【摘要】：齲病是一種由口腔中多種因素復合作用所導致的牙體硬組織進行性病損,大量臨床及流行病學調(diào)查結(jié)果顯示,中國居民各年齡段的患齲率均居高不下。齲病中細菌因素為主要的致齲因素,變形鏈球菌為主要致齲菌之一。致齲菌在口腔內(nèi)的產(chǎn)酸代謝活動是齲病產(chǎn)生的直接原因。因此,有效的干擾致齲菌的生長和代謝,即可達到預防控制齲病的目的。針對目前防齲方法的缺陷,探索一種安全有效的新型防齲方法顯得尤為重要。 光動力療法(Photodynamic therapy, PDT)是一種有效的抗微生物療法,其滅活細菌的作用受到越來越多的關(guān)注,它可有效治療細菌性疾病而不產(chǎn)生耐藥性,有利于在齲病預防中的應用。國內(nèi)外已有應用PDT方法作用于體外游離菌及人工齲口腔生物膜菌斑中變形鏈球菌的研究,取得了良好的殺傷效果。本課題就是通過優(yōu)化、選擇合適的PDT參數(shù),在構(gòu)建的大鼠齲齒模型上探討PDT的防齲作用及安全性。目的： 通過應用532nm和630nm的半導體激光器和光敏劑血卟啉單甲醚(Hematoporyrin monomethyl Ether, HMME)對體外培養(yǎng)的變形鏈球菌(Streptococcus mutans, S.mutans)進行光動力治療,優(yōu)化光敏劑孵育時間、濃度,選擇適宜波長的激光器和激光照射參數(shù)；建立大鼠齲齒模型并進行光動力實驗,從而探討不同能量密度的PDT對大鼠口腔中S.mutans的殺傷作用、對齲齒的預防作用以及對口腔軟組織安全性的影響,為PDT防齲的臨床實踐提供理論與實驗依據(jù)。方法： 1.將S.mutans于37℃恒溫培養(yǎng)箱中復蘇,厭氧培養(yǎng)24h,制備1×108CFU/m1標準菌液待用。 2.應用532nm和630nm的半導體激光器和光敏劑HMME對96孔板內(nèi)的S.mutans菌液進行PDT體外實驗,根據(jù)平板菌落計數(shù)的結(jié)果,選擇適宜波長的激光器、光敏劑孵育時間和激光參數(shù),為下一步的大鼠齲齒模型實驗提供依據(jù)。 3.通過在大鼠口腔接種標準S.mutans菌液,并喂以致齲飼料2000#,構(gòu)建大鼠齲齒模型。 4.將56只Wistar大鼠隨機分成七組：能量密度8.4J/cm2PDT組、能量密度12.6J/cm2pDT組、能量密度16.8J/cm2pDT組和單純光敏劑組、單純激光組、0.2%(質(zhì)量分數(shù))NaF陽性對照組、0.9%(質(zhì)量分數(shù))生理鹽水陰性對照組。選擇波長532nm,功率密度140mw/cm2的半導體激光為光源,40μg/ml HMME為光敏劑,按照上述分組進行PDT處理,每周進行一次,取樣進行平板菌落計數(shù),直至56d實驗結(jié)束。依照平板菌落計數(shù)法觀察各組對患齲牙面上S.mutans的殺傷作用；通過Keyes記分觀察齲齒預防效果；通過組織病理觀察對大鼠口腔軟組織的影響。 結(jié)果： 1.體外實驗光動力照射S.mutans 96孔板的平板菌落計數(shù)結(jié)果顯示,本實驗最適合的PDT組合為光敏劑HMME濃度40μg/m1、孵育時間5min,半導體激光波長532nm、功率密度140mw/cm2。 2.根據(jù)HMME-PDT對致齲模型中S.mutans殺傷作用的平板菌落計數(shù)顯示,與0.9%生理鹽水陰性對照組相比,單純HMME組S.mutans數(shù)量無顯著差異性(P0.05)；單純激光照射組和0.2%NaF陽性對照組,均能使S.mutans數(shù)量(CFU/ml)減少(P0.05),殺菌率為50.38%、38.93%；而PDT防齲處理各組均可使大鼠致齲模型口腔中S. mutans數(shù)量顯著減少(P0.05),能量密度8.4J/cm2、12.6J/cm2、16.8J/cm2pDT組的殺菌率分別為61.49%、96.91%、97.52%。其中能量密度12.6J/cm2、16.8J/cm2pDT組與能量密度8.4J/cm2pDT組相比殺菌率顯著提高(P0.05),而能量密度12.6J/cm2pDT組與能量密度16.8J/cm2pDT組之間沒有顯著性差異(P0.05)。 3.在體視顯微鏡下對大鼠磨牙咬合面窩溝齲齒分別進行Keyes記分。由Keyes記分結(jié)果可以看出,與0.9%生理鹽水陰性對照組相比,PDT處理組、NaF組、單純激光組均有統(tǒng)計學意義(P0.05),單純光敏劑組無統(tǒng)計學意義(P0.05)。各PDT處理組之間相比,隨著能量密度的不斷增加,Keyes記分呈現(xiàn)降低的趨勢,但彼此之間并無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 4.與空白對照組比較,各PDT防齲處理組的口腔軟組織樣本,都出現(xiàn)不同程度的改變。能量密度8.4J/cm2pDT組和12.6J/cm2pDT組中頰、舌粘膜充血、水腫現(xiàn)象的例數(shù)均少于16.8J/cm2pDT組；16.8J/cm2pDT組中,煩、舌粘膜充血水腫例數(shù)明顯增多,也出現(xiàn)了少數(shù)輕度炎癥細胞浸潤現(xiàn)象,偶有牙齦出現(xiàn)充血、角化層變厚現(xiàn)象,與總體樣本數(shù)比較,充血和水腫現(xiàn)象是主要的組織病理反應。 結(jié)論： 1.HMME-PDT對體外S.mutans有明顯的殺傷作用,殺傷效果與光敏劑的孵育時間、濃度、激光照射時間和功率密度相關(guān)。 2.HMME-PDT對大鼠齲齒有明顯的預防作用,其預防效果與能量密度關(guān)系密切。 3.不同能量密度的PDT激光照射牙齒,會造成口腔軟組織不同程度的改變,PDT激光能量密度越大,越容易造成口腔軟組織的充血,水腫等病理改變。在后續(xù)實驗和臨床應用中應選擇較為理想的能量密度,以降低口腔軟組織的損傷。
【圖文】：

圖1.1不同光敏劑濃度和孵育時間的平板菌落計數(shù)結(jié)果根據(jù)平板菌落計數(shù)結(jié)果顯示，在光敏劑濃度選擇中，各時間組中均為濃度40林g/ml組對5.mlltans的殺傷效果最好，與同組其它濃度相比有統(tǒng)計學意義(P<o.05)。在光敏劑孵育時間選擇中，濃度為10林g/m!組中，孵育時間smin組與相同濃度的其它孵育時間組相比對s.mutan:的殺傷效果明顯，_且具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。光敏劑濃度為20林g/ml、40林g/ml和60林g/ml組中，孵育時間smin和10min組與同濃度其它時間組相比對s.mutan:的殺傷效果明顯，且具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但二者之間相比沒有明顯的統(tǒng)計學差異(P>0.05)。從以[各組數(shù)據(jù)結(jié)果中可以看出，光敏劑濃度40林g/m!、孵育時間smin組合和光敏劑濃度40林g/ml、孵育時間1omin組合對5.mlltans的殺傷效果最好，且一者之間相比沒有明顯的統(tǒng)計一學差異(P>O.05)。1.2.2不同波長和功率密度的POT平板菌落計數(shù)結(jié)果本組實驗選擇不同波民及功率密度的HMME一PDT對體外s.m;，tan:進行處理，

1.2.2不同波長和功率密度的POT平板菌落計數(shù)結(jié)果本組實驗選擇不同波民及功率密度的HMME一PDT對體外s.m;，tan:進行處理，觀察其對s.mtllan、的殺傷作用，結(jié)果如表1.2、圖1.2:
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R781.1

【參考文獻】

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1 高學軍;;齲病的多因素特征與發(fā)病的關(guān)鍵因素[J];北京大學學報(醫(yī)學版);2007年01期

2 楊鎮(zhèn)洲;張云嵩;李夢俠;曾林立;李增鵬;王東;王閣;;血卟啉衍生物介導的光動力療法對人肺腺癌細胞殺傷效應的實驗研究[J];第三軍醫(yī)大學學報;2010年05期

3 彭志慶;林居紅;劉明方;鄧一平;;國產(chǎn)水溶性蜂膠對主要致齲鏈球菌及其耐氟菌株致齲性的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2010年08期

4 許小輝;林居紅;劉明方;;光動力學療法影響人工菌斑生物膜形成的掃描電鏡觀察[J];第三軍醫(yī)大學學報;2010年21期

5 徐蓉蓉,岳松齡,胡濤;生物膜中細菌的代謝特點及影響因素[J];國外醫(yī)學.口腔醫(yī)學分冊;2004年01期

6 馮瑾;動物模型在齲病研究中的應用[J];國外醫(yī)學.口腔醫(yī)學分冊;2004年S1期

7 李利;周學東;;齲病相關(guān)細菌的細菌素[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2009年01期

8 張耀超;于丹妮;;口腔致病菌在生物膜狀態(tài)和浮游態(tài)中的特性比較[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2009年02期

9 鄒朝暉;高平;陰慧娟;李迎新;;Investigation of photodynamic therapy on streptococcus mutans of oral biofilm[J];Chinese Optics Letters;2008年12期

10 鄒朝暉;高平;陰慧娟;李迎新;;光動力療法對人工齲口腔生物膜菌斑的影響[J];中國激光;2009年10期

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1 鄭衛(wèi)峰;光動力學療法光敏劑光學特性的實驗研究[D];福建師范大學;2003年

2 顧欣;PDT治療惡性腫瘤的影響因素的研究[D];天津醫(yī)科大學;2003年

3 常紅芳;氧對光動力作用影響的研究[D];西北大學;2009年

4 江山;變異鏈球菌生物膜致齲差異初步研究[D];福建醫(yī)科大學;2010年

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本文編號：2670187