【摘要】：目的：探討睡眠剝奪(SD)對大鼠顳頜關(guān)節(jié)區(qū)P38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響,以及該通路是否介導(dǎo)了SD對大鼠顳頜關(guān)節(jié)的損傷。 方法：1、45只wistar雄性大鼠隨機(jī)分成大平臺對照2d組、對照4d組、對照6d組、對照8d組,SD2d組、SD4d組、SD6d組、SD8d組以及空白對照組,每組5只；各組大鼠在同一籠中飼養(yǎng),實(shí)驗(yàn)前,將各組大鼠放入各自的模型中,不施加任何刺激,使其熟悉環(huán)境一周。SD組大鼠采用改良多平臺法建立睡眠剝奪模型。睡眠剝奪箱的長、寬、高分別為110cm×70cm×40cm,其內(nèi)放置15個高為8cm、直徑為6.3cm的平臺,其周圍注滿水,平臺高于水面約1cm。大鼠在平臺上能自由飲水、攝食,但要睡眠時(shí)因頭觸水中而驚醒,以致被睡眠剝奪。大平臺對照組除平臺直徑增大,其余因素與SD組一致,大鼠在大平臺上可以進(jìn)行部分自由活動,并可以進(jìn)入睡眠�？瞻讓φ战M正常飼養(yǎng)。 2、大鼠在建模成功后分別對實(shí)驗(yàn)2d組、4d組、6d組、8d組、空白對照組大鼠HE染色觀察同一部位的顳頜關(guān)節(jié)切片形態(tài)變化,免疫組化SP法檢測大鼠顳頜關(guān)節(jié)區(qū)(髁突)磷酸化P38MAPK蛋白的表達(dá),并與對照組進(jìn)行比較。 3、曠場實(shí)驗(yàn)：將大鼠放已制備好的曠場試驗(yàn)箱中。計(jì)算大鼠5min內(nèi)水平活動得分和垂直活動得分。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPASS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1、一般狀態(tài)觀察：實(shí)驗(yàn)中,隨SD時(shí)間延長,SD組大鼠有恐慌、行為反應(yīng)敏感、激烈等表現(xiàn)；對照組則表現(xiàn)正常。 2、HE染色觀察：對照組大鼠髁狀突軟骨由淺入深依次分為纖維性關(guān)節(jié)表面帶、多細(xì)胞帶、纖維軟骨帶和鈣化軟骨帶。對照組髁突、關(guān)節(jié)盤均未見明顯變化。SD2d組、4d組可見大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁突表面部分膠原纖維水腫、松解,部分關(guān)節(jié)盤出現(xiàn)炎性反應(yīng)。SD6d組組織變化較明顯,關(guān)節(jié)盤出現(xiàn)玻璃樣變性、溶解斷裂,甚至形成裂隙,髁突纖維軟骨內(nèi)有的骨細(xì)胞消失,骨陷窩空虛。SD8d組與SD6d組大鼠顳頜關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)變化類似,部分標(biāo)本結(jié)構(gòu)較6d組減輕。 3、免疫組化SP法顯示：磷酸化MKK6主要在細(xì)胞質(zhì)表達(dá),陽性染色呈棕黃色或黃色。對照組少見磷酸化MKK6陽性細(xì)胞,SD組中磷酸化MKK6陽性細(xì)胞較對照組增多(P0.05),染色深棕,且隨SD時(shí)間延長逐漸增多,于SD6d達(dá)到峰值。磷酸化P38MAPK主要在細(xì)胞核表達(dá),少量在細(xì)胞質(zhì)表達(dá),陽性染色呈棕黃色或黃色。對照組少見磷酸化P38MAPK陽性細(xì)胞,SD組中磷酸化P38MAPK陽性細(xì)胞較對照組增多(P0.05),染色深棕,且隨SD時(shí)間延長逐漸增多,于SD6d達(dá)到峰值。 4、曠場試驗(yàn)結(jié)果顯示：空白對照組與大平臺對照組比較,大鼠水平活動評分、垂直活動均無差異(P0.05)。SD2d、4d、6d、8d組與相應(yīng)大平臺對照組比較,SD組大鼠水平活動評分、垂直活動評分均明顯高于對照組(P0.05) 結(jié)論：曠場試驗(yàn)結(jié)果顯示該睡眠剝奪模型是理想的心理應(yīng)激模型,能夠有效模擬人類受到外界因素影響后的情緒心理變化。HE結(jié)果顯示,與對照組比較,SD組大鼠顳頜關(guān)節(jié)的結(jié)構(gòu)在睡眠剝奪4d時(shí)開始出現(xiàn)明顯的改變,表現(xiàn)為髁突表面部分區(qū)域凹凸不平,表面膠原纖維水腫、松解。關(guān)節(jié)盤出現(xiàn)炎性反應(yīng),于睡眠剝奪6d時(shí)損傷最嚴(yán)重,8d時(shí)出現(xiàn)一定的適應(yīng)性改變。免疫組化結(jié)果顯示,與對照組比較,磷酸化MKK6、磷酸化P38MAPK陽性細(xì)胞數(shù)隨SD時(shí)間延長而增多,于SD6d達(dá)到高峰。本研究結(jié)果表明睡眠剝奪應(yīng)激性的激活了大鼠顳頜關(guān)節(jié)區(qū)P38MAPK通路,該通路可能介導(dǎo)了對大鼠顳頜關(guān)節(jié)區(qū)的損傷過程。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R782.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2668379