發(fā)布時(shí)間：2020-05-21 21:23

【摘要】： 目的:腭裂(cleft of palate)是一種常見的先天發(fā)育畸形,在顱頜面畸形中占絕大部分。它的發(fā)生給患者及家屬的生活和心理帶來(lái)了較大的影響。目前,已有學(xué)者就腭裂發(fā)生機(jī)制做出了較多的基礎(chǔ)及臨床方面的研究,并取得了一定的成就。但它是一種多基因遺傳病,目前其發(fā)病機(jī)制仍不甚明確。腭裂發(fā)病機(jī)制的研究可以為腭裂的預(yù)防和產(chǎn)前診斷提供廣闊的前景。 維甲酸(retinoic acid ,RA)在生物體的胚胎發(fā)育、器官形成、細(xì)胞分化和維持正常的生理穩(wěn)態(tài)中起重要作用。在胚胎發(fā)育過(guò)程中,內(nèi)源性維甲酸與正常的生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)。過(guò)量的維甲酸有明顯的毒副作用,可以使基因錯(cuò)誤表達(dá)從而導(dǎo)致胚胎的異常發(fā)育,誘導(dǎo)組織器官畸形形成。維甲酸信號(hào)的功能最終是通過(guò)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控來(lái)實(shí)現(xiàn)的,如生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子及其受體、激素、轉(zhuǎn)錄因子、激酶及磷酸酶、細(xì)胞內(nèi)酶和效應(yīng)因子等,都受維甲酸的調(diào)節(jié)。近年來(lái)國(guó)外學(xué)者對(duì)維甲酸( retinoic acid ,RA)調(diào)控基因表達(dá)與其誘導(dǎo)腭裂形成的關(guān)系進(jìn)行了研究,但RA誘導(dǎo)腭裂畸形的機(jī)制仍不明確。 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β超家族(transforming growth factorβ,TGFβ)是一類具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子,在多方面參與胚胎發(fā)育,它對(duì)不同類型的細(xì)胞既可以促進(jìn)其增殖、生長(zhǎng)分化,也可以抑制細(xì)胞的生長(zhǎng),是一種細(xì)胞生長(zhǎng)的雙向調(diào)節(jié)因子。近來(lái)有學(xué)者通過(guò)先提取樣本的DNA ,選擇特定基因標(biāo)記引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,然后檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。篩選出TGFβ可能為腭裂發(fā)生的易感基因。因此,本實(shí)驗(yàn)預(yù)通過(guò)維甲酸建立C57BL/6J系小鼠腭裂模型,在此基礎(chǔ)上通過(guò)免疫組化來(lái)檢測(cè)TGFβ1和TGFβ3在維甲酸誘導(dǎo)腭裂以及正常C57BL/6J系小鼠腭部表達(dá)的時(shí)空變化,為進(jìn)一步研究做準(zhǔn)備。 方法:選10周齡左右,雄性體重在25克以上,雌性體重在20克以上的C57BL/6J小鼠。于第一日晚5時(shí)按雌雄比例2:1合籠,次日早8點(diǎn)檢查陰栓情況,陽(yáng)性者記為妊娠0天(gestation 0day,GD0)。共得孕鼠(10)只,將所得孕鼠隨機(jī)分成兩組:第一組為實(shí)驗(yàn)組,共(5)只;第二對(duì)照組為組,共(5)只。實(shí)驗(yàn)組孕鼠在GD10上午10時(shí)按照0.01ml/g體重灌注10mg/ml的維甲酸植物油溶液,對(duì)照組小鼠按0.01ml/g體重灌注植物油。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組分別于GD14、GD15、GD16 3個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死實(shí)驗(yàn)小鼠取出胚胎。取胚胎鼠頭固定、包埋后切片,進(jìn)行免疫組化檢測(cè)TGFβ1和TGFβ3在各時(shí)間點(diǎn)于小鼠腭部的表達(dá)情況。由此,得出TGFβ1和TGFβ3在維甲酸誘導(dǎo)腭裂小鼠以及正常小鼠腭突中的表達(dá)情況。 結(jié)果: 1維甲酸給藥組與對(duì)照組間充質(zhì)中TGFβ3的表達(dá)隨著胚胎的發(fā)育都有所降低,GD14、GD16維甲酸給藥組與對(duì)照組間充質(zhì)中TGFβ3的表達(dá)相同, GD15給藥組TGFβ3的表達(dá)偏高;給藥組與對(duì)照組早期(GD14,GD15) TGFβ1的表達(dá)較為一致,隨著胚胎的發(fā)育有所升高,然而在發(fā)育后期(GD16)TGFβ1在實(shí)驗(yàn)組腭突中的表達(dá)較對(duì)照組偏高。 2維甲酸給藥組中嵴上皮中的TGFβ3一直處于高表達(dá)狀態(tài),而對(duì)照組中嵴上皮中TGFβ3的表達(dá)隨胚胎的發(fā)育逐漸降低;給藥組中嵴上皮中TGFβ1的表達(dá)隨胚胎的發(fā)育明顯升高,對(duì)照組中嵴上皮中TGFβ1的表達(dá)則是先升高而后降低。 3維甲酸給藥組與對(duì)照組鼻腔側(cè)上皮中TGFβ3的表達(dá)在GD14相同,GD15給藥組比對(duì)照組高,GD16則對(duì)照組稍高;維甲酸給藥組與對(duì)照組鼻腔側(cè)上皮中TGFβ1的表達(dá)在GD14時(shí)相同,GD15給藥組比對(duì)照組偏低,GD16實(shí)驗(yàn)組TGFβ1表達(dá)明顯低于對(duì)照組。 結(jié)論: 1、實(shí)驗(yàn)組TGFβ3在發(fā)育早期(GD14,GD15)間充質(zhì)中的表達(dá)偏高,TGFβ1的表達(dá)偏低,說(shuō)明TGFβ1和TGFβ3可能通過(guò)抑制間充質(zhì)細(xì)胞的增殖,影響腭突的上抬,誘發(fā)腭裂。 2、實(shí)驗(yàn)組中嵴上皮中TGFβ3始終處于高水平表達(dá),可能使中嵴上皮向口腔側(cè)上皮異常分化;晚期(GD16)TGFβ1的高水平表達(dá),也可能促進(jìn)中嵴上皮的異常分化。可推測(cè)TGFβ1和TGFβ3可能誘導(dǎo)中嵴上皮的異常分化,誘發(fā)腭裂。 3、GD15時(shí),實(shí)驗(yàn)組鼻腔側(cè)上皮TGFβ3表達(dá)偏高,TGFβ1的表達(dá)減弱,可能誘導(dǎo)鼻腔側(cè)上皮異常分化。可推測(cè)TGFβ1和TGFβ3可能使鼻腔側(cè)上皮異常分化,不能與鼻中隔接觸融合,誘發(fā)腭裂。
【圖文】：

圖 C\D\E 分別為實(shí)驗(yàn)組 GD14\GD15 \GD16 ×100 TGFβ1 表達(dá)情況（箭頭示為口腔側(cè)上皮）。圖 F\G\H 分別為對(duì)照組 GD14\GD15 \GD16 ×100 TGFβ1 表達(dá)情況（箭頭示為口腔側(cè)上皮）
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R782.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2674924