發(fā)布時(shí)間：2020-06-11 07:10

【摘要】：目的:在體外培養(yǎng)的髁突軟骨細(xì)胞和股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞基礎(chǔ)上,加載一定時(shí)間的壓力,比較兩種軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原的合成,從細(xì)胞外基質(zhì)成分方面探索壓力對(duì)不同關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的影響差異,利用關(guān)節(jié)軟骨生物力學(xué)特性對(duì)治療骨關(guān)節(jié)病或錯(cuò)頜畸形等疾病的關(guān)節(jié)軟骨重建或改建的方法進(jìn)行初步探討。 方法:通過(guò)機(jī)械加酶聯(lián)合消化法,將2周齡的SD雄性大鼠來(lái)源的髁突軟骨和股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分離并體外單層培養(yǎng),建立其分別的有限細(xì)胞系,用Ⅱ型膠原的免疫組化來(lái)鑒定關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞。對(duì)兩種第三代軟骨細(xì)胞加載0.01MPa的靜壓力,實(shí)驗(yàn)壓力加載時(shí)間分為0.5h,3h,12h,以兩種細(xì)胞分別加載以上不同的壓力時(shí)間為實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組的軟骨細(xì)胞不進(jìn)行壓力的加載,除了加力時(shí)間不同外,其余實(shí)驗(yàn)條件均相同。用逆轉(zhuǎn)錄PCR的方法檢測(cè)各標(biāo)本Ⅱ型膠原的表達(dá),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,用t檢驗(yàn),比較各組數(shù)據(jù)間的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果:在0.01MPa靜壓力下,加力0.5h后,髁突軟骨細(xì)胞和股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)略有增加,對(duì)照組也有少量增加,三者無(wú)明顯差別;加力3h后,髁突軟骨細(xì)胞和股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分別與對(duì)照組相比,均有明顯Ⅱ型膠原表達(dá)的增高,且與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而髁突軟骨細(xì)胞與股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞之間的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,髁突軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原比股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的表達(dá)略高;加力12h后,髁突軟骨細(xì)胞和股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分別與對(duì)照組比較,都有顯著地Ⅱ型膠原表達(dá)降低(p0.05),且髁突軟骨細(xì)胞下降趨勢(shì)高于股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,但這兩者間的比較結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論:一定時(shí)間內(nèi),Ⅱ型膠原合成可隨時(shí)間延長(zhǎng)而增多,但當(dāng)加力時(shí)間過(guò)長(zhǎng)后,壓力可能抑制Ⅱ型膠原合成,同時(shí)可能刺激Ⅱ型膠原的分解代謝;而在相同的機(jī)械刺激下,髁突軟骨細(xì)胞和股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原變化趨勢(shì)相似,但髁突軟骨細(xì)胞變化趨勢(shì)更明顯,結(jié)果可能提示我們,關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞均可受機(jī)械力學(xué)刺激調(diào)控,而繼發(fā)性軟骨細(xì)胞較原發(fā)性軟骨的Ⅱ型膠原可能更易受壓力影響,對(duì)壓力的反應(yīng)更敏感。
【圖文】：

圖 7 髁突軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)曲線 圖 8 股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)曲線2.3 軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原免疫組化染色第三代大鼠髁突軟骨細(xì)胞和股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的Ⅱ型膠原免疫組化染色后，，呈現(xiàn)：胞漿著棕黃色，呈陽(yáng)性結(jié)果，胞核著較輕的淡藍(lán)色。其余呈陰性結(jié)果無(wú)染色。（附圖 9，10）2.4 各壓力組的Ⅱ型膠原表達(dá)結(jié)果2.4.1 軟骨細(xì)胞總 RNA 提取結(jié)果用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)各樣品的總 RNA 的濃度和純度得到如下結(jié)果：RNA在波長(zhǎng)為 260nm 和 280nm 得到的光密度值之比值（OD260/OD280）在 1.8 以上，電

圖 7 髁突軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)曲線 圖 8 股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)曲線2.3 軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原免疫組化染色第三代大鼠髁突軟骨細(xì)胞和股關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的Ⅱ型膠原免疫組化染色后，呈現(xiàn)：胞漿著棕黃色，呈陽(yáng)性結(jié)果，胞核著較輕的淡藍(lán)色。其余呈陰性結(jié)果無(wú)染色。（附圖 9，10）2.4 各壓力組的Ⅱ型膠原表達(dá)結(jié)果2.4.1 軟骨細(xì)胞總 RNA 提取結(jié)果用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)各樣品的總 RNA 的濃度和純度得到如下結(jié)果：RNA在波長(zhǎng)為 260nm 和 280nm 得到的光密度值之比值（OD260/OD280）在 1.8 以上，電
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R783.5

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本文編號(hào)：2707556