目的:本研究通過提取非綜合征性唇腭裂患者及正常人的血漿外泌體,并對外泌體的濃度進行測量分析,探討血漿中外泌體濃度與唇腭裂發(fā)生之間的關系。進一步抽提外泌體中miRNA,運用miRNA測序篩選出非綜合征性唇腭裂患兒血漿外泌體中異常表達的miRNA,并進行生物信息學分析,預測其參與的生物學過程及信號通路。方法:收集8例非綜合征性唇腭裂患兒以及性別年齡與之相匹配的8名健康兒童的外周血10ml,通過離心分離血漿,利用QIAGEN exoEasy Maxi Kit試劑盒,使用超濾法提取血漿中的外泌體;在透射電鏡下觀察外泌體的形態(tài)、測量其大小,并計數(shù),BCA法測定外泌體蛋白濃度,并進行統(tǒng)計學分析。另采用Trizol法提取外泌體中的miRNA,構建miRNA文庫,用Agilent2100 miRNA微陣列芯片分析,篩選顯著差異表達的miRNA,預測其相應的靶基因,并進行GO富集分析和KEGG通路富集分析。結果:第一部分:本研究成功從16例血漿樣本中分離外泌體,透射電鏡下觀察到30-100nm大小不一的囊泡狀結構,符合外泌體的電鏡表現(xiàn),在透射電鏡相鄰的四個視野下,測得外泌體總數(shù)量47,最小直徑為40nm,...

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.外泌體分離流程

圖1.外泌體分離流程定——電鏡觀察樣品10μl加于200目銅網上沉淀10分鐘，濾紙吸去浮鈾10μl滴加于銅網上沉淀1分鐘，濾紙吸去浮液；分鐘；成像。度測定方法和工作液的制備制備要求制作一組蛋白質標準品表1.系列稀釋牛血清白蛋白（BSA）標準品稀釋液體積....

圖2.標準曲線

所有EP管冷卻至室溫。.4蛋白濃度測定。利用BCA蛋白定量法對外泌體的濃度進行測定[16]。在Nanodrop2100BCA測定，參照標準曲線（圖2），讀取各樣品的蛋白濃度。

圖3.1透射電鏡下外泌體形態(tài)觀察

符合外泌體的電鏡表現(xiàn)，且可觀察到其典型的茶托狀形態(tài)（圖3.1）。圖3.1透射電鏡下外泌體形態(tài)觀察2.2AutomatedCapillaryWesternBlot結果檢測外泌體標記蛋白TGS101、CD81的表達情況，見圖3.2，非綜合征性唇腭裂患者和正常對照者的....

圖3.2外泌體WES膠圖A：正常對照者B：NSCL/P患者

WesternBlot結果白TGS101、CD81的表達情況，見圖3外泌體中均表達TSG101和CD81。

本文編號：4005712