【摘要】：目的:研究4,5,7-三羥基異黃酮(Genistein)對Tca8113舌癌細胞株增殖及侵襲的影響,并對其作用機制進行初步的探討。 方法:以Tca8113舌癌細胞株為研究對象,以不同濃度的Genistein為施加因素,并以0.1%DMSO設立對照組。MTT法檢測Genistein對Tca8113細胞增殖的影響;以碘化丙啶(PI)和Annex in V-FITC雙染色法定量檢測細胞凋亡并流式細胞儀測定細胞周期;流式細胞術檢測Genistein對Tca8113細胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達的影響;以細胞劃痕實驗及transwell侵襲實驗檢測Genistein對Tca8113細胞侵襲的影響;采用明膠酶譜法及凝膠圖像分析系統(tǒng)檢測Genistein對胞外分泌MMP-2蛋白的影響;采用Westernblot及細胞免疫組織化學檢測Genistein對胞內MMP-2蛋白表達的影響。 結果: 1:Genistein(10μg/mL、15μg/mL)組與對照組相比均能顯著的抑制Tca8113細胞的增殖且15μg/mL時細胞增殖抑制率最為明顯(P0.01),其抑制率與濃度和時間呈依賴性。 2:流式細胞凋亡及細胞周期檢測顯示:Genistein(15μg/mL)在24h和48h時與對照組相比都致使Tca8113細胞的凋亡數(shù)增加(P0.05),細胞周期分析顯示24h時S期細胞數(shù)增加,48h時細胞S期細胞比率明顯降低,細胞生長周期主要阻滯在G2期,G2/G1比值增大。 3:流式細胞術檢測Bcl-2、Bax、caspase-3顯示Genistein可使Tca8113細胞中Bcl-2蛋白的表達降低,Bax、caspase-3蛋白表達量增加。表達量與濃度有關。 4:劃痕實驗及transwell侵襲實驗顯示Genistein可明顯抑制Tca8113細胞的遷移侵襲,Genistein組與對照組之間有明顯的差異(P0.01)。 5:Genistein可使細胞外分泌的活性MMP-2及MMP-2表達下調,活性MMP-2下調18.75%,MMP-2下調28.31%;Westernblot及細胞免疫組織化學均檢測到Genistein組與對照組相比能降低胞內MMP-2蛋白的表達。 結論: 1:Genistein可明顯的抑制Tca8113舌癌細胞株的增殖能力,并促使其發(fā)生凋亡。引起細胞周期的改變,減少DNA合成期細胞并將細胞周期阻滯在G2期。 2:推測Genistein對Tca8113細胞的促凋亡作用是通過改變細胞內Bcl-2、Bax及caspase-3蛋白的表達來實現(xiàn)的,其表達的改變可能與Genistein促凋亡的信號通路有關。 3:Genistein可以明顯抑制Tca8113舌癌細胞株的體外遷移侵襲能力,并減少Tca8113胞內和胞外分泌的MMP-2蛋白的表達。
【圖文】：

A B圖 1 A：0.1%DMSO 對照組 48h 時的細胞形態(tài)；B：15μg/mlGenistein 組 48h 時細胞形態(tài)(倒置顯微鏡 ×200)Fig1 A：Cell morphous of 0.1%DMSO group at 48 hour；B：Cell morphous of 15μg/mlGenistein group at 48 hour (IM ×200)2.2 不同濃度 Genistein 對 Tca8113 增殖的影響Genistein 對 Tca8113 細胞 48h 時的抑制結果(圖 2)，可以看出細胞在 Genistein濃度為 80~10μg/ml 時細胞增殖受到強烈的抑制(P<0.05)；10μg/ml~1.25μg/ml 時變化未見明顯的統(tǒng)計學差異(P>0.05)；0.3125μg/ml 時細胞可見輕微的增殖；10μg/ml~1.25μg/ml 時與 0.2%DMSO 及空白組之間未見統(tǒng)計學差異(P>0.05)。48h不同濃度Genistein對Tca8113增殖的抑制0.70.8

- 14 -圖4A：Genistein作用Tca8113細胞24h時細胞周期及細胞凋亡；B：對照組24h時Tca8113細胞的細胞周期及凋亡；C：Genistein作用Tca8113細胞48h時細胞周期及細胞凋亡；D：：對照組48h時Tca8113細胞的細胞周期及凋亡。Fig4 A：The cell cycle and apoptosis of Tca8113 effected by Genistein at 24h；B：The cell cycleand apoptosis of Tca8113 in the control group at 24h；C：The cell cycle and apoptosis of Tca8113effected by Genistein at 48h；D：The cell cycle and apoptosis of Tca8113 in the control group at48h
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R739.8

【參考文獻】

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1 劉亞莉,遲素敏,朱運龍,薛采芳;雌二醇對人舌鱗癌Tca8113細胞增殖的影響[J];第四軍醫(yī)大學學報;2002年12期

2 張群;張紅闖;李強;邢樹忠;;4、5、7-三羥基異黃酮對人舌癌細胞株Tca8113體外遷移侵襲能力的影響[J];口腔醫(yī)學;2009年03期

3 張壯;李寧毅;陳萬濤;尚偉;;口腔鱗癌中MMP-1、MMP-2、uPA的表達與腫瘤侵襲和轉移的關系[J];實用口腔醫(yī)學雜志;2006年04期

4 Min Ho JEONG,Young Hee JIN,Eun Young KANG,Wol Soon JO,Hwan Tae PARK,Jae Dong LEE,Yeo Jin YOO,Soo Jin JEONG;The modulation of radiation-induced cell death by genistein in K562 cells:Activation of thymidine kinase 1[J];Cell Research;2004年04期

5 楊新穎,倪沛洲,陸濤;蒽二酮類抗腫瘤藥物的研究進展[J];藥學進展;2002年05期

6 劉亞莉,遲素敏,朱運龍,鐘延清,薛采芳;雌激素受體在人舌鱗癌中的表達及β-雌二醇對其增殖的影響[J];中國應用生理學雜志;2003年01期

7 周永;糜漫天;楊鎮(zhèn)洲;朱俊東;許紅霞;;三羥異黃酮對正常和輻射損傷小鼠骨髓造血細胞周期的影響[J];中華放射醫(yī)學與防護雜志;2006年05期

8 顧巖,陳積圣,周曉東,高勁松;Genistein抑制裸鼠肝癌移植瘤侵襲性生長[J];中華肝膽外科雜志;2005年03期

9 劉浩,俞光巖;染料木黃酮抗涎腺腺樣囊性癌遠處轉移的實驗研究[J];中華口腔醫(yī)學雜志;2004年05期

10 胡曉文;黃洪章;謝謙;;阿霉素對Tca8113細胞端粒酶活性及端粒結合蛋白表達的影響[J];中華口腔醫(yī)學研究雜志(電子版);2008年02期

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本文編號：2663729