【摘要】： 牽引成骨自1905年由Codivilla首先用于矯形外科,后由Ilizarov系統(tǒng)發(fā)展、推廣治療長骨短小畸形,1992年由McCarthy應用于顱頜面外科臨床。目前已應用于顱面部各部位,但牽引成骨的某些局限性如牽引速度受限、治療周期長、牽引過快過長導致新骨形成不良等問題限制了其在臨床上的進一步推廣應用。因此,尋找一種加速新骨形成、縮短牽引成骨治療周期的方法必將使病人受益。本研究著眼于利用電穿孔技術(shù)將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染下頜骨牽引區(qū),試圖利用基因治療的方法促進下頜骨牽引成骨,進行了一系列的探索。首先建立兔雙側(cè)下頜骨牽引成骨的動物模型,然后在此模型基礎(chǔ)上進行了電穿孔技術(shù)(electroporation)介導的基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染,目的基因的表達檢測。簡述如下: 第一部分:兔雙側(cè)下頜骨牽引成骨模型的建立 目的:建立具有良好可行性及可重復性的兔雙側(cè)下頜牽引成骨模型,為下頜骨牽引成骨的深入研究奠定基礎(chǔ)。方法:選用20只成年新西蘭大白兔,隨機分為5組,每組4只,在下頜體近下頜角處全層截斷下頜骨,用兔下頜骨專用牽引器固定,經(jīng)過3天潛伏期,以0.8mm/d速度牽引,連續(xù)10天。分別在潛伏期末、牽引結(jié)束、固定期第2周、第4周、第8周行X線、3dCT檢查后處死動物,切取標本行組織學觀察。結(jié)果:實驗動物全部耐受實驗,除一例傷口感染外無其他并發(fā)癥。牽引裝置足夠穩(wěn)定,產(chǎn)生并維持了所需的牽引距離。全部動物的下頜骨被成功延長,牽引間隙逐漸被新生骨組織充填。結(jié)論:以兔下頜骨建立牽引成骨模型經(jīng)濟,有良好的可行性和可重復性。 第二部分:電穿孔介導的基因治療兔下頜骨牽引成骨模型建立與鑒定 目的:探討電穿孔介導的重組質(zhì)粒體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔下頜骨牽引成骨的可行性并給予鑒定。方法:取新西蘭大白兔30只,沿雙側(cè)下頜骨邊緣切開皮膚,鈍性分離附著下頜骨的肌肉,暴露下頜骨。于下頜骨頦孔處,用微型電動鉆截開下頜骨,于下頜骨斷開處安放2cm牽引器,固定,逐層縫合組織。于術(shù)后3天開始牽引,每天0.8mm,連續(xù)牽引10天后,將兔隨機分為3組:A組:質(zhì)粒+電脈沖組,B組:質(zhì)粒組,C組:生理鹽水組。A、C組均施加電脈沖刺激。B組只注射重組質(zhì)粒而不施加電刺激。各組分別于注射后3小時、1天、3天、7天、14天處死動物,切取牽引區(qū)組織約0.4cm×0.4cm大小,立即行冰凍切片檢查,用熒光顯微鏡觀察GFP蛋白表達情況,從而檢測外源基因的表達。檢測兔血清肝功能指標丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)和腎功能指標尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)和心、肝、腎組織學檢查。結(jié)果:A組轉(zhuǎn)染新西蘭大白兔,3小時可觀察到綠色熒光蛋白的表達,1天時增強,3天時表達最強,其后開始逐漸下降,7天后表達減少,14天仍可觀察到微弱熒光。B組的表達時限與A組相同,但各時相點的表達強度明顯弱于A組,C組在各時間段均未觀察到綠色熒光蛋白的表達。3組肝腎功能指標兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:電穿孔介導的帶有熒光標記重組質(zhì)粒體內(nèi)轉(zhuǎn)染能夠在兔下頜骨牽引區(qū)組織內(nèi)表達,并且電穿孔能明顯提高重組質(zhì)粒的體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率,說明電穿孔介導的重組質(zhì)粒體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔下頜骨牽引成骨的動物模型是可行的,用于體內(nèi)實驗是安全的。
【圖文】：

1 術(shù)中截骨情況 圖 2 牽引器固定后圖 3 完成牽引后出現(xiàn)反牙合，下前牙明顯過長 圖 4 完成牽引后4周，兩斷端骨皮質(zhì)尚不連續(xù)，正常骨組織與新成骨組織界面較模糊。

圖 3 完成牽引后出現(xiàn)反牙合，，下前牙明顯過長 圖 4 完成牽引后4周，兩斷端骨皮質(zhì)尚不連續(xù)，正常骨組織與新成骨組織界面較模糊。圖5 完成牽引后8周，3dCT顯示下頜骨完整,下緣曲線連續(xù)光滑,出現(xiàn)反牙合。圖6 潛伏期末，大量間質(zhì)細胞、少量單核巨噬細胞、成骨細胞和血管，骨斷端可見血腫和炎細胞浸潤(HE×100)
【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R782

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本文編號：2707661