【摘要】： [目的]對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞進(jìn)行體外藻酸鹽支架三維立體培養(yǎng),并用堿性成纖維細(xì)胞生長因子及脂多糖進(jìn)行干預(yù)觀察細(xì)胞的增殖情況,為進(jìn)一步了解誘導(dǎo)牙周組織修復(fù)的機(jī)制提供科學(xué)的依據(jù)。 [方法]組織塊培養(yǎng)法獲取人牙周膜成纖維細(xì)胞,按1:2或1:3的比例進(jìn)行傳代,取4—7代的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將第4代的細(xì)胞進(jìn)行藻酸鹽三維支架培養(yǎng),比較細(xì)胞在二維及三維空間下的增殖情況。在藻酸鹽支架三維細(xì)胞培養(yǎng)第9天時(shí),分別以1ng/ml、10ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml濃度組堿性成纖維細(xì)胞生長因子,作用于三維生長狀態(tài)下的人牙周膜成纖維細(xì)胞,用MTT法測(cè)定OD值,觀察堿性成纖維細(xì)胞生長因子對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖的影響,并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。在細(xì)胞培養(yǎng)第7天時(shí),分別以10 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml、1000ng/ml濃度組脂多糖,作用于三維生長狀態(tài)下的人牙周膜成纖維細(xì)胞,用MTT法觀察脂多糖對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖的影響,并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 [結(jié)果]在本實(shí)驗(yàn)條件下第4代細(xì)胞在三維培養(yǎng)下與二維培養(yǎng)下比較細(xì)胞增殖情況未見明顯差異。與對(duì)照組比較,1ng/ml、10ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml濃度的堿性成纖維細(xì)胞生長因子作用于三維培養(yǎng)狀態(tài)下的人牙周膜成纖維細(xì)胞,在10ng/ml濃度時(shí)(P＜0.05)促增殖作用最明顯。與對(duì)照組比較,10ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml、1000ng/ml濃度的脂多糖作用于三維培養(yǎng)狀態(tài)下的人牙周膜成纖維細(xì)胞,在100ng/ml濃度時(shí)(P＜0.05)抑制作用最明顯。 [結(jié)論]在本實(shí)驗(yàn)條件下,在三維二維空間培養(yǎng)中的HPDLFs增殖未見明顯差異。10ng/ml濃度的堿性成纖維細(xì)胞生長因子能促進(jìn)HPDLFs的增殖,100ng/ml濃度的脂多糖能抑制HPDLFs的增殖。
【圖文】：

圖4細(xì)胞傳至第3代觀察(100x)(二)、細(xì)胞來源鑒定結(jié)果由于牙周組織的遺傳特性和組織特性，尤其是原代培養(yǎng)所得到的細(xì)群構(gòu)成〔16]，加之個(gè)體差異、培養(yǎng)技術(shù)和培養(yǎng)條件的影響，相同組織來源的盡相同的生物學(xué)特性，因此必須對(duì)所培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性觀察并作同時(shí)尋找合適的培養(yǎng)條件，以保持細(xì)胞生物學(xué)性狀的穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)免疫組化代HPDLFs，波形絲蛋白染色陽性，(見圖5)角蛋白染色陰性，(見圖6)證為來自中胚層的非上皮原性、非神經(jīng)原性、非血管內(nèi)皮原性的成纖維細(xì)胞，培養(yǎng)的細(xì)胞來源可靠，可用于下一步的研究。

盡相同的生物學(xué)特性，因此必須對(duì)所培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性觀察并作細(xì)胞來源鑒定，同時(shí)尋找合適的培養(yǎng)條件，以保持細(xì)胞生物學(xué)性狀的穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)免疫組化結(jié)果顯示，第四代HPDLFs，波形絲蛋白染色陽性，，(見圖5)角蛋白染色陰性，(見圖6)證明所培養(yǎng)的細(xì)胞為來自中胚層的非上皮原性、非神經(jīng)原性、非血管內(nèi)皮原性的成纖維細(xì)胞，說明本實(shí)驗(yàn)所培養(yǎng)的細(xì)胞來源可靠，可用于下一步的研究。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R78

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本文編號(hào)：2702792