發(fā)布時(shí)間：2020-06-10 20:00

【摘要】： 涎腺腺樣囊性癌是口腔頜面部較常見的惡性腫瘤,具有嗜神經(jīng)和血管等特性,對(duì)放療和化療不敏感,傳統(tǒng)治療方法不能取得令人滿意的治療效果,隨著分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展,轉(zhuǎn)基因治療涎腺腺樣囊性癌成為新的策略,但轉(zhuǎn)基因治療腫瘤存在特異性差的問(wèn)題。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)hTERT在永生化細(xì)胞系和85%的人腫瘤組織中都具有較高的活性,而在大多數(shù)正常體細(xì)胞中則無(wú)活性,本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)hTERT在涎腺腺樣囊性癌陽(yáng)性率100%,而在正常涎腺組織內(nèi)陰性或弱陽(yáng)性。腫瘤壞死因子(TNF)相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)是TNF家族成員,能引起多種腫瘤細(xì)胞凋亡,而對(duì)正常細(xì)胞影響較小,目前,TRAIL已被應(yīng)用于多種腫瘤的轉(zhuǎn)基因治療研究。 針對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)基因治療特異性差的問(wèn)題,根據(jù)hTERT和TRAIL均具有腫瘤特異性的特性,在國(guó)家自然基金面上項(xiàng)目和國(guó)家自然基金國(guó)際合作項(xiàng)目資金支持下,以同源重組法構(gòu)建了AdCMV-TRAIL和AdTERT-TRAIL腺病毒載體,通過(guò)體外、體內(nèi)轉(zhuǎn)染涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞或正常細(xì)胞,探討它們對(duì)涎腺腺樣囊性癌的作用,結(jié)果顯示通過(guò)雙特異性AdTERT-TRAIL實(shí)現(xiàn)了TRAIL基因在SACC-83細(xì)胞中表達(dá),進(jìn)而對(duì)涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞具有腫瘤特異性殺傷作用:其對(duì)菏瘤裸鼠器官、肝臟功能和全血成分沒(méi)有明顯影響,這種特異性殺傷作用是由TRAIL基因激活了Caspase-3基因,從而啟動(dòng)了下游的凋亡途徑。這就為AdTERT-TRAIL轉(zhuǎn)基因治療涎腺腺樣囊性癌奠定了理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)基礎(chǔ)。
【圖文】：

轉(zhuǎn)染效率一EGFP轉(zhuǎn)染ACC一2和SACC一8324h后，在EGFP表達(dá)后發(fā)出綠色熒光的細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染(圖3.1，3.2)，此后逐漸減弱，至lw時(shí)仍未轉(zhuǎn)染腺病毒組細(xì)胞未見熒光著色;每個(gè)普通光和熒光下照相，然后分析轉(zhuǎn)染效率時(shí)兩種腺樣囊性癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率達(dá)到了97用此MOI值作為轉(zhuǎn)染時(shí)腺病毒的滴度。

AdCMV一EGFP轉(zhuǎn)染腺樣囊性癌SACC一83細(xì)熒光顯微鏡下影像(x400)性TRAIL基因mRNA檢測(cè)3d，提取腫瘤細(xì)胞總RNA進(jìn)行RT一PCR擴(kuò)285、185、553條清晰的帶，說(shuō)明所提取。經(jīng)RT一PCR擴(kuò)增瓊脂糖電泳紫外燈下觀AIL轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞后，，可擴(kuò)增出約594bP瘤細(xì)胞中則未擴(kuò)增出目的片段;2種腺樣APDH片段(圖3.3，3.4)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R739.87

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2706787