【摘要】： 目的:富血小板血漿(platelet-rich plasma, PRP)的活性與血小板的濃度和活性密切相關(guān)。本課題通過研究不同離心、儲存方法對血小板計數(shù)及活性的影響,同時分析不同激活劑對PRP凝固及釋放生長因子的影響,探討PRP的最佳制備、儲存方法及激活劑的使用,為動物實驗和臨床應(yīng)用研究提供理論和實驗依據(jù)。 方法:采用四種離心方法(方法一:一次離心力200g,二次離心力200g;方法二:一次離心力200g,二次離心力1200g;方法三:一次離心力1200g,二次離心力200g;方法四:一次離心力1200g,二次離心力1200g)制備PRP,通過血小板計數(shù)和ELISA法分別檢測PRP中血小板濃度和血漿P選擇素濃度。選擇22℃和-80℃儲存制備的PRP,通過血小板計數(shù)和ELISA法檢測不同溫度儲存24h后PRP中血小板濃度和血漿P選擇素濃度。血漿P選擇素濃度用相應(yīng)血小板計數(shù)進行歸一化。分別以殼聚糖、凝血酶受體激動劑肽6(TRAP)和牛凝血酶作為激活劑,測定富血小板凝膠(platelet-rich gel, PRG)的體外凝固時間和血塊凝縮率,并通過ELISA法測定釋放的生長因子TGF-β1和PDGF的濃度。數(shù)據(jù)采用SPSS 11.0軟件,行單因素方差分析。 結(jié)果:不同離心方法制備的PRP中,血小板計數(shù)明顯高于全血,分別是全血血小板計數(shù)的4.21,4.94,4.12,4.72倍。其中方法二的血小板計數(shù)最高,與方法一、三之間的差異有顯著性意義(P0.01)。PRP中歸一化血漿P選擇素濃度,方法二和四之間無顯著性差異(P0.05),但明顯低于方法一和三(P0.01)。采用方法二制備的新鮮PRP以及經(jīng)過22℃及-80℃儲存24h后PRP的血小板計數(shù)無顯著性差異(P0.05)。歸一化后血漿P選擇素濃度22℃儲存和新鮮PRP相比無顯著性差異(P0.05);但-80℃儲存明顯高于新鮮PRP(P0.05)。牛凝血酶組PRG凝固時間明顯低于TRAP組和殼聚糖組(P0.01)。加入激活劑后1h,2h,4h后,牛凝血酶組血塊凝縮率明顯大于TRAP組和殼聚糖組(P0.05)。24h時,三組PRG血塊凝縮率無顯著性差異(P0.05)。牛凝血酶組、殼聚糖組和TRAP組分泌的TGF-β1濃度和總量沒有顯著性差異(P0.05);TRAP組血漿PDGF濃度和總量明顯高于牛凝血酶組和殼聚糖組(P0.05～0.01)。 結(jié)論:采用一次離心力200g 10分鐘,二次離心力1200g 10分鐘的二次離心法制備的PRP,血小板濃度和回收率高,避免了離心過程導(dǎo)致的血小板聚集,可能是PRP制備較有效的方法。22℃儲存的PRP中血小板濃度較高,歸一化后血小板活化率小,是較理想的儲存PRP的方法。TRAP作為激活劑與殼聚糖和牛凝血酶相比,是可行的,能夠提供更長的工作時間,釋放更多的生長因子。
【圖文】：

二次離心力 1200g；離心方法三：一次離心力 1200g，二次四：一次離心力 1200g，二次離心力 1200g。一次離心 1移至另一離心管，平衡后以二次離心力再次離心 10min，兩層，上層上清液為乏血小板血漿（PPP）,下層為血小板/4 上清液棄掉，剩余約 0.6ml 搖勻，即為 PRP，如圖 1-2

分為上下兩層，上層上清液為乏血小板血漿（PPP）,下層為血小板濃縮物（PC），吸取約 3/4 上清液棄掉，剩余約 0.6ml 搖勻，即為 PRP，如圖 1-2、圖 1-3 所示。圖 1-1 暴露新西蘭大白兔頸靜脈
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R782;R457

【引證文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 羅濤;李放;張寧;;不同抗凝劑和激活劑聯(lián)合應(yīng)用對富血小板血漿凝膠釋放生長因子影響的比較[J];中國組織工程研究;2012年16期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 王承勇;拔牙窩骨愈合過程中新骨形成及骨量保持的可能調(diào)節(jié)作用機制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

2 羅濤;影響富血小板血漿凝膠生物效應(yīng)因素的體外實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

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本文編號：2708091