【摘要】：口腔微生態(tài)在齲病的發(fā)病過程中起著至關(guān)重要的作用。但是目前基于口腔齲病微生態(tài)的測(cè)序研究通常局限于屬水平。本研究利用Pacbio單分子測(cè)序技術(shù),揭示了 口腔齲病微生態(tài)精確到種水平以上的菌群特征。篩選出了在齲病的發(fā)病過程中重要的可疑致齲細(xì)菌,通過體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了其黏附和產(chǎn)酸作用。通過單細(xì)菌全基因組測(cè)序,揭示了該細(xì)菌的全基因組序列,預(yù)測(cè)了其致齲機(jī)制及相關(guān)基因。方法:采集健康人群和齲病人群的口腔唾液,提取全基因組DNA后采用Pacbio單分子測(cè)序技術(shù)對(duì)16S rRNA基因的全長進(jìn)行測(cè)序,分析微生態(tài)菌群結(jié)構(gòu)。加入齲病易感人群進(jìn)行對(duì)照,篩選出新的可疑致齲菌。選擇體外驗(yàn)證具有致齲能力的細(xì)菌,提取基因組DNA,利用illumina Hiseq測(cè)序技術(shù)進(jìn)行全基因組測(cè)序,并進(jìn)行編碼基因的篩選和功能注釋。結(jié)果:1齲病人群口腔微生態(tài)齲病人群之間口腔微生態(tài)菌群結(jié)構(gòu)差異較健康人群更大。齲病人群口腔微生態(tài)的優(yōu)勢(shì)菌門是厚壁菌門,優(yōu)勢(shì)菌屬有:乳桿菌屬,艱難桿菌屬,戴阿利斯特桿菌屬等,優(yōu)勢(shì)菌種有非典型韋榮菌,變異鏈球菌,表兄鏈球菌,變黑普雷沃菌,發(fā)酵乳桿菌等。通過加入齲病易感人群進(jìn)行分析,Prevotella histicola,Veillonella denticariosi,Filifactor alocis等菌種的豐度在齲病易感人群中升高。2可疑致齲菌體外致齲能力驗(yàn)證Prevotella histicola在體外實(shí)驗(yàn)中展現(xiàn)出較強(qiáng)的黏附、產(chǎn)酸能力。在菌液中加入牙釉質(zhì)片培養(yǎng),在1,3,5,7天后,釉質(zhì)表面被脫礦,顯微硬度下降,形貌發(fā)生改變。3 Prevotella histicola全基因組測(cè)序通過全基因組測(cè)序,測(cè)得編碼基因2334個(gè)。通過基因注釋,預(yù)測(cè)Prevotella histicola通過發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)生醋酸以及乳酸,黏附作用依靠細(xì)胞表面的脂多糖、莢膜等結(jié)構(gòu),并具有較為活躍的密度感應(yīng)系統(tǒng)。結(jié)論:1齲病人群和健康人群的口腔微生態(tài)存在巨大差異,齲病易感人群的口腔微生態(tài)介于二者之間,結(jié)果提示Prevotella histicola,Veillonella denticariosi,Filifactor alocis等菌種在齲病的早期發(fā)生過程起到重要作用。2細(xì)菌Prevotella histicola具有較強(qiáng)的致齲潛能。3測(cè)序獲得Prevotella histicola細(xì)菌的全基因組圖譜以及功能基因注釋。
【圖文】：

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文邐第一部分研究結(jié)果逡逑３．研究結(jié)果逡逑３．１研究人群逡逑由表１－１可知，健康人群中有５位在６月以后的回訪過程中發(fā)現(xiàn)新發(fā)了齲病，逡逑這五位受試人群為：Ｈ３，邋Ｈ４，邋Ｈ８，邋Ｈ１４，Ｈ１７。因?yàn)槲覀儾蓸拥臅r(shí)間在他們發(fā)生逡逑齲病以前，故我們無法將其歸為齲病組，我們將這些人群稱為齲病易感人群。逡逑３．２測(cè)序前樣本ＰＣＲ擴(kuò)增逡逑４１個(gè)樣本的ｐｅｒ擴(kuò)增電泳圖見圖１－１。電泳后條帶單一，，條帶清晰，無拖尾，逡逑無雜帶，條帶大小正確。逡逑

第一部分研究結(jié)果逡逑３．３樣本有效數(shù)據(jù)量統(tǒng)計(jì)、長度分布、ＯＴＵ數(shù)量統(tǒng)計(jì)逡逑本次測(cè)序得到的有效數(shù)據(jù)量的數(shù)量以及長度分布見表１－３，以及圖１－２。其中逡逑需要注意的是，有效序列需要滿足：長度在１０００－２０００ｂｐ之間。如圖可見，測(cè)序的逡逑序列的長度基本都在１４０１－１６００ｂｐ的長度范圍內(nèi)，與引物的區(qū)域是符合的。逡逑每一個(gè)樣本所測(cè)得的序列數(shù)量以及ＯＴＵ的數(shù)量見表１－４以及圖１－３。其中ＯＴＵ逡逑的分類標(biāo)準(zhǔn)如方法中所述，以９７％為標(biāo)準(zhǔn)分類。由結(jié)果可知，ＯＴＵ的分布比較平逡逑均。齲病組檢測(cè)到的ＯＴＵ數(shù)量略高于健康人群。逡逑表１－３測(cè)序所得到的數(shù)據(jù)量統(tǒng)計(jì)及長度分布逡逑測(cè)序范圍邋樣本數(shù)量邋序列數(shù)量邋堿基個(gè)數(shù)（ｂｐ）邋平均長度（ｂｐ）逡逑２７Ｆ－１４９２Ｒ邐４１邐７０２３０４邐１０２９６５２８０８邐１５３４邐＾逡逑表１－４序列數(shù)量以及ＯＴＵ數(shù)量在樣本中的分布逡逑樣本ＩＤ邋序列數(shù)
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R788.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王金華,林居紅;變形鏈球菌的致齲性及鑒別的研究進(jìn)展[J];口腔醫(yī)學(xué);2004年04期

2 周學(xué)東,岳松齡,邱靜,吳良行;致齲菌混合培養(yǎng)pH變化與時(shí)間的關(guān)系[J];華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1988年02期

3 周學(xué)東,岳松齡,吳良行,鄭光靜;致齲菌混合培養(yǎng)產(chǎn)細(xì)胞外多糖的分析[J];華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1988年04期

4 劉正;;主要致齲菌的分離和培養(yǎng)[J];口腔醫(yī)學(xué)縱橫;1988年02期

5 曾欣;夏文薇;;鼠在致齲模型中的應(yīng)用[J];全科口腔醫(yī)學(xué)電子雜志;2016年15期

6 吉?jiǎng)e克·烏拉兒汗;趙今;;低齡嬰幼兒齲相關(guān)致齲微生物研究進(jìn)展[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2014年02期

7 周建業(yè);張金婷;肖云;車團(tuán)結(jié);何祥一;;老年人齲壞組織中變形鏈球菌和乳酸桿菌的致齲特點(diǎn)[J];中國老年學(xué)雜志;2009年10期

8 肖悅,劉天佳,詹玲,周學(xué)東;茶多酚影響致齲菌在膠原粘附的研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2000年05期

9 周學(xué)東;岳松齡;楊澤蓉;;糖類型對(duì)混合致齲菌產(chǎn)酸影響的研究[J];口腔醫(yī)學(xué)縱橫;1990年01期

10 肖悅,劉天佳,詹玲,周學(xué)東;茶多酚影響致齲菌在唾液獲得性膜粘附的研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2000年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 于倩;林靜;祖力卡爾江·阿合買提;趙今;;伊犁黑蜂蜂膠對(duì)口腔主要致齲細(xì)菌生物膜作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];2014年第九次全國牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

2 皮根莉;周智;;糖源對(duì)變形鏈球菌產(chǎn)酸致齲的影響研究[A];全國第三次牙體牙髓病學(xué)臨床技術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

3 張旭;張敏;;茶多酚凝膠對(duì)口腔致齲細(xì)菌生物膜的形成抑制和清除作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華口腔醫(yī)學(xué)會(huì)口腔材料學(xué)專業(yè)委員會(huì)第七次全國口腔材料學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2011年

4 關(guān)曉旭;;殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌致齲能力的影響[A];2014年第九次全國牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

5 王傳勇;蔣麗;李偉;;酸蝕牙釉質(zhì)對(duì)常見致齲菌粘附力的影響[A];第八屆全國口腔材料學(xué)術(shù)交流會(huì)暨中華口腔醫(yī)學(xué)會(huì)口腔材料專業(yè)委員會(huì)2013年會(huì)論文集[C];2013年

6 冬梅;阮梅生;景娟;陳延梅;;8種唾液蛋白對(duì)致齲細(xì)菌附著的影響[A];全國第四次牙體牙髓病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1995年

7 馬瑞;姜云濤;姜葳;梁景平;;不同齲敏感者變形鏈球菌臨床分離株的致齲特性研究[A];2007年第七次全國牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

8 黃梅靖;邊專;;變形鏈球菌致齲毒力因子蛋白分泌機(jī)制的研究[A];2007年第七次全國牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

9 梁景平;姜云濤;李超倫;姜葳;;實(shí)時(shí)PCR技術(shù)在齲易感兒童牙菌斑致齲菌定量檢測(cè)中的應(yīng)用[A];2007年第七次全國牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

10 馮瑾;李繼遙;周學(xué)東;;厚樸活性成分對(duì)致齲菌生長和產(chǎn)酸影響的研究[A];2007年第七次全國牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 李劍農(nóng);酸甜飲料毀牙沒商量[N];健康報(bào);2006年

2 曉康;酸甜飲料易毀牙[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2006年

3 陸偉;口香糖嚼多久最合適[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2007年

4 圣晶;牙好，身體就好[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

5 上海市口腔醫(yī)學(xué)研究所 教授 馮希平 楊蕓珠;治療“蛀牙”新技術(shù)[N];家庭醫(yī)生報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 汪颯;齲病兒童口腔微生態(tài)：宏觀菌群結(jié)構(gòu)分析及微觀致齲細(xì)菌功能研究[D];浙江大學(xué);2019年

2 劉佼佼;不同致齲性變形鏈球菌臨床分離株差異ssDNA配基的篩選和鑒定[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

3 丁永林;Bac8c對(duì)口腔主要致齲菌抗菌敏感性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

4 陶睿;Pleurocidin及其優(yōu)化多肽抑制常見致齲菌的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

5 蘇凌云;致齲鏈球菌粘附、增殖相關(guān)基因的克隆、原核表達(dá)及功能初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

6 閆文娟;c-di-GMP信號(hào)通路在變形鏈球菌致齲過程中作用的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

7 毛甜甜;基因工程改性變異鏈球菌替代療法防齲研究[D];武漢大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 曾欣;高果糖玉米糖漿與其他糖類交互致齲實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立[D];上海交通大學(xué);2017年

2 崔偉;差異致齲性變形鏈球菌臨床分離株細(xì)胞外比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

3 蘇東華;不同致齲性變形鏈球菌臨床分離株的篩選和鑒定[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

4 方會(huì)清;老年人高齲患者牙菌斑中變形鏈球菌臨床分離株致齲性的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

5 褚昊月;不同齲敏感兒童牙菌斑相關(guān)致齲微生物的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)及群落分析[D];山東大學(xué);2015年

6 朱敏;致齲菌中耐酸相關(guān)基因ffh的檢測(cè)及克隆[D];吉林大學(xué);2004年

7 茹菲亞·祖拉提;兩種粘結(jié)劑對(duì)烤瓷冠邊緣致齲菌定植的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

8 李娜;兩種再礦化試劑對(duì)人工致齲液pH值的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

9 武狄聰;牙菌斑生物膜致齲毒力因子和致齲菌在齲病進(jìn)展中的動(dòng)態(tài)變化[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2011年

10 李蘋蘋;國產(chǎn)水溶性蜂膠對(duì)主要致齲菌菌斑生物膜形態(tài)及產(chǎn)酸的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2672844