【摘要】：目的:通過將搭載TLR4抑制劑的殼聚糖納米微球包被于3D打印的種植體上并植入比格犬體內(nèi),探討TLR4抑制劑在體內(nèi)抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn)種植體骨結(jié)合的作用。方法:1.將TLR4抑制劑(TAK242)配制成不同終濃度的藥液,滴加到接種MC3T3-E1細(xì)胞的96孔板中,用CCK-8法篩選適宜的藥物濃度。采用離子交聯(lián)法制備殼聚糖納米微球(CSn)及搭載TLR4抑制劑的納米微球(CSn-anti-TLR4),透射電鏡(Transimission Electronic Microscopy,TEM)觀察兩種微球形態(tài),激光粒度儀,紅外光譜儀檢測兩種微球的性質(zhì)。用Geomagic studio2012及Rhino6.0建模軟件設(shè)計(jì)鈦片(Tis),3D打印直徑為3cm,孔徑為300μm,孔隙率為60%的Tis,用濃鹽酸、濃硫酸、去離子水(2:1:1)配置的混酸酸蝕Tis。將兩種納米微球以浸提法包被于酸蝕后的Tis表面,分組:實(shí)驗(yàn)組(Tis-CSn-anti-TLR4),殼聚糖組(Tis-CSn)、空白組(Tis),掃描電鏡(Scanning Electron Microscope,SEM)觀察3組Tis表面;將MC3T3-E1細(xì)胞接種到3組Tis上,CCK-8檢測細(xì)胞增殖情況,熒光染色觀察細(xì)胞粘附情況。2.挑選8只1.5歲、健康、雄性比格犬,隨機(jī)標(biāo)記為B1-B8,選取右側(cè)下頜第三、第四前磨牙作為目標(biāo)牙,共16顆牙(32個(gè)牙根),拍錐形束CT(CBCT)為原始圖像,將CBCT圖像導(dǎo)入建模軟件,用相同方法根據(jù)CBCT設(shè)計(jì)種植體(Ti),3D打印的種植體與Tis的規(guī)格相同。將Ti清洗、消毒、滅菌后包被兩種納米微球,分成3組:TLR4抑制劑組(Ti-CSn-anti-TLR4);殼聚糖組(Ti-CSn);對照組(Ti)。常規(guī)消毒、全麻下將3組種植體即刻植入比格犬右側(cè)下頜相應(yīng)前磨牙處,嚴(yán)密縫合。1個(gè)月后用Hounsfield Unit(HU)評價(jià)種植體骨結(jié)合情況,取種植體周圍骨組織提RNA,做RT-PCR分析骨組織中相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)情況。結(jié)果:1.CCK-8結(jié)果顯示:當(dāng)TAK242藥物終濃度為2μM時(shí)最有利于細(xì)胞增殖。TEM和激光粒度儀結(jié)果均顯示包載藥物后CSn-anti-TLR4的平均粒徑(25-155nm,335.6nm)均較CSn(25-29nm,237.4 nm)增大。CSn的zeta電勢平均值為+18.8 mv,CSn-anti-TLR4的zeta電勢平均值為+12.4mv。與CSn相比CSn-anti-TLR4在1000cm~(-1)處有個(gè)明顯的波峰。證明TAK242被殼聚糖包饒。SEM觀察3組鈦片,未酸蝕的Tis表面有尖銳的突刺;酸蝕后的Tis表面圓鈍:Tis-CSn表面包被許多CSn微球,Tis-CSn-anti-TLR4表面有CSn-anti-TLR4微球及TAK242的晶體。熒光顯微鏡下可見細(xì)胞在三組Tis上粘附生長良好,CSn-anti-TLR4細(xì)胞增殖最多。2.手術(shù)后1個(gè)月拍CBCT觀察骨結(jié)合情況。Ti,Ti-CSn,Ti-CSn-anti-TLR4的HU值依次增大;全麻下取骨組織提取RNA檢測骨組織中相關(guān)炎癥因子及TLRs信號通路分子的表達(dá)量。Ti,Ti-CSn,Ti-CSn-anti-TLR4中的MyD88 mRNA、TRIF mRNA、IL-10 mRNA、TNF-αmRNA表達(dá)依次降低,抗炎癥因子TGF-βmRNA表達(dá)依次升高,然而TLR4 mRNA、TLR2 mRNA僅在Ti-CSn-anti-TLR4組中表達(dá)升高,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.TLR4抑制劑通過抑制炎癥反應(yīng)促進(jìn)種植體骨結(jié)合。2.CSn可能通過抑制TLRs下游通路抑制炎癥反應(yīng),但不經(jīng)過TLR2和TLR4通路。3.TLR4抑制劑可能是一種促進(jìn)種植體骨結(jié)合新的治療策略。
【圖文】：

MC3T3-E1 活性，以上數(shù)據(jù)用方差分析與 Bonferroni 的 t 檢驗(yàn)** P<0.001 vs control.nti-TLR4 的性質(zhì)檢測制備的殼聚糖納米微球和載藥殼聚糖納米微球溶液具TEM），CSn 和 CSn-anti-TLR4 的直徑分別約為 25-29n直徑明顯大于 CSn，且 TAK242 被殼聚糖所包饒。(圖粒徑和 zeta 電勢的檢測nti-TLR4 離心凍干后用紅外光譜儀檢測，與 CSn 相比明顯的波峰，其他波峰兩者相似（圖 2 H，I）。在

2: CSn 和 CSn-anti- tlr4 的特性。(A)CSn 透射電鏡 ×50000。(B)CSn 透射電鏡 ×200000。)CSn-anti-TLR4透射電鏡×50000。(D)(E)液體狀態(tài)下CSn和CSn-anti-TLR4的平均直徑，(F)(G) CSn CSn-anti-TLR4 的 zeta 電勢。 (H)(I)CSn 和 CSn-anti-TLR4 的紅外光譜。 3D 打印種植體及鈦片的 SEM未酸蝕的 Tis 有金屬光澤，顏色較亮（圖 3 A），酸蝕后的 Tis 金屬光澤消失，顏偏暗（圖 3 B）。在 SEM 下觀察：未酸蝕的 Tis 表面有較多尖銳的金屬刺（圖 3 C），，蝕后尖銳的突刺變圓鈍，表面變粗糙（圖 3 D）。將包被 CSn 和 CSn-anti-TLR4 的 Tis于 SEM 下觀察，Tis 表面有大量的 CSn 和 CSn-anti-TLR4（圖 3 E，F(xiàn)）。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R783.6

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本文編號：2708979