【摘要】：齲病是一種由口腔中多種因素復(fù)合作用所導(dǎo)致的牙體硬組織進(jìn)行性病損,大量臨床及流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,中國居民各年齡段的患齲率均居高不下。齲病中細(xì)菌因素為主要的致齲因素,變形鏈球菌為主要致齲菌之一。致齲菌在口腔內(nèi)的產(chǎn)酸代謝活動(dòng)是齲病產(chǎn)生的直接原因。因此,有效的干擾致齲菌的生長和代謝,即可達(dá)到預(yù)防控制齲病的目的。針對(duì)目前防齲方法的缺陷,探索一種安全有效的新型防齲方法顯得尤為重要。 光動(dòng)力療法(Photodynamic therapy, PDT)是一種有效的抗微生物療法,其滅活細(xì)菌的作用受到越來越多的關(guān)注,它可有效治療細(xì)菌性疾病而不產(chǎn)生耐藥性,有利于在齲病預(yù)防中的應(yīng)用。國內(nèi)外已有應(yīng)用PDT方法作用于體外游離菌及人工齲口腔生物膜菌斑中變形鏈球菌的研究,取得了良好的殺傷效果。本課題就是通過優(yōu)化、選擇合適的PDT參數(shù),在構(gòu)建的大鼠齲齒模型上探討PDT的防齲作用及安全性。目的： 通過應(yīng)用532nm和630nm的半導(dǎo)體激光器和光敏劑血卟啉單甲醚(Hematoporyrin monomethyl Ether, HMME)對(duì)體外培養(yǎng)的變形鏈球菌(Streptococcus mutans, S.mutans)進(jìn)行光動(dòng)力治療,優(yōu)化光敏劑孵育時(shí)間、濃度,選擇適宜波長的激光器和激光照射參數(shù)；建立大鼠齲齒模型并進(jìn)行光動(dòng)力實(shí)驗(yàn),從而探討不同能量密度的PDT對(duì)大鼠口腔中S.mutans的殺傷作用、對(duì)齲齒的預(yù)防作用以及對(duì)口腔軟組織安全性的影響,為PDT防齲的臨床實(shí)踐提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法： 1.將S.mutans于37℃恒溫培養(yǎng)箱中復(fù)蘇,厭氧培養(yǎng)24h,制備1×108CFU/m1標(biāo)準(zhǔn)菌液待用。 2.應(yīng)用532nm和630nm的半導(dǎo)體激光器和光敏劑HMME對(duì)96孔板內(nèi)的S.mutans菌液進(jìn)行PDT體外實(shí)驗(yàn),根據(jù)平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果,選擇適宜波長的激光器、光敏劑孵育時(shí)間和激光參數(shù),為下一步的大鼠齲齒模型實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。 3.通過在大鼠口腔接種標(biāo)準(zhǔn)S.mutans菌液,并喂以致齲飼料2000#,構(gòu)建大鼠齲齒模型。 4.將56只Wistar大鼠隨機(jī)分成七組：能量密度8.4J/cm2PDT組、能量密度12.6J/cm2pDT組、能量密度16.8J/cm2pDT組和單純光敏劑組、單純激光組、0.2%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))NaF陽性對(duì)照組、0.9%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))生理鹽水陰性對(duì)照組。選擇波長532nm,功率密度140mw/cm2的半導(dǎo)體激光為光源,40μg/ml HMME為光敏劑,按照上述分組進(jìn)行PDT處理,每周進(jìn)行一次,取樣進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù),直至56d實(shí)驗(yàn)結(jié)束。依照平板菌落計(jì)數(shù)法觀察各組對(duì)患齲牙面上S.mutans的殺傷作用；通過Keyes記分觀察齲齒預(yù)防效果；通過組織病理觀察對(duì)大鼠口腔軟組織的影響。 結(jié)果： 1.體外實(shí)驗(yàn)光動(dòng)力照射S.mutans 96孔板的平板菌落計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,本實(shí)驗(yàn)最適合的PDT組合為光敏劑HMME濃度40μg/m1、孵育時(shí)間5min,半導(dǎo)體激光波長532nm、功率密度140mw/cm2。 2.根據(jù)HMME-PDT對(duì)致齲模型中S.mutans殺傷作用的平板菌落計(jì)數(shù)顯示,與0.9%生理鹽水陰性對(duì)照組相比,單純HMME組S.mutans數(shù)量無顯著差異性(P0.05)；單純激光照射組和0.2%NaF陽性對(duì)照組,均能使S.mutans數(shù)量(CFU/ml)減少(P0.05),殺菌率為50.38%、38.93%；而PDT防齲處理各組均可使大鼠致齲模型口腔中S. mutans數(shù)量顯著減少(P0.05),能量密度8.4J/cm2、12.6J/cm2、16.8J/cm2pDT組的殺菌率分別為61.49%、96.91%、97.52%。其中能量密度12.6J/cm2、16.8J/cm2pDT組與能量密度8.4J/cm2pDT組相比殺菌率顯著提高(P0.05),而能量密度12.6J/cm2pDT組與能量密度16.8J/cm2pDT組之間沒有顯著性差異(P0.05)。 3.在體視顯微鏡下對(duì)大鼠磨牙咬合面窩溝齲齒分別進(jìn)行Keyes記分。由Keyes記分結(jié)果可以看出,與0.9%生理鹽水陰性對(duì)照組相比,PDT處理組、NaF組、單純激光組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),單純光敏劑組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各PDT處理組之間相比,隨著能量密度的不斷增加,Keyes記分呈現(xiàn)降低的趨勢(shì),但彼此之間并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4.與空白對(duì)照組比較,各PDT防齲處理組的口腔軟組織樣本,都出現(xiàn)不同程度的改變。能量密度8.4J/cm2pDT組和12.6J/cm2pDT組中頰、舌粘膜充血、水腫現(xiàn)象的例數(shù)均少于16.8J/cm2pDT組；16.8J/cm2pDT組中,煩、舌粘膜充血水腫例數(shù)明顯增多,也出現(xiàn)了少數(shù)輕度炎癥細(xì)胞浸潤現(xiàn)象,偶有牙齦出現(xiàn)充血、角化層變厚現(xiàn)象,與總體樣本數(shù)比較,充血和水腫現(xiàn)象是主要的組織病理反應(yīng)。 結(jié)論： 1.HMME-PDT對(duì)體外S.mutans有明顯的殺傷作用,殺傷效果與光敏劑的孵育時(shí)間、濃度、激光照射時(shí)間和功率密度相關(guān)。 2.HMME-PDT對(duì)大鼠齲齒有明顯的預(yù)防作用,其預(yù)防效果與能量密度關(guān)系密切。 3.不同能量密度的PDT激光照射牙齒,會(huì)造成口腔軟組織不同程度的改變,PDT激光能量密度越大,越容易造成口腔軟組織的充血,水腫等病理改變。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用中應(yīng)選擇較為理想的能量密度,以降低口腔軟組織的損傷。
【圖文】：

圖1.1不同光敏劑濃度和孵育時(shí)間的平板菌落計(jì)數(shù)結(jié)果根據(jù)平板菌落計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，在光敏劑濃度選擇中，各時(shí)間組中均為濃度40林g/ml組對(duì)5.mlltans的殺傷效果最好，與同組其它濃度相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<o.05)。在光敏劑孵育時(shí)間選擇中，濃度為10林g/m!組中，孵育時(shí)間smin組與相同濃度的其它孵育時(shí)間組相比對(duì)s.mutan:的殺傷效果明顯，_且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。光敏劑濃度為20林g/ml、40林g/ml和60林g/ml組中，孵育時(shí)間smin和10min組與同濃度其它時(shí)間組相比對(duì)s.mutan:的殺傷效果明顯，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但二者之間相比沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。從以[各組數(shù)據(jù)結(jié)果中可以看出，光敏劑濃度40林g/m!、孵育時(shí)間smin組合和光敏劑濃度40林g/ml、孵育時(shí)間1omin組合對(duì)5.mlltans的殺傷效果最好，且一者之間相比沒有明顯的統(tǒng)計(jì)一學(xué)差異(P>O.05)。1.2.2不同波長和功率密度的POT平板菌落計(jì)數(shù)結(jié)果本組實(shí)驗(yàn)選擇不同波民及功率密度的HMME一PDT對(duì)體外s.m;，tan:進(jìn)行處理，

1.2.2不同波長和功率密度的POT平板菌落計(jì)數(shù)結(jié)果本組實(shí)驗(yàn)選擇不同波民及功率密度的HMME一PDT對(duì)體外s.m;，tan:進(jìn)行處理，觀察其對(duì)s.mtllan、的殺傷作用，結(jié)果如表1.2、圖1.2:
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R781.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2670187