【摘要】： 牽張成骨(Distraction Osteogenesis, DO)是一種通過(guò)對(duì)切開(kāi)后的骨斷端施加穩(wěn)定、持續(xù)的牽張力,使骨斷端間隙內(nèi)形成新骨的技術(shù),目前已經(jīng)成為治療頜骨畸形和缺損的重要方法。但是,固定期過(guò)長(zhǎng)和下牙槽神經(jīng)易受損傷仍是制約該技術(shù)發(fā)展的重要原因。神經(jīng)生長(zhǎng)因子是一種能調(diào)控神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和生長(zhǎng)的蛋白質(zhì),本課題組在前期的研究中發(fā)現(xiàn),在牽張間隙局部應(yīng)用神經(jīng)生長(zhǎng)因子,可同時(shí)促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)和加速新骨再生。生長(zhǎng)因子直接使用時(shí)會(huì)很快失活,不易達(dá)到所期望的生物效應(yīng),而應(yīng)用緩釋載體可以較長(zhǎng)時(shí)期地保持因子的活性和局部有效濃度,減少因子頻繁注射,提高藥效和用藥安全性,并提高患者的依從性。原位水凝膠能以液體狀態(tài)給藥,并在用藥部位轉(zhuǎn)化為半固體,非常適宜作為蛋白多肽大分子藥物的控釋材料。納米晶膠原基骨材料(Col/nHA)是清華大學(xué)材料系生物材料組按照仿生思路,用自組裝工藝制備出的新型人工骨材料,在微結(jié)構(gòu)與成分上與天然骨高度相似。Col/nHA骨材料不僅可直接作為骨缺損修復(fù)材料和骨組織工程載體材料,亦因其具有良好的生物相容性和內(nèi)部孔隙可控性,用于藥物或生長(zhǎng)因子的吸附、緩釋。海藻酸鹽水凝膠在制備過(guò)程中復(fù)合Col/nHA骨粉材料,可以有效地減小水凝膠的溶脹,起到“穩(wěn)定支架”的作用,大大提高了水凝膠的緩釋效應(yīng)。同時(shí),Col/nHA骨粉可作為局部微小的礦化中心,起到促進(jìn)新生骨形成的作用。另外,基于前期研究結(jié)果,我們認(rèn)為神經(jīng)生長(zhǎng)因子的促進(jìn)成骨作用機(jī)制之一可能為其誘導(dǎo)感覺(jué)和交感神經(jīng)纖維長(zhǎng)入骨痂,故推測(cè)感覺(jué)神經(jīng)對(duì)于牽張成骨有重要調(diào)控作用。因此,本研究的主要目標(biāo)是制備攜帶hNGFβ的新型溫敏型可注射海藻酸鹽水凝膠復(fù)合Col/nHA骨粉緩釋系統(tǒng),并將其應(yīng)用于下頜骨牽張成骨,以及研究失下牙槽神經(jīng)支配對(duì)牽張成骨新骨形成的影響。全文分為3部分: 1海藻酸鹽水凝膠復(fù)合Col/nHA骨粉緩釋hNGFβ系統(tǒng)的制備及檢測(cè) 目的:制備攜帶hNGFβ的海藻酸鹽水凝膠復(fù)合Col/nHA骨粉緩釋系統(tǒng),并對(duì)其進(jìn)行流變學(xué)、緩釋效能、生物安全性、體內(nèi)降解等方面的檢測(cè)。方法:將海藻酸鹽水凝膠原料粉末加入含有0.1mg/ml hNGFβ的生理鹽水中,充分?jǐn)嚢枵鹗幒蟀凑找欢ū壤旌?同時(shí)加入1%質(zhì)量濃度的Col/nHA粉末,超聲波震蕩,37℃靜置后重構(gòu)為凝膠體系。記錄其固化時(shí)間,并進(jìn)行體外釋藥研究和動(dòng)物體內(nèi)降解實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:凝膠固化開(kāi)始時(shí)間為5min,完全固化時(shí)間為10min,操作簡(jiǎn)單方便,可注射性能優(yōu)良;體外釋藥曲線可見(jiàn)40%的hNGFβ在48h左右釋放出來(lái),80%的hNGFβ在8d左右釋放出來(lái),72h之后hNGFβ的釋放曲線基本平緩;凝膠埋植于兔肌肉中4周后降解基本完成,無(wú)明顯炎性反應(yīng)。結(jié)論:溫敏型可注射海藻酸鹽水凝膠復(fù)合Col/nHA骨粉緩釋系統(tǒng)固化性能良好,可注射性好;對(duì)hNGFβ有較好的緩釋效果;體內(nèi)4周后即可基本降解,有望成為一種能夠應(yīng)用于牽張成骨的可注射緩釋材料。 2海藻酸鹽凝膠復(fù)合Col/nHA的hNGFβ緩釋系統(tǒng)對(duì)DO新骨形成的作用 目的:研究兔雙側(cè)下頜骨牽張模型中局部注射加載hNGFβ的復(fù)合Col/nHA骨粉的海藻酸鹽凝膠緩釋系統(tǒng)對(duì)下頜骨牽張成骨新骨形成的影響。方法:以16只兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,建立雙側(cè)下頜骨牽張成骨模型。按照不同的牽張速度分組,在固定期第1天每只兔的一側(cè)下頜骨骨痂內(nèi)注射加載hNGFβ的緩釋凝膠0.2ml,另一側(cè)注射生理鹽水。用簡(jiǎn)易感覺(jué)神經(jīng)測(cè)試方法檢測(cè)IAN的功能。固定期第14d,28d取材,進(jìn)行X線片、骨組織學(xué)觀察分析。應(yīng)用SPSS12.0軟件包進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)。結(jié)果:高速牽張組雙側(cè)神經(jīng)功能在固定期第14d、28d時(shí)有明顯差異,hNGFβ緩釋凝膠處理側(cè)的IAN功能較對(duì)照側(cè)顯著提高;X線側(cè)位片顯示,固定期第14d和第28d時(shí),13只兔的左側(cè)(凝膠注射側(cè))骨痂密度高于對(duì)照測(cè),且在高速牽張組差別更加明顯;骨組織學(xué)參數(shù)結(jié)果顯示,各組的hNGFβ緩釋凝膠處理側(cè)的骨量百分比及骨小梁寬度均明顯大于對(duì)照測(cè)(P0.05)。結(jié)論:在兔雙側(cè)下頜骨牽張成骨模型中,應(yīng)用加載hNGFβ的溫敏可注射型海藻酸鹽水凝膠復(fù)合Col/nHA骨粉緩釋系統(tǒng)能夠促進(jìn)牽張區(qū)新生骨形成及IAN功能恢復(fù)。 3離斷下牙槽神經(jīng)對(duì)兔下頜骨牽張成骨新骨生成的影響 目的:研究去下牙槽神經(jīng)支配對(duì)兔下頜骨牽張成骨新骨形成的影響。方法:以20只雄性成年新西蘭白兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,行雙側(cè)下頜骨牽張成骨,在手術(shù)顯微鏡下切斷結(jié)扎下牙槽神經(jīng),保護(hù)下牙槽血管束。固定期第14d,28d取材,進(jìn)行骨組織學(xué)檢查、生物力學(xué)檢測(cè)。應(yīng)用SPSS12.0軟件包進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)。結(jié)果:離斷下牙槽神經(jīng)側(cè)牽張間隙可見(jiàn)神經(jīng)組織完全變性,骨小梁分布方向較雜亂,寬度不均勻,并有較多分散的軟骨島分布;骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)顯示,離斷下牙槽神經(jīng)側(cè)新生骨量百分比和新生骨小梁寬度分別較對(duì)照側(cè)明顯降低(P 0.05)。離斷下牙槽神經(jīng)側(cè)新生骨痂的最大載荷及撓曲強(qiáng)度均比對(duì)照側(cè)降低(P 0.05)。結(jié)論:去下牙槽神經(jīng)支配可引起牽張區(qū)新生骨小梁成熟較晚,新生骨痂生物力學(xué)強(qiáng)度不足等,提示感覺(jué)神經(jīng)系統(tǒng)在牽張成骨的新骨生成過(guò)程中起到一定調(diào)控作用。
【圖文】：

價(jià)陽(yáng)離子與 G 單元的均一聚合嵌段作用形成“雞蛋箱”結(jié)以及該嵌段與 Ca2+可能的結(jié)合位點(diǎn)水凝膠在生物體內(nèi)以酶解方式生成甘露糖醛酸和體無(wú)毒性、無(wú)免疫原性。以往的研究中曾經(jīng)報(bào)道藻和較差的可吸收性，這與藻酸鈣的純度不夠有關(guān)。度敏感型海藻酸鹽水凝膠，具有純度高、生物相容、溫度敏感等特性，，是一種較為理想的生物緩釋、修水凝膠因具有很好的理化性能和生物學(xué)性能[101]，、藥物緩釋系統(tǒng)、創(chuàng)傷修復(fù)、治療返流性食管炎、降脂、治療習(xí)慣性便秘和改善水質(zhì)、凈化環(huán)境等方示出巨大的應(yīng)用潛力。體外研究發(fā)現(xiàn)，成纖維細(xì)胞

不同濃度溫敏型海藻酸鹽水凝膠的固化時(shí)間（37℃）
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R782

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2696439