【摘要】： 目的:檢測(cè)攜帶野生型p53基因的重組腺病毒顆粒(rAd-p53)體外感染腺樣囊性癌細(xì)胞ACC-M后外源性p53的表達(dá),觀察rAd-p53感染ACC-M細(xì)胞后對(duì)其體外黏附、侵襲能力、遷移、增殖及化療敏感性的影響,探討rAd-p53治療腺樣囊性癌臨床應(yīng)用的可行性。 方法:(1)利用攜帶野生型p53的重組腺病毒體外感染P53基因突變的腺樣囊性癌細(xì)胞ACC-M,應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)外源性p53基因在ACC-M細(xì)胞中的表達(dá)及感染效率;(2)應(yīng)用倒置顯微鏡觀察rAd-p53對(duì)ACC-M細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響;運(yùn)用MTT法、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室法檢測(cè)感染前后細(xì)胞黏附、遷移、侵襲能力的變化;(3)通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)觀察rAd-p53對(duì)ACC-M細(xì)胞增殖的影響,再用熒光顯微鏡觀察Hoechst33342和PI熒光染色后細(xì)胞核形態(tài)的改變;(4)通過(guò)MTT測(cè)定細(xì)胞存活率檢測(cè)感染rAd-p53前后ACC-M細(xì)胞對(duì)紫杉醇敏感性的影響,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞周期分布及凋亡的影響。(5)采用SPSS 17.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析及t檢驗(yàn)。 結(jié)果:1.外源性P53基因經(jīng)腺病毒載體成功轉(zhuǎn)入ACC-M細(xì)胞,細(xì)胞免疫組化法檢出外源性p53的高表達(dá),當(dāng)感染復(fù)數(shù)MOI=100時(shí),體外感染效率達(dá)到93.33%。2.感染p53基因后的腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞較其親代細(xì)胞的黏附、遷移、侵襲能力降低。3.rAd-p53能顯著抑制ACC-M細(xì)胞增殖,MTT檢測(cè)顯示, rAd-p53在10～200 MOI濃度范圍內(nèi),對(duì)ACC-M細(xì)胞的增殖抑制作用呈現(xiàn)時(shí)間依賴性和濃度依賴性(P0.05);100MOI組通過(guò)Hoechst33342和PI熒光染色后,熒光顯微鏡下可見(jiàn)典型的細(xì)胞核皺縮及凋亡小體。4.經(jīng)rAd-p53感染的腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性增強(qiáng),IC50降低為感染前的1/12,rAd-p53可誘導(dǎo)腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期G0/G1期阻滯,聯(lián)用組G0/G1期及G2/M期均顯著升高,且其S期下降較兩單藥組與空白對(duì)照組比較有極顯著差異(P0.01)。 結(jié)論:1.重組腺病毒rAd-p53是高效的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng),能將野生型P53基因?qū)胂贅幽倚园〢CC-M細(xì)胞中。2.感染W(wǎng)t-p53基因的腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞侵襲能力、黏附能力及遷移能力明顯降低。3.rAd-p53對(duì)ACC-M細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)有力的增殖抑制及凋亡誘導(dǎo)作用,并且能有效阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期。4.rAd-P53可增強(qiáng)ACC-M細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性,rAd-p53基因治療可望成為晚期、無(wú)法耐受手術(shù)和大劑量放化療及復(fù)發(fā)性腺樣囊性癌患者的綜合治療方法之一。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R739.8

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本文編號(hào)：2681684