發(fā)布時間：2020-05-21 21:23

【摘要】： 目的:腭裂(cleft of palate)是一種常見的先天發(fā)育畸形,在顱頜面畸形中占絕大部分。它的發(fā)生給患者及家屬的生活和心理帶來了較大的影響。目前,已有學者就腭裂發(fā)生機制做出了較多的基礎(chǔ)及臨床方面的研究,并取得了一定的成就。但它是一種多基因遺傳病,目前其發(fā)病機制仍不甚明確。腭裂發(fā)病機制的研究可以為腭裂的預防和產(chǎn)前診斷提供廣闊的前景。 維甲酸(retinoic acid ,RA)在生物體的胚胎發(fā)育、器官形成、細胞分化和維持正常的生理穩(wěn)態(tài)中起重要作用。在胚胎發(fā)育過程中,內(nèi)源性維甲酸與正常的生長發(fā)育密切相關(guān)。過量的維甲酸有明顯的毒副作用,可以使基因錯誤表達從而導致胚胎的異常發(fā)育,誘導組織器官畸形形成。維甲酸信號的功能最終是通過基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控來實現(xiàn)的,如生長因子、細胞因子及其受體、激素、轉(zhuǎn)錄因子、激酶及磷酸酶、細胞內(nèi)酶和效應因子等,都受維甲酸的調(diào)節(jié)。近年來國外學者對維甲酸( retinoic acid ,RA)調(diào)控基因表達與其誘導腭裂形成的關(guān)系進行了研究,但RA誘導腭裂畸形的機制仍不明確。 轉(zhuǎn)化生長因子β超家族(transforming growth factorβ,TGFβ)是一類具有多種生物學活性的細胞因子,在多方面參與胚胎發(fā)育,它對不同類型的細胞既可以促進其增殖、生長分化,也可以抑制細胞的生長,是一種細胞生長的雙向調(diào)節(jié)因子。近來有學者通過先提取樣本的DNA ,選擇特定基因標記引物進行PCR擴增,然后檢測PCR擴增產(chǎn)物。篩選出TGFβ可能為腭裂發(fā)生的易感基因。因此,本實驗預通過維甲酸建立C57BL/6J系小鼠腭裂模型,在此基礎(chǔ)上通過免疫組化來檢測TGFβ1和TGFβ3在維甲酸誘導腭裂以及正常C57BL/6J系小鼠腭部表達的時空變化,為進一步研究做準備。 方法:選10周齡左右,雄性體重在25克以上,雌性體重在20克以上的C57BL/6J小鼠。于第一日晚5時按雌雄比例2:1合籠,次日早8點檢查陰栓情況,陽性者記為妊娠0天(gestation 0day,GD0)。共得孕鼠(10)只,將所得孕鼠隨機分成兩組:第一組為實驗組,共(5)只;第二對照組為組,共(5)只。實驗組孕鼠在GD10上午10時按照0.01ml/g體重灌注10mg/ml的維甲酸植物油溶液,對照組小鼠按0.01ml/g體重灌注植物油。實驗組與對照組分別于GD14、GD15、GD16 3個時間點處死實驗小鼠取出胚胎。取胚胎鼠頭固定、包埋后切片,進行免疫組化檢測TGFβ1和TGFβ3在各時間點于小鼠腭部的表達情況。由此,得出TGFβ1和TGFβ3在維甲酸誘導腭裂小鼠以及正常小鼠腭突中的表達情況。 結(jié)果: 1維甲酸給藥組與對照組間充質(zhì)中TGFβ3的表達隨著胚胎的發(fā)育都有所降低,GD14、GD16維甲酸給藥組與對照組間充質(zhì)中TGFβ3的表達相同, GD15給藥組TGFβ3的表達偏高;給藥組與對照組早期(GD14,GD15) TGFβ1的表達較為一致,隨著胚胎的發(fā)育有所升高,然而在發(fā)育后期(GD16)TGFβ1在實驗組腭突中的表達較對照組偏高。 2維甲酸給藥組中嵴上皮中的TGFβ3一直處于高表達狀態(tài),而對照組中嵴上皮中TGFβ3的表達隨胚胎的發(fā)育逐漸降低;給藥組中嵴上皮中TGFβ1的表達隨胚胎的發(fā)育明顯升高,對照組中嵴上皮中TGFβ1的表達則是先升高而后降低。 3維甲酸給藥組與對照組鼻腔側(cè)上皮中TGFβ3的表達在GD14相同,GD15給藥組比對照組高,GD16則對照組稍高;維甲酸給藥組與對照組鼻腔側(cè)上皮中TGFβ1的表達在GD14時相同,GD15給藥組比對照組偏低,GD16實驗組TGFβ1表達明顯低于對照組。 結(jié)論: 1、實驗組TGFβ3在發(fā)育早期(GD14,GD15)間充質(zhì)中的表達偏高,TGFβ1的表達偏低,說明TGFβ1和TGFβ3可能通過抑制間充質(zhì)細胞的增殖,影響腭突的上抬,誘發(fā)腭裂。 2、實驗組中嵴上皮中TGFβ3始終處于高水平表達,可能使中嵴上皮向口腔側(cè)上皮異常分化;晚期(GD16)TGFβ1的高水平表達,也可能促進中嵴上皮的異常分化�？赏茰yTGFβ1和TGFβ3可能誘導中嵴上皮的異常分化,誘發(fā)腭裂。 3、GD15時,實驗組鼻腔側(cè)上皮TGFβ3表達偏高,TGFβ1的表達減弱,可能誘導鼻腔側(cè)上皮異常分化�？赏茰yTGFβ1和TGFβ3可能使鼻腔側(cè)上皮異常分化,不能與鼻中隔接觸融合,誘發(fā)腭裂。
【圖文】：

圖 C\D\E 分別為實驗組 GD14\GD15 \GD16 ×100 TGFβ1 表達情況（箭頭示為口腔側(cè)上皮）。圖 F\G\H 分別為對照組 GD14\GD15 \GD16 ×100 TGFβ1 表達情況（箭頭示為口腔側(cè)上皮）
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R782.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前8條

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本文編號：2674924