【摘要】：[目的]通過(guò)建立模擬微重力環(huán)境,在體外對(duì)SD大鼠髁突軟骨細(xì)胞進(jìn)行三維培養(yǎng),探討模擬微重力環(huán)境對(duì)軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響,為髁突軟骨組織工程的種子細(xì)胞培養(yǎng)提供研究基礎(chǔ)。[方法]取出生l-3d的SD大鼠的髁突軟骨組織塊進(jìn)行體外培養(yǎng),獲得髁突軟骨細(xì)胞,繼續(xù)進(jìn)行傳代培養(yǎng),取第3代細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色、II型膠原免疫組化染色進(jìn)行鑒定。取第6代髁突軟骨細(xì)胞接種于微載體cytodex-3上,放入The Rotary Cell Culture SystemTM(RCCS)旋轉(zhuǎn)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)所模擬的微重力環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng);以同一批同體積接種了細(xì)胞的微載體置于地面靜止條件下進(jìn)行對(duì)照培養(yǎng)。培養(yǎng)7d后,倒置相差顯微鏡及掃描電鏡下觀察,并提取兩組細(xì)胞的總RNA,進(jìn)行Real-time Quantitative-PCR檢測(cè),對(duì)比兩組細(xì)胞的成軟骨相關(guān)基因Sox9,col-IIαl,Aggrecan及與軟骨細(xì)胞去分化傾向相關(guān)的col-I αl表達(dá)的差異。[結(jié)果]1.采用組織塊培養(yǎng)法獲取的P1代髁突軟骨細(xì)胞,呈多角形,細(xì)胞核大而圓,排列緊密,呈“鋪路石”樣。P3代髁突軟骨細(xì)胞,形態(tài)與原代細(xì)胞相似,生長(zhǎng)曲線呈S型,具有較好的增殖能力,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色及II型膠原免疫組化染色均為陽(yáng)性。P6代時(shí),長(zhǎng)梭形細(xì)胞的比列明顯增高,呈“魚群”狀排列,呈現(xiàn)去分化形態(tài)。2.采用倒置相差顯微鏡及掃描電鏡觀察微載體cytodex-3上髁突軟骨細(xì)胞,可見細(xì)胞黏附在微載體上,并有效的生長(zhǎng)及增殖。3.在模擬微重力環(huán)境中培養(yǎng)髁突軟骨細(xì)胞7d,髁突軟骨細(xì)胞col-Iαl,col-Ⅱα1,Aggrecan的mRNA的表達(dá)量低于地面靜止?fàn)顟B(tài)下的培養(yǎng),而Sox9的mRNA表達(dá)量相對(duì)升高。[結(jié)論]1.采用組織塊培養(yǎng)法建立髁突軟骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)模型成功有效。2.髁突軟骨細(xì)胞可黏附在微載體cytodex-3的表面進(jìn)行生長(zhǎng)增殖,cytodex-3能有效增加培養(yǎng)空間,利于髁突軟骨細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。3.微重力生物反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)髁突軟骨細(xì)胞,軟骨細(xì)胞去分化傾向相關(guān)基因表達(dá)降低,去分化速度得到延緩。成軟骨相關(guān)上游基因表達(dá)升高,表明微重力對(duì)軟骨細(xì)胞表型的維持具有一定意義。
【圖文】：

起初單個(gè)散在生長(zhǎng)，生長(zhǎng)至３ｄ時(shí)，成簇形態(tài)明顯，細(xì)胞簇之間間隙較大。培養(yǎng)逡逑至５－７ｄ時(shí)，細(xì)胞簇之間開始融合，細(xì)胞與細(xì)胞開始緊密連接，細(xì)胞形態(tài)差別較逡逑大。（圖２）逡逑■逡逑圖２．第三代ＭＣＣ細(xì)胞成簇生長(zhǎng)，細(xì)胞緊密連接，邊界清晰。（Ａ邋：倒置顯微鏡逡逑ｘｌＯＯ邋Ｂ：倒置顯微鏡ｘ４００）逡逑１３逡逑

圖１第一代髁突軟骨細(xì)胞，細(xì)胞較圓，胞核較大，呈“鋪路石”樣結(jié)構(gòu)（Ａ邋：倒．逡逑置顯微鏡ｘｌＯＯ邋Ｂ：倒置顯微鏡＞＜４００）逡逑第三代髁突軟骨細(xì)胞接種６ｈ后貼壁基本完成，細(xì)胞呈多角形，形態(tài)不規(guī)則。逡逑起初單個(gè)散在生長(zhǎng)，生長(zhǎng)至３ｄ時(shí)，，成簇形態(tài)明顯，細(xì)胞簇之間間隙較大。培養(yǎng)逡逑至５－７ｄ時(shí)，細(xì)胞簇之間開始融合，細(xì)胞與細(xì)胞開始緊密連接，細(xì)胞形態(tài)差別較逡逑大。（圖２）逡逑
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R782.6

【參考文獻(xiàn)】

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1 湯納平;李華;邱云良;周國(guó)民;王雁;馬t

本文編號(hào)：2664652