【摘要】： 目的:檢測攜帶野生型p53基因的重組腺病毒顆粒(rAd-p53)體外感染腺樣囊性癌細胞ACC-M后外源性p53的表達,觀察rAd-p53感染ACC-M細胞后對其體外黏附、侵襲能力、遷移、增殖及化療敏感性的影響,探討rAd-p53治療腺樣囊性癌臨床應用的可行性。 方法:(1)利用攜帶野生型p53的重組腺病毒體外感染P53基因突變的腺樣囊性癌細胞ACC-M,應用免疫細胞化學法檢測外源性p53基因在ACC-M細胞中的表達及感染效率;(2)應用倒置顯微鏡觀察rAd-p53對ACC-M細胞形態(tài)學的影響;運用MTT法、劃痕實驗、Transwell小室法檢測感染前后細胞黏附、遷移、侵襲能力的變化;(3)通過MTT實驗觀察rAd-p53對ACC-M細胞增殖的影響,再用熒光顯微鏡觀察Hoechst33342和PI熒光染色后細胞核形態(tài)的改變;(4)通過MTT測定細胞存活率檢測感染rAd-p53前后ACC-M細胞對紫杉醇敏感性的影響,應用流式細胞儀檢測其對細胞周期分布及凋亡的影響。(5)采用SPSS 17.0軟件包對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析及t檢驗。 結果:1.外源性P53基因經(jīng)腺病毒載體成功轉(zhuǎn)入ACC-M細胞,細胞免疫組化法檢出外源性p53的高表達,當感染復數(shù)MOI=100時,體外感染效率達到93.33%。2.感染p53基因后的腺樣囊性癌ACC-M細胞較其親代細胞的黏附、遷移、侵襲能力降低。3.rAd-p53能顯著抑制ACC-M細胞增殖,MTT檢測顯示, rAd-p53在10～200 MOI濃度范圍內(nèi),對ACC-M細胞的增殖抑制作用呈現(xiàn)時間依賴性和濃度依賴性(P0.05);100MOI組通過Hoechst33342和PI熒光染色后,熒光顯微鏡下可見典型的細胞核皺縮及凋亡小體。4.經(jīng)rAd-p53感染的腺樣囊性癌ACC-M細胞對紫杉醇的敏感性增強,IC50降低為感染前的1/12,rAd-p53可誘導腺樣囊性癌ACC-M細胞凋亡及細胞周期G0/G1期阻滯,聯(lián)用組G0/G1期及G2/M期均顯著升高,且其S期下降較兩單藥組與空白對照組比較有極顯著差異(P0.01)。 結論:1.重組腺病毒rAd-p53是高效的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng),能將野生型P53基因?qū)胂贅幽倚园〢CC-M細胞中。2.感染W(wǎng)t-p53基因的腺樣囊性癌ACC-M細胞侵襲能力、黏附能力及遷移能力明顯降低。3.rAd-p53對ACC-M細胞產(chǎn)生強有力的增殖抑制及凋亡誘導作用,并且能有效阻滯細胞周期于G0/G1期。4.rAd-P53可增強ACC-M細胞對紫杉醇的敏感性,rAd-p53基因治療可望成為晚期、無法耐受手術和大劑量放化療及復發(fā)性腺樣囊性癌患者的綜合治療方法之一。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R739.8

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