【摘要】：目的:研究4,5,7-三羥基異黃酮(Genistein)對(duì)Tca8113舌癌細(xì)胞株增殖及侵襲的影響,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步的探討。 方法:以Tca8113舌癌細(xì)胞株為研究對(duì)象,以不同濃度的Genistein為施加因素,并以0.1%DMSO設(shè)立對(duì)照組。MTT法檢測(cè)Genistein對(duì)Tca8113細(xì)胞增殖的影響;以碘化丙啶(PI)和Annex in V-FITC雙染色法定量檢測(cè)細(xì)胞凋亡并流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Genistein對(duì)Tca8113細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)的影響;以細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Genistein對(duì)Tca8113細(xì)胞侵襲的影響;采用明膠酶譜法及凝膠圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)Genistein對(duì)胞外分泌MMP-2蛋白的影響;采用Westernblot及細(xì)胞免疫組織化學(xué)檢測(cè)Genistein對(duì)胞內(nèi)MMP-2蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果: 1:Genistein(10μg/mL、15μg/mL)組與對(duì)照組相比均能顯著的抑制Tca8113細(xì)胞的增殖且15μg/mL時(shí)細(xì)胞增殖抑制率最為明顯(P0.01),其抑制率與濃度和時(shí)間呈依賴性。 2:流式細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期檢測(cè)顯示:Genistein(15μg/mL)在24h和48h時(shí)與對(duì)照組相比都致使Tca8113細(xì)胞的凋亡數(shù)增加(P0.05),細(xì)胞周期分析顯示24h時(shí)S期細(xì)胞數(shù)增加,48h時(shí)細(xì)胞S期細(xì)胞比率明顯降低,細(xì)胞生長(zhǎng)周期主要阻滯在G2期,G2/G1比值增大。 3:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Bcl-2、Bax、caspase-3顯示Genistein可使Tca8113細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)降低,Bax、caspase-3蛋白表達(dá)量增加。表達(dá)量與濃度有關(guān)。 4:劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示Genistein可明顯抑制Tca8113細(xì)胞的遷移侵襲,Genistein組與對(duì)照組之間有明顯的差異(P0.01)。 5:Genistein可使細(xì)胞外分泌的活性MMP-2及MMP-2表達(dá)下調(diào),活性MMP-2下調(diào)18.75%,MMP-2下調(diào)28.31%;Westernblot及細(xì)胞免疫組織化學(xué)均檢測(cè)到Genistein組與對(duì)照組相比能降低胞內(nèi)MMP-2蛋白的表達(dá)。 結(jié)論: 1:Genistein可明顯的抑制Tca8113舌癌細(xì)胞株的增殖能力,并促使其發(fā)生凋亡。引起細(xì)胞周期的改變,減少DNA合成期細(xì)胞并將細(xì)胞周期阻滯在G2期。 2:推測(cè)Genistein對(duì)Tca8113細(xì)胞的促凋亡作用是通過(guò)改變細(xì)胞內(nèi)Bcl-2、Bax及caspase-3蛋白的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的,其表達(dá)的改變可能與Genistein促凋亡的信號(hào)通路有關(guān)。 3:Genistein可以明顯抑制Tca8113舌癌細(xì)胞株的體外遷移侵襲能力,并減少Tca8113胞內(nèi)和胞外分泌的MMP-2蛋白的表達(dá)。
【圖文】：

A B圖 1 A：0.1%DMSO 對(duì)照組 48h 時(shí)的細(xì)胞形態(tài)；B：15μg/mlGenistein 組 48h 時(shí)細(xì)胞形態(tài)(倒置顯微鏡 ×200)Fig1 A：Cell morphous of 0.1%DMSO group at 48 hour；B：Cell morphous of 15μg/mlGenistein group at 48 hour (IM ×200)2.2 不同濃度 Genistein 對(duì) Tca8113 增殖的影響Genistein 對(duì) Tca8113 細(xì)胞 48h 時(shí)的抑制結(jié)果(圖 2)，可以看出細(xì)胞在 Genistein濃度為 80~10μg/ml 時(shí)細(xì)胞增殖受到強(qiáng)烈的抑制(P<0.05)；10μg/ml~1.25μg/ml 時(shí)變化未見(jiàn)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；0.3125μg/ml 時(shí)細(xì)胞可見(jiàn)輕微的增殖；10μg/ml~1.25μg/ml 時(shí)與 0.2%DMSO 及空白組之間未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。48h不同濃度Genistein對(duì)Tca8113增殖的抑制0.70.8

- 14 -圖4A：Genistein作用Tca8113細(xì)胞24h時(shí)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡；B：對(duì)照組24h時(shí)Tca8113細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡；C：Genistein作用Tca8113細(xì)胞48h時(shí)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡；D：：對(duì)照組48h時(shí)Tca8113細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡。Fig4 A：The cell cycle and apoptosis of Tca8113 effected by Genistein at 24h；B：The cell cycleand apoptosis of Tca8113 in the control group at 24h；C：The cell cycle and apoptosis of Tca8113effected by Genistein at 48h；D：The cell cycle and apoptosis of Tca8113 in the control group at48h
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R739.8

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2663729