【摘要】：目的：增生性瘢痕組織的形成是創(chuàng)口愈合過(guò)程中不可避免的,并且產(chǎn)生了很多不良的影響。尤其在口腔頜面外科許多唇腭裂的患兒做完修復(fù)手術(shù)后常常需要做二期手術(shù)來(lái)進(jìn)一步改善面容,在傷口愈合過(guò)程中形成的瘢痕會(huì)影響他們的美觀和功能,進(jìn)而影響患者的心理。傷口愈合過(guò)程中受到多種因素的影響,牽張力、成纖維細(xì)胞和平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)是傷口愈合不可缺少的三個(gè)要素。但是牽張力的存在促進(jìn)了傷口過(guò)度愈合形成增生性瘢痕。在此過(guò)程中,牽張力如何被細(xì)胞感受并傳遞至細(xì)胞內(nèi)環(huán)境,從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生一系列生物學(xué)效應(yīng)的確切機(jī)制尚不十分清楚。細(xì)胞力學(xué)是組織工程和細(xì)胞工程的基礎(chǔ)之一,隨著細(xì)胞力學(xué)的發(fā)展,常常要研究機(jī)械力對(duì)緗胞形態(tài)變化、生長(zhǎng)和分化的影響。本研究擬在成功構(gòu)建瘢痕成纖維細(xì)胞體外原代培養(yǎng)-力學(xué)刺激模型的基礎(chǔ)上,探討p38MAPK在張應(yīng)力介導(dǎo)的瘢痕成纖維細(xì)胞分化中的作用及調(diào)控機(jī)制,從而闡明機(jī)械應(yīng)力作用下瘢痕成纖維細(xì)胞改建的分子調(diào)控機(jī)制,這將幫助口腔頜面外科臨床醫(yī)生采用不同的方法誘導(dǎo)或者調(diào)控瘢痕形成,具有重要的指導(dǎo)意義。 方法：增生性瘢痕成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)體系的建立與細(xì)胞培養(yǎng)：取唇腭裂患者二期修復(fù)術(shù)切下的瘢痕組織,應(yīng)用機(jī)械分離-酶消化聯(lián)合法對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞進(jìn)行原代體外培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)及波形蛋白染色進(jìn)行瘢痕成纖維細(xì)胞表型鑒定。以體外原代培養(yǎng)的瘢痕成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象,通過(guò)成功構(gòu)建瘢痕成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)-力學(xué)刺激模型,使用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng),對(duì)待測(cè)細(xì)胞持續(xù)加載0h、6h、12h的周期性張應(yīng)力,其中力值為10%的細(xì)胞形變,頻率為10cycles/min,加力()h組為對(duì)照組,使用相差顯微鏡從形態(tài)學(xué)上觀察不同持續(xù)時(shí)間的張應(yīng)力對(duì)成纖維細(xì)胞的影響,通過(guò)p38MAPK表達(dá)的量來(lái)檢查不同組之間p38MAPK的表達(dá),通過(guò)RT-PCR檢測(cè)周期性張應(yīng)力下不同組之間a-SMA mRNA和TGF-β1mRNA表達(dá)的變化,通過(guò)Western blot檢測(cè)周期性張應(yīng)力下不同組之間a-SMA、 TGF-β1和P38MAPK蛋白的表達(dá)變化,然后應(yīng)用p38MAPK特異性的抑制劑SB203580來(lái)明確p38MAPK在應(yīng)力介導(dǎo)的成纖維細(xì)胞分化中的作用。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1.采用機(jī)械分離-酶消化聯(lián)合法瘢痕成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,經(jīng)過(guò)倒置顯微鏡觀察及波形蛋白染色鑒定,確認(rèn)分離培養(yǎng)的細(xì)胞符合成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特征; 2.p38MAPK表達(dá)量的結(jié)果顯示，，,隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),p38MAPK的表達(dá)逐漸升高,RT-PCR結(jié)果顯示,隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),a-SMA mRNA和TGF-β1mRNA的表達(dá)量也逐漸升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； 3.Western blot結(jié)果顯示,隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),a-SMA、TGF-β1和p38MAPK的蛋白表達(dá)逐漸升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； 4.各組加入p38MAPK特異性阻斷劑后再對(duì)細(xì)胞施加周期性張應(yīng)力。成纖維細(xì)胞分化以及a-SMA的蛋白表達(dá)減少,隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),a-SMA、TGF-β1和p38MAPK的表達(dá)量也升高但是較不加抑制劑SB203580相比表達(dá)減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； 結(jié)論： 1.應(yīng)力介導(dǎo)的瘢痕成纖維細(xì)胞分化參與了增生性瘢痕形成過(guò)程中成纖維細(xì)胞分化的改建。 2. p38MAPK在這一過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R782.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2677717