: 5’ CTATTTTATTATTAGGAGTTGCTTGAATAAATGATGR 擴(kuò)增，所得產(chǎn)物 1%瓊脂糖凝膠電泳，可見大約為 1391b計相符。見圖 3因全長 1295bp，pCR 產(chǎn)物長度 1356bp。:5’ATGAAAAAAAGAATTTTATCAGCA3’

DL2000Maker2.comDPCR產(chǎn)物3.gbpBPCR產(chǎn)物p
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R781.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2710556