【摘要】：目的:觀察CTLA-4-Ig對佛波酯和1,25(OH)_2VD3誘導(dǎo)U937細(xì)胞分化為破骨細(xì)胞樣細(xì)胞成模的影響,為口腔正畸過程中控制骨改建加速牙移動(dòng)的藥物研究提供潛在的靶點(diǎn)。方法:實(shí)驗(yàn)分三組:空白組,誘導(dǎo)組,實(shí)驗(yàn)組,采用6孔板培養(yǎng)細(xì)胞各組重復(fù)三次。誘導(dǎo)組用佛波酯誘導(dǎo)2天后再用佛波酯和1,25(OH)_2VD3誘導(dǎo)6天,中間更換1次誘導(dǎo)液;實(shí)驗(yàn)組在誘導(dǎo)組的基礎(chǔ)上于第3天加入CTLA-4-Ig進(jìn)行干預(yù)。利用倒置顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,利用普通光學(xué)顯微鏡、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色對成模的破骨樣細(xì)胞鑒定及計(jì)數(shù),實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)檢測破骨細(xì)胞標(biāo)志性酶MMP-9,TRAP,CTSK,RANK的mRNA水平,同時(shí)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測了不同組細(xì)胞培養(yǎng)液的TRAP/CTSK,結(jié)果采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1.U937細(xì)胞呈小而略不規(guī)則圓,一直呈懸浮狀態(tài)生長;佛波酯和1,25(OH)_2VD3誘導(dǎo)2天后貼壁生長、體積逐漸變大并呈梭形、多角形等不同形態(tài)。TRAP染色顯示:空白組呈陰性,8天后誘導(dǎo)組出現(xiàn)陽性,實(shí)驗(yàn)組也可見陽性著色細(xì)胞,但數(shù)量顯著減少(P0.05)。2.Real-time PCR結(jié)果顯示:誘導(dǎo)組的MMP-9,TRAP,CTSK,RANK的mRNA水平較空白組2~(-ΔCT)值分別增加1.26、21.78、1.74、1.60倍(P值均0.05);誘導(dǎo)組MMP-9,TRAP,CTSK,RANK的mRNA水平較實(shí)驗(yàn)組2~(-ΔCT)值依次增高0.25、2.50、0.64、0.10倍(除RANK外P值均0.05)。3.CTSK和TRAP蛋白質(zhì)水平與其m RNA表達(dá)量的組間對比結(jié)果一致:誘導(dǎo)組細(xì)胞培養(yǎng)液的CTSK和TRAP的濃度平均較空白組高2.72倍和2.37倍(P值均0.05);誘導(dǎo)組細(xì)胞培養(yǎng)液的CTSK和TRAP的濃度平均較實(shí)驗(yàn)組高0.74倍和0.29倍(P值均0.05)。結(jié)論:本研究證實(shí)CTLA-4-Ig在無T細(xì)胞存在情況下能直接抑制U937細(xì)胞的破骨細(xì)胞成模,為我們確定破骨細(xì)胞前體細(xì)胞上的CTLA-4-Ig受體分子,并為進(jìn)一步進(jìn)行藥物加速牙移動(dòng)促進(jìn)牙槽骨改建的研究奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

誘導(dǎo)組U937細(xì)胞接種誘導(dǎo)過程形態(tài)學(xué)變化觀測（200×）

1 誘導(dǎo)組 U937 細(xì)胞接種誘導(dǎo)過程形態(tài)學(xué)變化觀測（200×he U937 cells morphological changes in the induction group長良好的 U937 細(xì)胞初始形態(tài)，細(xì)胞小而略不規(guī)則圓，一長細(xì)胞生長情況記錄，，體積逐漸變大并呈梭形、多角形等不以不同形態(tài)為主；D 為誘導(dǎo)第 8 天結(jié)束細(xì)胞形態(tài)記錄，仍可較多的大而圓的巨細(xì)胞。 對誘導(dǎo)組進(jìn)行染色鑒定，如圖 2 所示。
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R783.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2677875