【摘要】：[目的]通過建立模擬微重力環(huán)境,在體外對SD大鼠髁突軟骨細胞進行三維培養(yǎng),探討模擬微重力環(huán)境對軟骨細胞生物學(xué)特性的影響,為髁突軟骨組織工程的種子細胞培養(yǎng)提供研究基礎(chǔ)。[方法]取出生l-3d的SD大鼠的髁突軟骨組織塊進行體外培養(yǎng),獲得髁突軟骨細胞,繼續(xù)進行傳代培養(yǎng),取第3代細胞進行甲苯胺藍染色、II型膠原免疫組化染色進行鑒定。取第6代髁突軟骨細胞接種于微載體cytodex-3上,放入The Rotary Cell Culture SystemTM(RCCS)旋轉(zhuǎn)細胞培養(yǎng)系統(tǒng)所模擬的微重力環(huán)境中進行培養(yǎng);以同一批同體積接種了細胞的微載體置于地面靜止條件下進行對照培養(yǎng)。培養(yǎng)7d后,倒置相差顯微鏡及掃描電鏡下觀察,并提取兩組細胞的總RNA,進行Real-time Quantitative-PCR檢測,對比兩組細胞的成軟骨相關(guān)基因Sox9,col-IIαl,Aggrecan及與軟骨細胞去分化傾向相關(guān)的col-I αl表達的差異。[結(jié)果]1.采用組織塊培養(yǎng)法獲取的P1代髁突軟骨細胞,呈多角形,細胞核大而圓,排列緊密,呈“鋪路石”樣。P3代髁突軟骨細胞,形態(tài)與原代細胞相似,生長曲線呈S型,具有較好的增殖能力,對細胞進行甲苯胺藍染色及II型膠原免疫組化染色均為陽性。P6代時,長梭形細胞的比列明顯增高,呈“魚群”狀排列,呈現(xiàn)去分化形態(tài)。2.采用倒置相差顯微鏡及掃描電鏡觀察微載體cytodex-3上髁突軟骨細胞,可見細胞黏附在微載體上,并有效的生長及增殖。3.在模擬微重力環(huán)境中培養(yǎng)髁突軟骨細胞7d,髁突軟骨細胞col-Iαl,col-Ⅱα1,Aggrecan的mRNA的表達量低于地面靜止?fàn)顟B(tài)下的培養(yǎng),而Sox9的mRNA表達量相對升高。[結(jié)論]1.采用組織塊培養(yǎng)法建立髁突軟骨細胞的體外培養(yǎng)模型成功有效。2.髁突軟骨細胞可黏附在微載體cytodex-3的表面進行生長增殖,cytodex-3能有效增加培養(yǎng)空間,利于髁突軟骨細胞進行擴增培養(yǎng)。3.微重力生物反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)髁突軟骨細胞,軟骨細胞去分化傾向相關(guān)基因表達降低,去分化速度得到延緩。成軟骨相關(guān)上游基因表達升高,表明微重力對軟骨細胞表型的維持具有一定意義。
【圖文】：

起初單個散在生長，生長至３ｄ時，成簇形態(tài)明顯，細胞簇之間間隙較大。培養(yǎng)逡逑至５－７ｄ時，細胞簇之間開始融合，細胞與細胞開始緊密連接，細胞形態(tài)差別較逡逑大。（圖２）逡逑■逡逑圖２．第三代ＭＣＣ細胞成簇生長，細胞緊密連接，邊界清晰。（Ａ邋：倒置顯微鏡逡逑ｘｌＯＯ邋Ｂ：倒置顯微鏡ｘ４００）逡逑１３逡逑

圖１第一代髁突軟骨細胞，細胞較圓，胞核較大，呈“鋪路石”樣結(jié)構(gòu)（Ａ邋：倒．逡逑置顯微鏡ｘｌＯＯ邋Ｂ：倒置顯微鏡＞＜４００）逡逑第三代髁突軟骨細胞接種６ｈ后貼壁基本完成，細胞呈多角形，形態(tài)不規(guī)則。逡逑起初單個散在生長，生長至３ｄ時，，成簇形態(tài)明顯，細胞簇之間間隙較大。培養(yǎng)逡逑至５－７ｄ時，細胞簇之間開始融合，細胞與細胞開始緊密連接，細胞形態(tài)差別較逡逑大。（圖２）逡逑
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R782.6

【參考文獻】

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1 湯納平;李華;邱云良;周國民;王雁;馬t

本文編號：2664652