【摘要】：背景口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是口腔頜面部惡性腫瘤中最常見的一類疾病,易發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移,對(duì)患者的生活質(zhì)量及生命造成極大的危害。目前,盡管臨床上OSCC有多種治療方法,但晚期腫瘤患者的療效仍不理想,近年來研究報(bào)道,免疫治療為惡性腫瘤的患者帶來希望,可有效改善患者的預(yù)后。其中,程序性死亡受體1(programmed death 1,PD-1)及其配體(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)這一對(duì)負(fù)性共刺激分子是影響T細(xì)胞功能的重要免疫調(diào)節(jié)因子,在腫瘤的免疫逃逸過程中發(fā)揮重要作用。目前,臨床上針對(duì)免疫檢驗(yàn)點(diǎn)PD-1/PD-L1單克隆抗體的治療在多種腫瘤治療中已取得突破性進(jìn)展。然而對(duì)于某些晚期腫瘤來講因其負(fù)荷較大,患者機(jī)體內(nèi)微環(huán)境改變及免疫耐受的產(chǎn)生,單一的免疫治療并不敏感,因此有必要采用聯(lián)合免疫治療的方法來提高療效。最新研究報(bào)道,趨化素樣因子超家族6(CMTM6)與PD-L1共同定位于質(zhì)膜和循環(huán)核內(nèi)體上,作為PD-L1的調(diào)控分子,可增強(qiáng)PD-L1的表達(dá),提高腫瘤抑制免疫應(yīng)答的能力。CMTM6有效地調(diào)控PD-L1的表達(dá),控制CMTM6能顯著減輕腫瘤特異性T細(xì)胞活性的抑制,因此CMTM6有望成為腫瘤聯(lián)合免疫治療的新靶點(diǎn)。目前,關(guān)于PD-1/PD-L1和CMTM6在OSCC組織中的表達(dá),以及CMTM6與PD-1/PD-L1信號(hào)通路的國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)鮮見報(bào)道。本文旨在研究PD-1、PD-L1、CMTM6在OSCC組織中的表達(dá)水平及生物學(xué)意義,為OSCC的免疫治療提供一定的理論基礎(chǔ)。目的本文通過研究PD-1、PD-L1和CMTM6在OSCC組織和正�？谇火つそM織中的表達(dá),分析與OSCC患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,以及PD-1、PD-L1和CMTM6三者之間的相關(guān)性,以期探索OSCC的致病機(jī)制,為OSCC的免疫治療提供理論基礎(chǔ)。方法本實(shí)驗(yàn)選取鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科存檔的滿足實(shí)驗(yàn)條件的石蠟包埋組織(FFPE)66例(OSCC組織44例,正�？谇火つそM織22例),分別采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)PD-1、PD-L1、CMTM6在OSCC組織和正�？谇火つそM織中mRNA和蛋白的表達(dá)。mRNA表達(dá)采用2~(-△△Ct)方法計(jì)算其相對(duì)表達(dá)量,蛋白表達(dá)采用半定量評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,定量資料的組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn),定性資料的組間比較采用χ~2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法,采用Spearman秩相關(guān)進(jìn)行相關(guān)性分析。P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.PD-1 mRNA在OSCC組織中和正�？谇火つそM織中的相對(duì)表達(dá)量分別為0.0008601±0.0000020、0.0000199±0.0000000;PD-L1 mRNA在OSCC組織中和正�？谇火つそM織中的相對(duì)表達(dá)量分別為0.0099626±0.0003928、0.0008427±0.0000024;CMTM6 mRNA在OSCC組織中和正�？谇火つそM織中的相對(duì)表達(dá)量分別為0.0180891±0.00100000、0.0063536±0.00021324;三者差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.041,P=0.035,P=0.0330.05)。2.PD-1蛋白表達(dá)于淋巴細(xì)胞的胞漿和胞膜上,PD-L1、CMTM6蛋白均表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的胞漿及細(xì)胞膜上。PD-1、PD-L1、CMTM6蛋白在OSCC組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為66%、55%、23%,在正�？谇火つそM織中分別為23%、25%、0%,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.014,P=0.002,P=0.0100.05)。3.OSCC組織中PD-1、PD-L1、CMTM6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率與患者臨床病理參數(shù)分析:PD-L1蛋白在患者TNM分期為I~II期和III~IV期的OSCC組織中陽(yáng)性率分別為53.57%和87.50%,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0220.05);PD-L1蛋白在患者淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移和無轉(zhuǎn)移的OSCC組織中陽(yáng)性率分別為87.50%和53.57%,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0220.05)。PD-1和CMTM6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率與患者性別、年齡、煙酒習(xí)慣、腫瘤大小、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期等臨床病理特征均無相關(guān)性(P0.05)。4.OSCC組織中CMTM6和PD-1/PD-L1之間相關(guān)性分析,Spearman檢驗(yàn)結(jié)果示:CMTM6與PD-L1在蛋白和mRNA水平表達(dá)上均呈正相關(guān)(r_s=0.510,P=0.0000.05;r_s=0.474,P=0.0030.05)。CMTM6與PD-1之間無明顯相關(guān)性(P0.05)。5.OSCC組織中PD-1、PD-L1、CMTM6 mRNA與蛋白表達(dá)相關(guān)性分析,Spearman檢驗(yàn)結(jié)果示:PD-1 mRNA表達(dá)與蛋白表達(dá)、PD-L1 mRNA表達(dá)與蛋白表達(dá)、CMTM6 mRNA表達(dá)與蛋白表達(dá)均呈正相關(guān)(r_s=0.756,P=0.0300.05;r_s=0.841,P=0.0000.05;r_s=00629,P=0.0280.05)。結(jié)論1.負(fù)性共刺激因子PD-1、PD-L1和CMTM6均參與OSCC的免疫逃逸機(jī)制,與OSCC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。2.PD-L1的表達(dá)水平與OSCC患者疾病的嚴(yán)重程度及預(yù)后有關(guān)。3.OSCC微環(huán)境中CMTM6可能與PD-1/PD-L1信號(hào)通路的調(diào)控具有協(xié)同作用,CMTM6可能通過激活或加強(qiáng)PD-1/PD-L1信號(hào)通路,發(fā)揮免疫抑制的作用。4.CMTM6可成為OSCC的免疫治療新靶點(diǎn),與PD-1/PD-L1聯(lián)合免疫治療有望提高臨床療效。
【圖文】：

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 qRT-PCR 擴(kuò)增結(jié)果擴(kuò)增曲線基線平穩(wěn)，呈平滑 S 型；熔解曲線峰形單一、銳利，熔解溫度均一；PD-1、PD-L1 和 CMTM6 擴(kuò)增曲線及熔解曲線結(jié)果（見圖 3-1、3-2、3-3）：

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 qRT-PCR 擴(kuò)增結(jié)果擴(kuò)增曲線基線平穩(wěn)，呈平滑 S 型；熔解曲線峰形單一、銳利，，熔解溫度均一；PD-1、PD-L1 和 CMTM6 擴(kuò)增曲線及熔解曲線結(jié)果（見圖 3-1、3-2、3-3）：圖 3-1 PD-1 擴(kuò)增曲線及熔解曲線
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.8

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本文編號(hào)：2707858