【摘要】：背景與目的 口腔黏膜下纖維性變(oral submucous fibrosis, OSF)是發(fā)生于口腔黏膜的一種慢性、隱匿性疾病,其發(fā)病與咀嚼檳榔習(xí)慣關(guān)系密切,已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織定義為癌前狀態(tài)。與其他纖維化疾病一樣,OSF目前尚無(wú)特效的治療方法。同時(shí)合適動(dòng)物模型的缺乏已經(jīng)制約了對(duì)其具體病因、發(fā)病機(jī)制及治療方法的進(jìn)一步研究。 姜黃素是中藥姜黃的主要活性成分,已有報(bào)道稱其具有較好的抗纖維化的作用。本研究擬通過(guò)局部注射博來(lái)霉素(Bleomycin, BLM)制備出重復(fù)性較好的OSF動(dòng)物模型,然后在此基礎(chǔ)上結(jié)合體外實(shí)驗(yàn)探討姜黃素用于治療OSF的可行性及作用機(jī)理。 方法 首先,進(jìn)行動(dòng)物模型的制備。SD大鼠100只,隨機(jī)分為正常組、對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組大鼠在異氟烷的麻醉狀態(tài)下,于雙側(cè)頰黏膜下注射BLM稀釋液,每天一次,共持續(xù)八周。對(duì)照組采用磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Saline, PBS)代替BLM稀釋液。正常組不給任何干預(yù)。在規(guī)定時(shí)間處死大鼠后,采用HE染色、masson染色、羥脯氨酸堿水解法、免疫組化、western blotting及透射電鏡分別檢測(cè)各組大鼠頰黏膜組織病理、膠原水平、肌成纖維細(xì)胞(myofibroblast, MFB)、TGF-β1、IFN-γ及超微結(jié)構(gòu)的變化情況。 然后,SD大鼠35只,隨機(jī)分為正常組、對(duì)照組、低劑量姜黃素組和高劑量姜黃素組。正常組大鼠不給予任何干預(yù)。其余大鼠在頰黏膜局部注射BLM4周后,采用不同劑量的姜黃素模型大鼠進(jìn)行灌胃4周。大鼠處死后,采用HE染色、免疫組化和western blotting觀察其頰黏膜組織病理、MFB、膠原水平、TGF-β1、 IFN-y和IL-13的表達(dá)水平。 最后,采用體外細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法,培養(yǎng)人正常頰黏膜成纖維細(xì)胞(fibroblast, FB),并利用TGF-β1將其誘導(dǎo)成為MFB表型。不同濃度姜黃素干預(yù)后,利用MTT、流式細(xì)胞術(shù)、western blotting及ELISA分別觀察細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、凋亡、相關(guān)凋亡蛋白及上清液中Ⅰ、Ⅲ型膠原的改變。 結(jié)果 1、SD大鼠頰黏膜局部注射1mg/ml的BLM8周可以誘導(dǎo)出臨床和病理上與人OSF相似的改變； 2、較高劑量姜黃素可以降低BLM局部注射4周(病理改變接近人OSF早、中期)的SD大鼠頰黏膜組織中TGF-β1和IL-13的表達(dá),提高IFN-y的表達(dá),減少M(fèi)FB；但對(duì)Ⅰ、Ⅲ型膠原的改變不明顯； 3、2.5-40μM的姜黃素可以抑制體外培養(yǎng)的FB和MFB增殖,且對(duì)MFB的抑制作用更加明顯,并且將MFB阻滯在G0/G1期。10-40μM的姜黃素可以誘導(dǎo)MFB凋亡,提高Bax蛋白的表達(dá),降低Bcl-2蛋白的表達(dá),降低其上清液中Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達(dá)水平。 結(jié)論 1、SD大鼠頰黏膜局部注射1mg/ml的BLM8周可以制備出類似人OSF病變的實(shí)驗(yàn)性O(shè)SF大鼠模型；該模型制作快捷,重復(fù)性好,但仍然存在一定的局限性。 2、姜黃素可以改善lmg/ml BLM頰黏膜局部注射4周的(病理改變接近人OSF早、中期)SD大鼠的張口度,降低主要致纖維化細(xì)胞因子TGF-β1的表達(dá),阻止纖維化的進(jìn)一步發(fā)展； 3、在體外姜黃素可以通過(guò)抑制MFB增殖,促進(jìn)其凋亡,減少Ⅰ、Ⅲ型膠原生成,發(fā)揮抗纖維化作用。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R285.5;R781.5
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本文編號(hào)：2674379