【摘要】：背景: 腫瘤是指在各種致癌因素的影響下,造成細(xì)胞在基因水平上失去對(duì)其生長(zhǎng)的正常調(diào)控,導(dǎo)致細(xì)胞克隆性異常增生而形成的。癌癥作為其中的一大類,是目前造成死亡的主要病因之一,其具有局部浸潤(rùn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等重要特性,是致人死亡的最主要原因。 抑癌基因(tumor suppressor gene)是指一大類可以抑制細(xì)胞分裂及抑制癌變作用的基因,即在機(jī)體內(nèi)對(duì)正常細(xì)胞增殖起負(fù)調(diào)節(jié)作用的基因,當(dāng)抑癌基因缺失、失活或異常表達(dá)時(shí),往往會(huì)促使細(xì)胞失控而呈惡性生長(zhǎng)。原癌基因是指具有誘導(dǎo)它所在的細(xì)胞癌變的基因,是人或動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)控制細(xì)胞生長(zhǎng)的固有基因,現(xiàn)認(rèn)為抑癌基因的負(fù)性表達(dá)或原癌基因的顯性表達(dá)可能是引起細(xì)胞異常性增殖或癌變的主要調(diào)節(jié)機(jī)制,因此,抑癌基因的異常表達(dá)與原癌基因的表達(dá),可能是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的主要原因。 PTEN(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)基因作為一個(gè)具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因,定位于染色體10q23,在多種腫瘤的研究中表明,該區(qū)段常出現(xiàn)的雜合子丟失、無(wú)義突變、錯(cuò)義突變等可能是造成腫瘤發(fā)生、發(fā)展的原因,如:膠質(zhì)瘤、甲狀腺癌、乳腺癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌等。在已有研究表明,PTEN基因在正常組織中呈現(xiàn)高表達(dá),在腫瘤組織中出現(xiàn)低表達(dá)或表達(dá)缺失,所以,PTEN可能是腫瘤發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中重要的因素之一。目前,對(duì)唾液腺腺樣囊性癌的研究較少,因此,進(jìn)一步研究唾液腺腺樣囊性癌中是否存在PTEN基因的表達(dá)異常、是否存在與其他腫瘤相似的低表達(dá)、PTEN蛋白的表達(dá)是否與PTEN基因的轉(zhuǎn)錄相關(guān),就顯得很有必要。 目的: 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用RT-PCR、western bloting法,研究唾液腺正常組織和唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN基因及蛋白的表達(dá)差異;了解PTEN基因是否與唾液腺腺樣囊性癌的發(fā)生有關(guān)及PTEN蛋白的表達(dá)與PTEN基因RNA轉(zhuǎn)錄是否相關(guān),為了解唾液腺組織腫瘤的發(fā)生與抑癌基因PTEN基因的相關(guān)性提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù),以及為唾液腺腫瘤的實(shí)驗(yàn)室診斷提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 材料與方法: 1、采集病理診斷明確為唾液腺腺樣囊性癌患者的唾液腺腺樣囊性癌組織及其相應(yīng)的正常組織,按RNA提取說(shuō)明書提取總RNA,行反轉(zhuǎn)錄PCR,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳,用Bio-Rad凝膠圖像成像儀觀察結(jié)果,分析唾液腺正常組織和唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN RNA的表達(dá)。 2、采集病理診斷明確為唾液腺腺樣囊性癌患者的唾液腺腺樣囊性癌組織及其相應(yīng)的正常組織,按蛋白質(zhì)提取Western及IP細(xì)胞裂解液說(shuō)明書提取總蛋白,BCA法測(cè)定蛋白濃度,然后,用western免疫印跡(western bolting WB)分析PTEN蛋白表達(dá),經(jīng)熒光顯影,X片成像,運(yùn)用Bio-Rad凝膠圖像成像儀觀察結(jié)果,分析唾液腺正常組織和唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN蛋白的表達(dá)。 結(jié)果: 1、在唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN RNA的表達(dá)呈低表達(dá),在正常唾液腺組織中PTEN RNA的表達(dá)呈高表達(dá)狀態(tài)。根據(jù)Bio-Rad凝膠圖像成像儀對(duì)電泳圖片的灰度值進(jìn)行定量測(cè)定,采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,利用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN RNA的表達(dá)較正常唾液腺組織明顯降低,并且兩者的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2、在唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN蛋白的表達(dá)呈低表達(dá),在正常唾液腺組織中PTEN蛋白的表達(dá)呈高表達(dá)狀態(tài)。根據(jù)Bio-Rad凝膠圖像成像儀對(duì)成像的X線片的灰度值進(jìn)行定量測(cè)定,采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,利用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN蛋白的表達(dá)較正常唾液腺組織明顯降低,并且兩者的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),同時(shí),PTEN蛋白在兩者中的表達(dá)與PTEN基因的轉(zhuǎn)錄水平具有一定的相關(guān)性。 結(jié)論: PTEN基因在唾液腺腺樣囊性癌和正常唾液腺中都存在表達(dá),在正常唾液腺組織中PTEN基因的表達(dá)呈高表達(dá)狀態(tài),在唾液腺腺樣囊性癌中PTEN基因的表達(dá)明顯降低,PTEN基因在兩者中的表達(dá)水平的差異在一定程度上可以反映出PTEN基因在唾液腺腺樣囊性癌的發(fā)生過(guò)程中起到一定的作用。PTEN基因作為具有多特異性的磷酸酶活性的抑癌基因,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中的起到重要的作用,有可能作為早期診斷、監(jiān)控唾液腺腺樣囊性癌的標(biāo)記物,以期早期診斷,提高治療效率,提高患者的生存質(zhì)量,為患者提供更好的服務(wù)。
【圖文】：

圖 2： PTEN 基因 3D 結(jié)構(gòu)圖Fig 2：The 3D structure of PTENPTEN 基因突變常出現(xiàn)在人類腫瘤和具有癌變傾向的遺傳性綜合癥，，如 胃乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、Bannayan-zonana 綜合癥、Cowden 病等，抑癌基因 PTEN控細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、體內(nèi)免疫功能的調(diào)節(jié)、胚胎發(fā)育及細(xì)胞移行、、生長(zhǎng)等生理活動(dòng)中具有重要的作用[15-18]。1、PTEN 基因阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 PTEN 基因是具有雙特異性酶活性的抑癌基因，能激活 PI3K，使細(xì)胞膜上的 PIP3降解、脫磷酸化，保持的低水平，從而阻斷 PI3K/Akt 生長(zhǎng)因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，實(shí)現(xiàn)阻滯細(xì)胞周期，細(xì)胞凋亡的功能。當(dāng) PTEN 突變或缺失導(dǎo)致 PIP3脫磷酸化降低，造成 PIP3時(shí) Akt 可磷酸化激活，從而拮抗細(xì)胞凋亡，同時(shí)造成細(xì)胞生長(zhǎng)周期異常而表非正常性增殖。

圖 1-1 PTEN RNA 在正常唾液腺組織和唾液腺腺樣囊性癌組織的表達(dá)Fig. 1-1 The expression of PTEN RNA in Normal salivary gland and salivary glandadenoid cystic carcinomaM：DNA 標(biāo)準(zhǔn)；0：正常唾液腺組織； 1：唾液腺樣囊性癌組織2.2 定量積分分析表 1-1 PTEN RNA 在正常唾液腺組織和唾液腺腺樣囊性癌組織表達(dá)的灰度值分析情況表Table 1-1 Quantitative analysis of PTEN RNA expression between in Normal salivary glandand salivary gland adenoid cystic carcinoma正常組織中 PTEN RNA 的灰度值 腺樣囊性癌中 PTEN RNA 的灰度值PTEN 64727.00±0.0564583.88±0.1464573.28±0.2664644.94±0.3041019.95±0.6232483.46±0.1540462.31±0.3441028.0.19β-actin 64703.7±0.62868.61±064453.2564126.7364727.0061111.9663304.5164682.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R739.8

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本文編號(hào)：2694224