【摘要】：牙髓是一種軟的結(jié)締組織并具有形成牙本質(zhì)和維持牙本質(zhì)的生物學(xué)和生理學(xué)活性的功能。當(dāng)牙髓組織感染時,由于血供的不足很難通過機(jī)體本身消除感染。臨床上常采用根管治療去除整個牙髓,消毒并充填根管,從而達(dá)到去除感染的目的。然而,這些牙齒失去了營養(yǎng)、修復(fù)、防御等功能,影響了牙齒的長期存活率。因此,活髓治療牙髓炎成為了理想的策略。 牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體再生已成為國內(nèi)國際口腔醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。近年來,利用干細(xì)胞和組織工程技術(shù)在各個領(lǐng)域的成功運(yùn)行為實現(xiàn)含牙髓組織再生提供了借鑒。種子細(xì)胞、誘導(dǎo)微環(huán)境和生物支架材料是運(yùn)用組織工程構(gòu)建器官及組織再生的三大要素。目前已經(jīng)有一些牙髓組織再生的報道,但接近于正常牙根長度的、完整的、具有繼續(xù)礦化能力的牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的再生仍然沒有實現(xiàn)。其根本原因在于缺乏理想的種子細(xì)胞、誘導(dǎo)微環(huán)境及生物支架材料�；谏鲜鲅芯勘尘�,本課題1)探索理想的種子細(xì)胞;2)新穎的三維干細(xì)胞聚合體的構(gòu)建;3)進(jìn)行牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體再生。 所取得的主要研究結(jié)果如下: 1、理想的種子細(xì)胞的篩選 為了評估最佳的種子細(xì)胞是否能進(jìn)行牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體再生,我們利用茜紅染色。油紅O染色、免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)(ICC)、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)從形態(tài)學(xué)、蛋白及CD分子表型檢測牙源性干細(xì)胞多向分化潛能進(jìn)行研究,利用單克隆擴(kuò)增技術(shù)及甲苯胺藍(lán)染色對這些細(xì)胞克隆形成能力進(jìn)行檢測,利用MTT及FCM對牙髓干細(xì)胞(DPSCs)、根端牙乳頭干細(xì)胞(SCAP)增值能力進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn):根端牙乳頭干細(xì)胞具有更高的增值能力和多向分化能力。因此,SCAP可以作為種子細(xì)胞有助于牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的成功再生。 2、新穎三維無支架材料干細(xì)胞聚合體的構(gòu)建 為了獲得適合理想的無支架材料的細(xì)胞聚合體,我們對常用的細(xì)胞膜片、細(xì)胞聚合體進(jìn)行對比、改進(jìn),并進(jìn)行組織學(xué)觀察、免疫組織化學(xué)觀察、掃面電鏡觀察及RT-PCR檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn):細(xì)胞聚合體內(nèi)含有大量的細(xì)胞外基質(zhì)、足夠的細(xì)胞量,其表面細(xì)胞伸張充分,細(xì)胞連接緊密,此外基因水平發(fā)現(xiàn)細(xì)胞聚合體較細(xì)胞膜片的成牙/成骨能力更強(qiáng)。本研究結(jié)果充分說明細(xì)胞聚合體更適合牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的再生。3、牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體再生 本實驗室郭維華博士對乙二胺四乙酸(EDTA)梯度脫礦處理的牙本質(zhì)基質(zhì) 進(jìn)行了系統(tǒng)的檢測發(fā)現(xiàn)其不僅具有支撐細(xì)胞的作用,還能提供一個誘導(dǎo)成牙本質(zhì)微環(huán)境,并利用處理過的牙本質(zhì)基質(zhì)片段成功誘導(dǎo)牙囊細(xì)胞成為具有繼續(xù)礦化能力的成牙本質(zhì)細(xì)胞,完整的牙髓。因此,我們應(yīng)用處理后的牙根結(jié)合SCAP細(xì)胞聚合體移植入裸鼠皮下,六周后取材,脫礦。HE和Masson三色觀察、免疫組織化學(xué)染色。研究結(jié)果顯示根管管壁有一層新形成的、厚度均勻的牙本質(zhì)并且其表面排列著一層極性變化的、對牙本質(zhì)涎蛋白(DSP)、骨涎蛋白(BSP)、堿性磷酸酶(ALP)、人線粒體表達(dá)呈陽性成牙本質(zhì)細(xì)胞層,以及血管化的固有牙髓。
【學(xué)位授予單位】：佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R78

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 朱軼萍;張光東;吳友農(nóng);;人牙髓細(xì)胞在離體牙髓腔內(nèi)向成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞分化的研究[J];口腔醫(yī)學(xué);2008年01期

2 李康婧;黃楊;陳文霞;;牙本質(zhì)支架體外誘導(dǎo)兔骨髓干細(xì)胞分化[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2012年04期

3 Behnam Ebrahimi;Mohammad Mehdi Yaghoobi;Ali Mohammadi Kamal-abadi;Maryam Raoofn;;Human dental pulp stem cells express many pluripotency regulators and differentiate into neuronal cells[J];Neural Regeneration Research;2011年34期

4 安玉林;那思家;韋蔚;陳哲;王國軒;杜建宇;金巖;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜片的構(gòu)建及其特性[J];實用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2012年03期

5 那思家;黃芳;郭維華;宮坤;金巖;李德超;;牙周膜干細(xì)胞膜片的構(gòu)建及其生物學(xué)特性的研究[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2011年02期

6 黃楊;李康婧;陳文霞;;根管預(yù)備后的牙本質(zhì)壁對兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長的影響[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2012年03期

7 ;Osteoinduction by Ca-P biomaterials implanted into the muscles of mice[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年07期

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1 王鳳明;TGF-β對人牙髓細(xì)胞的作用及p38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究[D];四川大學(xué);2006年

2 張蓉;基于細(xì)胞膜片技術(shù)構(gòu)建血管化組織工程骨的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

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1 文春媚;伴根尖周炎的年輕無髓犬恒牙組織再生的實驗研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 楊明聰;人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化相關(guān)miRNA的篩選[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

3 王娉婷;IL-1β對人牙髓成纖維細(xì)胞中MMP-2、MMP-9影響的體外研究[D];四川大學(xué);2007年

4 朱軼萍;人牙髓細(xì)胞在體外增殖和分化潛能的實驗研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

5 馬麗;人根尖乳頭干細(xì)胞和牙髓干細(xì)胞生物行為的比較研究[D];山東大學(xué);2010年

6 董金山;經(jīng)典WNT信號通路在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中的作用體外實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

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本文編號：2698868