發(fā)布時(shí)間：2020-05-25 17:06

【摘要】：目的:研究抑制粘著斑激酶的表達(dá)對(duì)于口腔鱗癌細(xì)胞CAL27生物特性的影響,并初步探究在粘著斑激酶表達(dá)被抑制的情況下X射線輻照對(duì)于口腔鱗癌細(xì)胞的殺傷能力是否增強(qiáng),為今后口腔鱗癌臨床治療方案的選擇上提供一定的理論依據(jù)。材料和方法:用粘著斑激酶抑制劑FAK Inhibitor 14處理口腔鱗癌細(xì)胞系CAL27細(xì)胞,X射線輻照由中科院蘭州分院近代物理研究所輻照終端提供。將實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組(C)抑制劑處理組(I)、X射線處理組(X)和抑制劑加X射線處理組(I+X)。分別用Western Blot蛋白印跡法檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá),用實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞分析系統(tǒng)、克隆形成實(shí)驗(yàn)和Ki-67免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的增殖活性,用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力,用Annexin V/PI雙染法流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的凋亡情況,用鬼筆環(huán)肽熒光染色和原子力顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞骨架及細(xì)胞的力學(xué)性能變化。結(jié)果:粘著斑抑制劑處理CAL27細(xì)胞后,相較于正常對(duì)照組細(xì)胞,其增殖活性降低、遷移能力受到顯著抑制,與正常對(duì)照組相比楊氏模量增加,細(xì)胞骨架變少且不規(guī)則。加入X射線照射后,抑制劑組顯示出更高的凋亡率。抑制劑加X射線照射組的增殖、遷移能力均為各組最低值。結(jié)論:無論是否添加X射線輻照,經(jīng)過粘著斑激酶抑制劑處理,均能有效降低CAL27口腔鱗癌細(xì)胞的增殖活性和遷移能力,經(jīng)過抑制劑干擾的CAL27細(xì)胞比未經(jīng)處理的對(duì)照組細(xì)胞在X射線輻照下更易發(fā)生凋亡。
【圖文】：

圖 2.4.1 Western Blot 檢測(cè)正常對(duì)照組（C）、X 射線輻照組（X）、抑劑處理組（I）以及抑制劑處理加上 X 射線輻照組（IX）的 FAK 蛋白及 Pax蛋白的表達(dá)水平。2.5 討論從實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖中我們可以清晰地看到經(jīng)過 FAK Inhibitor 14 的作用，CA細(xì)胞的 FAK 蛋白表達(dá)量被明顯下調(diào)，證明本次實(shí)驗(yàn)選取的該抑制劑能夠有效制所選的研究對(duì)象細(xì)胞 CAL27 的粘著斑激酶 FAK 的表達(dá)，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的變量制可靠性提供了充足的證據(jù)。同時(shí)我們從樁蛋白（Paxillin）的表達(dá)情況可以看輻照組和正常組在樁蛋白的表達(dá)量上差異不太明顯，單純添加 FAK 抑制劑可下調(diào)樁蛋白的表達(dá)，，但是經(jīng)過 FAK 抑制劑處理后再進(jìn)行輻照能顯著減少樁蛋的表達(dá)，提示 FAK 被抑制的情況下，輻照對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞 CAL27 的殺傷作用為顯著可能與樁蛋白有著不可忽略的聯(lián)系。

圖 3.4.1 實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞分析系統(tǒng)檢測(cè)正常對(duì)照組（C）、X 射線輻照組（X制劑處理組（I）以及抑制劑處理加上 X 射線輻照組（I+X）的細(xì)胞增殖情況圖可以看出和正常對(duì)照組細(xì)胞相比，抑制劑處理組、X 射線處理組及抑制劑 射線處理組細(xì)胞的增殖速率和總量依次降低。.4.2 克隆形成實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.8

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